本文關(guān)鍵詞：低糖對肝癌細(xì)胞EMT相關(guān)遷移的影響及HSF1在其中的作用和機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： 肝癌 上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化 遷移 熱休克轉(zhuǎn)錄因子1 葡萄糖限制 Snail

【摘要】：能量代謝重編碼是腫瘤的第九大特征,限制葡萄糖供應(yīng)的饑餓療法可能是一種安全、有效的治療方法。然而,葡萄糖饑餓對肝癌細(xì)胞惡性表型的影響及相關(guān)分子機(jī)制目前仍不清楚。本研究采用低糖(LG)和對照高糖(Control)培養(yǎng)基培養(yǎng)肝癌細(xì)胞,通過Transwell遷移實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測低糖對肝癌細(xì)胞遷移能力的影響;再用sh RNA干擾HSF1以及HSF1-sh RES基因回補(bǔ)策略,分析HSF1在LG影響肝癌細(xì)胞遷移能力中的作用;最后通過生物信息學(xué)分析、染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(CHIP)以及熒光素酶報道基因活性測定進(jìn)一步探討相關(guān)的分子機(jī)制,為肝癌治療提供新的策略。第一部分低糖對肝癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)及遷移能力的影響TGF-β1是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的有力誘導(dǎo)劑,經(jīng)5ng/m L TGF-β1處理肝癌細(xì)胞48h后,Control組肝癌細(xì)胞出現(xiàn)典型EMT樣形態(tài)學(xué)變化,細(xì)胞由多邊形向成纖維樣細(xì)胞形態(tài)改變,而LG組無顯著變化。熒光定量PCR和蛋白印跡方法檢測EMT相關(guān)的標(biāo)志物表達(dá)情況,Transwell遷移實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)測定細(xì)胞遷移能力的改變。結(jié)果顯示,培養(yǎng)細(xì)胞48h后,LG組N-cadherin的表達(dá)水平較Control組明顯降低,而E-cadherin的表達(dá)水平較Control組顯著增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,培養(yǎng)細(xì)胞30h后LG組穿膜的細(xì)胞數(shù)較Control組明顯減少,差異有顯著性。劃痕實(shí)驗(yàn)顯示與Control組相比LG組劃痕的愈合速度明顯減慢,且LG組劃痕邊緣的細(xì)胞呈上皮細(xì)胞樣,而Control組劃痕邊緣的細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞樣。本部分研究表明LG抑制肝癌細(xì)胞的EMT樣形態(tài)學(xué)改變,抑制其“鈣黏著蛋白轉(zhuǎn)換”及遷移能力。第二部分HSF1在低糖抑制肝癌細(xì)胞EMT及遷移能力中的作用HSF1是一個具有促癌作用的多功能轉(zhuǎn)錄因子,參與腫瘤細(xì)胞的葡萄糖代謝,并促進(jìn)惡性表型和轉(zhuǎn)移。熒光定量PCR和蛋白印跡顯示LG培養(yǎng)持續(xù)下調(diào)HSF1的表達(dá),推測HSF1可能參與葡萄糖饑餓對肝癌細(xì)胞惡性表型的影響。為了確認(rèn)HSF1是否在低糖條件下肝癌細(xì)胞EMT及相關(guān)遷移中發(fā)揮作用,我們構(gòu)建了sh HSF1、對照sh NT以及HSF1基因回補(bǔ)(sh RES),并采用熒光定量PCR和蛋白印跡加以驗(yàn)證。熒光定量PCR和蛋白印跡結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染sh HSF1之后,HSF1表達(dá)水平顯著降低,說明HSF1基因干擾可信;sh RES組HSF1表達(dá)水平較sh HSF1組回升,說明HSF1基因回補(bǔ)策略可抵消干擾作用。此外,通過Transwell和劃痕實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞處理前后肝癌細(xì)胞遷移能力的改變。Transwell試驗(yàn)結(jié)果顯示,與高糖培養(yǎng)相比,低糖培養(yǎng)時Control組和sh NT組穿膜的細(xì)胞數(shù)明顯減少。然而,LG培養(yǎng)條件下,sh HSF1組穿膜的細(xì)胞數(shù)較Control組和sh NT組顯著增加。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Transwell一致,LG培養(yǎng)條件下,sh HSF1組劃痕的愈合速度明顯快于Control和sh NT組。本部分研究結(jié)果表明,HSF1促進(jìn)低糖對肝癌細(xì)胞EMT及遷移能力的抑制作用。第三部分HSF1在低糖抑制肝癌細(xì)胞EMT及遷移能力中的作用機(jī)制Snail是EMT過程中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。通過TRED數(shù)據(jù)庫和啟動子預(yù)測服務(wù)器2.0組合,發(fā)現(xiàn)Snail基因的啟動子序列位于上游的-700bp~299bp。此外,應(yīng)用轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫(Transcription Factors Database)對人Snail基因全長序列進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)Snail啟動子區(qū)域存在熱休克元件(HSE)核心序列5’-n GAAn-3’結(jié)合位點(diǎn)。提示Snail可能是HSF1下游的靶標(biāo)分子,HSF1可能通過直接調(diào)控Snail的轉(zhuǎn)錄水平來調(diào)節(jié)Snail的表達(dá)。通過染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(CHIP)和熒光素酶報道基因活性測定加以驗(yàn)證,結(jié)果顯示:與Control組相比,LG組的相對熒光素酶活性明顯增強(qiáng),而且LG組特異性HSF1抗體結(jié)合的DNA產(chǎn)物量明顯高于Control組,差異具有顯著性。結(jié)果表明LG培養(yǎng)條件下HSF1能與Snail啟動子結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)其表達(dá);而Control培養(yǎng)下HSF1與Snail啟動子結(jié)合能力顯著減弱。結(jié)論1.低糖抑制肝癌細(xì)胞典型的EMT樣形態(tài)學(xué)改變,抑制其“鈣黏著蛋白轉(zhuǎn)換”和遷移能力。2.低糖培養(yǎng)持續(xù)下調(diào)HSF1的表達(dá),HSF1促進(jìn)低糖對肝癌細(xì)胞EMT及相關(guān)的轉(zhuǎn)移能力的抑制作用。3.低糖條件下HSF1通過直接調(diào)控Snail的轉(zhuǎn)錄水平來調(diào)節(jié)EMT相關(guān)分子標(biāo)記物的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳孟超;;肝癌外科治療的近期進(jìn)展[J];中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2006年02期

