本文關(guān)鍵詞：沉默F(xiàn)BI-1基因?qū)θ巳橄侔┘毎鲋澈偷蛲龅挠绊懠捌渥饔脵C制研究

  更多相關(guān)文章： 乳腺癌 基因沉默 細胞增殖 細胞周期 細胞凋亡 FBI-1基因

【摘要】：目的:本研究旨在探討人類免疫缺陷病毒短轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)物連接因子1(factor that binds to the inducer of short transcripts of human immunodeficiency virus-1,FBI-1)在人乳腺癌細胞中的表達,并研究靶向沉默F(xiàn)BI-1基因表達對人乳腺癌細胞增殖、凋亡的影響及其可能的作用機制。方法:1、應(yīng)用qRT-PCR和Western blot檢測人正常乳腺上皮細胞株MCF-10A、人乳腺癌細胞株MCF-7、MDA-MB-231中FBI-1的表達水平。2、采用sh RNA慢病毒干擾技術(shù)構(gòu)建沉默F(xiàn)BI-1基因的人乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株,并通過qRT-PCR和Western blot方法進行驗證。3、采用CCK-8法、平板克隆形成實驗檢測沉默F(xiàn)BI-1基因?qū)CF-7、MDA-MB-231細胞增殖能力的影響;通過流式細胞術(shù)檢測沉默F(xiàn)BI-1基因?qū)CF-7、MDA-MB-231細胞周期及凋亡的影響。4、通過qRT-PCR和Western blot檢測FBI-1沉默前后凋亡相關(guān)因子survivin及NF-κBp65的表達水平,初步探討沉默F(xiàn)BI-1基因?qū)θ巳橄侔┘毎鲋臣暗蛲鲇绊懙臋C制。結(jié)果:1、qRT-PCR及Western blot法檢測發(fā)現(xiàn)FBI-1在人乳腺癌細胞株MCF-7及MDA-MB-231中高表達,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2、利用RNAi技術(shù),成功構(gòu)建沉默F(xiàn)BI-1的慢病毒顆粒并轉(zhuǎn)染人乳腺癌細胞株MCF-7和MDA-MB-231,分別采用qRT-PCR和Western blot檢測sh RNA的沉默效果。發(fā)現(xiàn)Lv-sh FBI-1-2慢病毒顆粒沉默效果最好,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),選用Lv-sh FBI-1-2慢病毒感染人乳腺癌細胞株MCF-7和MDA-MB-231進行后續(xù)實驗。3、沉默F(xiàn)BI-1可抑制人乳腺癌細胞增殖能力:CCK8結(jié)果顯示,沉默F(xiàn)BI-1基因的表達后,沉默組MCF-7/sh RNA-FBI-1細胞的增殖能力較空載組MCF-7/sh RNA-NC細胞及空白對照組MCF-7細胞均明顯下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);平板克隆形成實驗結(jié)果顯示沉默組MCF-7/sh RNA-FBI-1的細胞克隆形成率(37.000±4.885)%低于空白對照組MCF-7(59.918±3.214)%和空載組MCF-7/sh RNA-NC(54.753±4.057)%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。MDA-MB-231細胞得出一樣的結(jié)論。4、沉默F(xiàn)BI-1可阻滯人乳腺癌細胞周期:流式細胞術(shù)檢測細胞周期結(jié)果顯示空白對照組MCF-7和空載組MCF-7/sh RNA-NC細胞G0/G1期細胞比例分別為(59.257±2.222)%、(60.210±0.795)%,較沉默組MCF-7/sh RNA-FBI-1細胞(72.993±0.401)%低,同樣空白對照組MDA-MB-231和空載組MDA-MB-231/sh RNA-NC細胞G0/G1期細胞比例低于沉默組MDA-MB-231/sh RNA-FBI-1細胞,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),可見沉默F(xiàn)BI-1基因可阻滯MCF-7、MDA-MB-231細胞于G0/G1期。5、沉默F(xiàn)BI-1可誘導(dǎo)人乳腺癌細胞凋亡:流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡結(jié)果顯示沉默組MCF-7/sh RNA-FBI-1細胞凋亡率(5.140±0.478)%較空白對照組MCF-7(3.683±0.608)%及空載組MCF-7/sh RNA-NC(2.840±0.221)高,同樣沉默組MDA-MB-231/sh RNA-FBI-1細胞凋亡率高于空白對照組MDA-MB-231及空載組MDA-MB-231/sh RNA-NC,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。6、相關(guān)機制的研究:qRT-PCR結(jié)果顯示沉默組MCF-7/sh RNA-FBI-1中survivin、NF-κBp65 m RNA的相對表達量低于空白對照組MCF-7與空載組MCF-7/sh RNA-NC,差異具有統(tǒng)計學(xué)(P0.05)。Western blot結(jié)果顯示,沉默組MCF-7/sh RNA-FBI-1中survivin、NF-κBp65蛋白的相對表達量低于空白對照組MCF-7及空載組MCF-7/sh RNA-NC,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。MDA-MB-231細胞得出相同結(jié)論。結(jié)論:1、人乳腺癌細胞中FBI-1基因呈高表達水平。2、沉默F(xiàn)BI-1基因可抑制人乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖能力,阻滯細胞周期,誘導(dǎo)細胞凋亡。3、沉默F(xiàn)BI-1基因?qū)θ巳橄侔┘毎鲋臣暗蛲龅挠绊懣赡芘c抑制survivin的表達及抑制NF-κB通路有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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本文編號：1274700