本文關鍵詞：槲皮素對氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜的保護作用研究

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【摘要】：目的:以C57BL/6小鼠為研究對象,采用高脂飲食結合氫醌喂養(yǎng)的方法,模擬干性AMD動物造模,觀察槲皮素對Nrf2/ARE信號通道及下游抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶調(diào)控作用,闡明槲皮素保護氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜的作用機制。方法:將C57BL/6小鼠隨機分組:分別為正常對照組、模型對照組、給藥組;正常對照組,正常飲食飲水;模型組和給藥組均予高脂飲食+氧化物氫醌飲水造模,造成小鼠視網(wǎng)膜氧化損傷,模擬干性AMD動物模型;給藥組,以槲皮素灌胃治療,包括低劑量組100mg/kg/d,中劑量組200mg/kg/d,高劑量組400mg/kg/d;利用透射電鏡掃描,觀察RPE下沉積物厚度和寬度、Bruch膜厚度,評價造模情況及槲皮素對氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜的保護作用;比色法測定小鼠血清SOD、GSH-Px、CAT活性和ROS、MDA含量;熒光定量PCR、western blot檢測槲皮素對小鼠視網(wǎng)膜Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL的轉錄及表達。結果:高脂飲食+氫醌喂養(yǎng),使小鼠視網(wǎng)膜發(fā)生氧化損傷,小鼠視網(wǎng)膜RPE發(fā)生改變,RPE層下可見大量脂性堆積物,Bruch膜明顯增厚,出現(xiàn)干性AMD的典型眼底改變,成功模擬干性AMD動物模型。同正常對照組相比,模型組SOD、GSH-Px、CAT活性顯著下降,ROS、MDA含量增高;同模型組相比,槲皮素治療組SOD、GSH-Px、CAT活性明顯升高,ROS、MDA含量下降。Western blot結果顯示:正常對照組,細胞質(zhì)內(nèi)的Nrf2蛋白表達高于細胞核內(nèi),模型對照組,即發(fā)生氧化應激時,細胞核內(nèi)的Nrf2蛋白表達高于細胞質(zhì),說明發(fā)生氧化應激時,Nrf2蛋白從細胞質(zhì)轉移入細胞核;在細胞質(zhì)中,給藥組Nrf2的表達高于模型組;在細胞核中,低中劑量組Nrf2的表達呈現(xiàn)上升趨勢,但是無明顯差異;同正常組相比,HO-1、NQO-1、GCL等Ⅱ相代謝酶的表達明顯上調(diào),槲皮素治療組同模型組組比表達下調(diào)。PCR結果顯示:同正常對照組相比,模型組Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL的表達明顯升高,同模型組相比,給藥組Nrf2及Ⅱ相解毒酶的表達降低。結論:高脂飲食+氫醌喂養(yǎng)的方法,可以使小鼠視網(wǎng)膜RPE發(fā)生改變,RPE層下出現(xiàn)大量沉積物,Bruch膜明顯增厚,證明該造模方法可以成功模擬干性AMD的動物模型;槲皮素通過激活Nrf2/ARE通道,上調(diào)其下游SOD、GSH-PX、CAT等抗氧化酶的活性,發(fā)揮抗氧化作用;槲皮素可以直接對抗機體內(nèi)高度氧化應激狀態(tài),緩解因氧化應激造成的視網(wǎng)膜組織損傷,從而保護視網(wǎng)膜,延緩AMD的進一步發(fā)展。
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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