2 張志敏;;肝癌會遺傳嗎?[J];肝博士;2006年03期

3 徐連根;周晶;雷偉;沈志祥;;瘦素及其受體在肝癌組織中的表達(dá)及意義[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2006年05期

4 魏麗珍;李勝棉;張楠;溫登瑰;周燁;王士杰;;688例肝癌患者發(fā)病特點(diǎn)及診療狀況分析[J];肝臟;2010年02期

5 ;我國科研人員發(fā)現(xiàn)促進(jìn)肝癌生長和轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因[J];臨床薈萃;2010年10期

6 吳生;;盤點(diǎn)誘發(fā)肝癌的7大元兇[J];肝博士;2012年01期

7 鄧慶華;一家四例肝癌報道[J];中國廠礦醫(yī)學(xué);1995年06期

8 王定珠;;觥籌交錯 過度疲勞 肝癌乘機(jī)而入[J];健康博覽;2005年11期

9 笑山,吳蓉蓉;喝咖啡可以減少肝癌發(fā)生率[J];健康之路;2005年04期

10 ;遠(yuǎn)離肝癌 預(yù)防在先[J];農(nóng)民文摘;2006年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 俞順章;穆麗娜;;飲水中藻類毒素與肝癌關(guān)系和控制的研究(摘要)[A];全國腫瘤流行病學(xué)和腫瘤病因?qū)W學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

2 楊秉輝;;肝癌預(yù)防的新話題-非酒精性脂肪性肝病與肝癌[A];第十二屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

3 丁光偉;楊玉秀;徐秋霞;徐存拴;;肝癌多基因表達(dá)異常初步研究[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

4 吳孟超;;肝癌外科治療的近期進(jìn)展[A];第三屆全國重型肝病及人工肝血液凈化學(xué)術(shù)年會論文集（上冊）[C];2007年

5 劉耕陶;孫華北;方亞南;;肝癌發(fā)生的化學(xué)預(yù)防[A];第十次中國生物物理學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2006年

6 阮秀花;田蔥;張效本;張喜梅;;肝癌患者乙型肝炎病毒感染血清流行病學(xué)分析[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

7 阮秀花;田蔥;張效本;張喜梅;;肝癌患者乙型肝炎病毒感染血清流行病學(xué)分析[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

8 呂巖;韓學(xué)鋒;;肝癌患者需求的評估[A];中華醫(yī)學(xué)會醫(yī)學(xué)工程學(xué)分會第八次學(xué)術(shù)年會暨《醫(yī)療設(shè)備信息》創(chuàng)刊20周年慶祝會論文集[C];2006年

9 孫華;魏懷玲;劉耕陶;;雙環(huán)醇對化學(xué)毒物促發(fā)肝癌的防治作用及作用機(jī)制研究[A];2009醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十一屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

10 謝靜媛;戴煒;涂愛民;趙文高;符花;胡應(yīng)龍;;深圳地區(qū)53例肝癌發(fā)生的相關(guān)因素探討[A];全國第2屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會議暨國家中醫(yī)藥管理局第1屆傳染病協(xié)作組會議論文匯編[C];2008年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 湖北宜昌 胡獻(xiàn)國;吸煙與肝癌[N];上海中醫(yī)藥報;2013年

2 四川成都 孫清廉;遠(yuǎn)離肝癌 謹(jǐn)防四大危險因素[N];上海中醫(yī)藥報;2013年

3 特約撰稿 北京朝陽醫(yī)院京西院區(qū)肝膽外科主任 孫文兵;警惕肝癌的過度治療[N];醫(yī)藥導(dǎo)報;2007年

4 健康時報特約記者 孫理;三招不得肝癌[N];健康時報;2008年

5 葉建平;專家提醒肝癌患者保護(hù)生命 重在“三早”防治[N];中國中醫(yī)藥報;2008年

6 通訊員 韋夏 本報記者 鄧宏鷹 鐘少鴻;不良飲食習(xí)慣易誘發(fā)肝癌[N];中國食品報;2009年

7 記者 顧泳;我國肝癌患者占全球55%[N];解放日報;2010年

8 解放軍302醫(yī)院 劉士敬;四成肝癌酒精泡出來的[N];健康時報;2010年

9 記者 顏維琦 曹繼軍;我科學(xué)家揭示肝癌發(fā)生早期分子機(jī)制[N];光明日報;2012年

10 記者 胡德榮;肝癌發(fā)生早期階段分子機(jī)制被揭示[N];健康報;2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳放;TOPK蛋白和肝癌發(fā)生以及相關(guān)調(diào)控機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

2 張怡安;中樞神經(jīng)特異性RNA結(jié)合蛋白NOVA1在肝癌中的表達(dá)及其促進(jìn)腫瘤發(fā)展的潛在分子機(jī)制探究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 殷杰;E3泛素連接酶Prp19對肝癌侵襲的影響及其機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 周宇紅;分化抑制因子ID1在調(diào)控化療誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞“干性”改變中的作用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 王盛;FOXA1基因變異和調(diào)控異常促，

本文編號：1289230