本文關鍵詞：龍葵活性成分澳洲茄胺對腸癌細胞生物學行為的影響及其作用機制

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【摘要】：研究目的:澳洲茄胺(Solasodine)是中藥龍葵的活性成分,本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)由龍葵等藥物組成的中藥灌腸方具有良好的抗腸癌作用,澳洲茄胺是中藥灌腸方的有效成分之一,基于臨床實踐結果及前期實驗探索,本課題擬研究澳洲茄胺對分化程度不同的的腸癌細胞株(HCT116、HT-29、SW480)凋亡、侵襲、遷移及相關基因表達的影響,進一步闡明澳洲茄胺抑制腸癌細胞增殖的可能機制,為中醫(yī)藥治療腸癌提供新的理論依據(jù)。研究方法:1采用MTT法,觀察澳洲茄胺對人腸癌細胞HCT116、HT-29、SW480的增殖抑制作用。2采用流式細胞術(Flow cytometry,FCM)研究澳洲茄胺對腸癌HCT116、HT-29、SW480細胞凋亡比例的影響。3 Hoechst 33258染色實驗,研究澳洲茄胺對腸癌HCT116、HT-29、SW480染色質形態(tài)的影響。4 Transwell小室侵襲實驗檢測細胞侵襲能力的變化。5劃痕實驗檢測細胞遷移能力的變化。6采用RT-qPCR法檢測澳洲茄胺對腸癌HCT116、HT-29、SW480細胞中凋亡、侵襲轉移及AKT/GSK3-β/β-catenin通路基因表達的影響。7采用Western blotting實驗檢測澳洲茄胺對腸癌HCT116、HT-29、SW480細胞中凋亡、侵襲轉移及AKT/GSK3-β/β-catenin通路蛋白表達的影響。8采用免疫熒光實驗檢測澳洲茄胺對腸癌HCT116、HT-29、SW480細胞中β-catenin胞漿聚集及核易位表達的影響。9 采用 IGF-1 主動調控腸癌 HCT116、HT-29、SW480 細胞 AKT/GSK3-β/β-catenin通路的轉錄活性,Western blotting實驗檢測AKT/GSK3-β/β-catenin通路及細胞凋亡蛋白的變化。研究結果:1 MTT實驗提示,澳洲茄胺能有效抑制三種分化程度不同的腸癌細胞HCT116、HT-29、SW480增殖,并呈劑量、時間依賴性。2流式細胞術結果提示澳洲茄胺能誘導HCT116、HT-29、SW480細胞凋亡且與濃度呈正相關。Hoechst33258熒光染色實驗觀察到澳洲茄胺使得細胞核出現(xiàn)核固縮及碎裂。3 RT-qPCR實驗結果顯示,澳洲茄胺作用于HCT116、HT-29、SW480細胞后,Bcl-2、Bcl-xl、Survivin基因表達下降,Bax、Bak基因表達上升。Western blotting實驗結果顯示,澳洲茄胺作用于HCT116、HT-29、SW480細胞后,Bcl-2、Bcl-xl、Caspase-9蛋白表達下降,Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-8、Cleaved PARP 蛋白表達上升。4 Transwell小室侵襲實驗提示澳洲茄胺作用于HCT116、HT-29、SW480細胞后,穿過小室的細胞數(shù)量明顯減少,侵襲能力減弱,并呈劑量依賴型;劃痕實驗檢測出3株細胞在藥物作用下劃痕愈合速度明顯減弱,提示細胞遷移能力減弱,與藥物濃度相關。5 RT-qPCR實驗結果顯示,澳洲茄胺作用于HCT116、HT-29、SW480細胞后,MMP-2、MMP-9、MMP-14 基因表達減弱。Western blotting 實驗結果顯示,MMP-2、MMP-9、MMP-14蛋白表達下調,E-cadherin蛋白表達增強。6澳洲茄胺作用有效抑制AKT/GSK3-β/β-catenin通路的活性,RT-qPCR實驗顯示,AKT、β-catenin基因表達下調,GSK3-β表達上調;Western blotting實驗結果顯示,澳洲茄胺能下調 AKT、p-AKT、p-GSK3-β、β-catenin 及其核蛋白表達,同時 GSK3-β、p-β-catenin表達增強。免疫熒光實驗結果顯示澳洲茄胺抑制了腸癌細胞中β-catenin的胞漿聚集與核轉移。7 AKT/GSK3-β/β-catenin 信號通路激動劑 IGF-1 作用于腸癌 HCT116、HT-29、SW480細胞后,Western blotting實驗結果表明AKT、β-catenin、Bcl-2蛋白表達增多,GSK3-β、Bax、Cleaved PARP表達減弱,提示這條信號通路的活化抑制腸癌細胞的凋亡;而澳洲茄胺單藥及澳洲茄胺聯(lián)合IGF-1作用于3株腸癌細胞后,Western blotting實驗結果顯示IGF-1部分逆轉了澳洲茄胺對AKT/GSK3-β/β-catenin信號通路的抑制以及誘導細胞凋亡蛋白表達的功效,提示澳洲茄胺誘導的腸癌細胞凋亡可能與抑制AKT/GSK3-β/β-catenin信號活性有關。研究結論:1澳洲茄胺能有效抑制人腸癌細胞HCT116、HT-29、SW480增殖并通過增加Bax/Bcl-2 比例、活化 Casβase-3、Casβase-8、Casβase-9、PARP 誘導細胞發(fā)生凋亡。2澳洲茄胺能抑制腸癌細胞侵襲遷移,其機制可能與下調MMP-2、MMP-9、MMP-14的表達,上調E-cadherin的表達有關。3澳洲茄胺能抑制AKT/GSK3-β/β-catenin信號通路的激活,其誘導細胞凋亡的機制可能與抑制該通路的激活有關。
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R273

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 壯雨雯;周錦勇;吳堅;劉沈林;;澳洲茄胺誘導腸癌HCT-116細胞凋亡的實驗研究[J];南京中醫(yī)藥大學學報;2017年01期

2 宋樂樂;李月敏;;大腸癌干細胞相關Wnt信號通路調控分子的研究進展[J];中國腫瘤生物治療雜志;2015年06期

3 陳來;郭權;金德忠;張潔;李姍姍;黃云;羅小泉;;澳洲茄堿和澳洲茄胺抑制肺癌細胞的構效比較[J];江西中醫(yī)藥;2015年12期

4 壯雨雯;周錦勇;劉沈林;;扶正祛瘀法治療晚期胃癌之藥對舉隅[J];環(huán)球中醫(yī)藥;2015年09期

5 伊日貴;徐曉艷;李時榮;;腫瘤侵襲轉移機制研究進展[J];中華實用診斷與治療雜志;2014年10期

6 俞晨;許美靜;居文政;劉沈林;;灌腸方治療腸癌有效成分測定[J];遼寧中醫(yī)藥大學學報;2014年05期

7 韋柳婷;馮潔;莫書榮;;PI3K-Akt信號通路與腫瘤相關性的研究進展[J];腫瘤學雜志;2014年04期

8 邵紅梅;馮瑞;朱紅;謝娟;;中國人群結直腸癌危險因素的Meta分析[J];中國慢性病預防與控制;2014年02期

9 胡兵;安紅梅;沈克平;史秀峰;鄧珊;魏蒙蒙;;龍葵對人結腸癌RKO細胞粘附、移動和侵襲的影響[J];中藥材;2013年06期

10 劉沈林;;大腸癌中醫(yī)辨治特點與認識[J];江蘇中醫(yī)藥;2012年08期

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本文編號：1295342