本文關(guān)鍵詞：MGF對(duì)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞MEK-ERK信號(hào)通路影響的研究

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【摘要】：研究目的骨骼肌損傷在運(yùn)動(dòng)和訓(xùn)練中非常容易發(fā)生,嚴(yán)重時(shí)可使機(jī)體喪失運(yùn)動(dòng)能力。有研究表明在骨骼肌的損傷修復(fù)過(guò)程中,骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞起著重要作用。損傷后,衛(wèi)星細(xì)胞通過(guò)增殖、遷移,最終融入已損傷的肌細(xì)胞或形成新的肌管和肌細(xì)胞。研究表明機(jī)械生長(zhǎng)因子(MGF)參與了這一過(guò)程。本研究通過(guò)離體實(shí)驗(yàn),觀察阻斷MEK-ERK信號(hào)通路后各個(gè)蛋白的變化情況,探討MGF對(duì)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞信號(hào)通路的調(diào)節(jié)機(jī)制,為骨骼肌損傷修復(fù)提供理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法在無(wú)菌條件下,提取2周齡的雄性SD大鼠(2只,約100g)雙側(cè)的腓腸肌和比目魚肌;兩步酶消化法(Ⅱ型膠原酶和胰酶)消化充分剪碎的肌肉,釋放衛(wèi)星細(xì)胞;采用兩次差速貼壁法(差速貼壁時(shí)間為2h)來(lái)純化衛(wèi)星細(xì)胞。使用臺(tái)盼藍(lán)染色鑒定衛(wèi)星細(xì)胞活性;通過(guò)橫紋肌肌動(dòng)蛋白抗體來(lái)鑒定衛(wèi)星細(xì)胞純度。取第三代衛(wèi)星細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),分為對(duì)照組(細(xì)胞+生長(zhǎng)培養(yǎng)液)、MGF組(細(xì)胞+MGF+生長(zhǎng)培養(yǎng)液)、MGF+PD組(細(xì)胞+MGF+PD98059+生長(zhǎng)培養(yǎng)液),干預(yù)一天。用BCA法測(cè)定細(xì)胞總蛋白含量;采用Western Blot檢測(cè)各個(gè)分組中MEK、pMEK、p-ERK、ERK、MyoD、Myf5蛋白的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、衛(wèi)星細(xì)胞活性檢測(cè)結(jié)果:實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞共計(jì)數(shù)614個(gè),著色數(shù)22個(gè),衛(wèi)星細(xì)胞活性率為(614-22)÷614×100%=96.4%。2、衛(wèi)星細(xì)胞純度檢測(cè)結(jié)果:橫紋肌肌動(dòng)蛋白在細(xì)胞上呈棕褐色,即為陽(yáng)性表達(dá),顯示該細(xì)胞為衛(wèi)星細(xì)胞。衛(wèi)星細(xì)胞純度為97.7%。3、24h后,MGF組總蛋白含量顯著高于對(duì)照組(p0.01),MGF+PD組總蛋白含量低于MGF組(p0.05)。4、24h后,MGF+PD組MEK蛋白表達(dá)高于對(duì)照組(p0.05)和MGF組(p0.05)。MGF組與MGF+PD組ERK蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組(p0.01),MGF+PD組ERK蛋白表達(dá)高于MGF組(p0.01)5、24h后,MGF組p-MEK蛋白表達(dá)顯著高于對(duì)照組(p0.01)。MGF組p-ERK蛋白表達(dá)亦高于對(duì)照組(p0.05)。6、24h后,MGF組Myf5和MyoD蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組(p0.01),MGF+PD組MyoD蛋白高于對(duì)照組和MGF組(p0.01)。MGF+PD組Myf5蛋白表達(dá)顯著低于MGF組(p0.01),而與對(duì)照組無(wú)差異。結(jié)論1、MGF能激活MEK-ERK信號(hào)通路,促進(jìn)SC總蛋白合成。2、阻斷MEK-ERK通路后,作用于SC,可下調(diào)Myf5蛋白表達(dá),上調(diào)MyoD蛋白表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：上海體育學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R873

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1 董少紅;張鵬;溫雋珉;高虹;龐新利;;酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子促進(jìn)兔骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞生長(zhǎng)的研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2007年17期

2 張臻,朱洪生,鐘z，

本文編號(hào)：1282290