本文關(guān)鍵詞：AQP4在佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)軟骨中的表達(dá)及AQP4 siRNA對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的影響

  更多相關(guān)文章： 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 水通道蛋白4 佐劑性關(guān)節(jié)炎 軟骨細(xì)胞 IL-1β

【摘要】：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)作為一種慢性關(guān)節(jié)炎疾病,其具有較高的發(fā)病率和致殘率,嚴(yán)重影響人們生活質(zhì)量。RA的發(fā)病可能與感染、遺傳、性激素等因素有關(guān),但其內(nèi)在機(jī)制還沒有得到完全闡明,研究表明關(guān)節(jié)軟骨損傷與RA關(guān)節(jié)不可逆殘障之間具有顯著相關(guān)性,尋找軟骨損傷的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)、保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨免于各種因素的損傷已成為預(yù)防治療RA的一大重點(diǎn)。軟骨組織中軟骨的形成和代謝都必須依靠軟骨細(xì)胞的調(diào)節(jié)才能有條不紊的完成,因?yàn)檐浌墙M織中只含有軟骨細(xì)胞,不存在其它的細(xì)胞類型,積極探索調(diào)控關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)及其內(nèi)在的分子過程,對(duì)于揭示RA關(guān)節(jié)軟骨損傷的病理機(jī)制,開發(fā)防治RA的新藥物至關(guān)重要。水通道蛋白(aquaporins,AQPs)是一種與水通透性相關(guān)的膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,目前已在哺乳動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)13種AQPs亞型(AQP0-12),有研究表明在RA和骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)患者的滑膜和關(guān)節(jié)軟骨中AQP1/3/9等存在異常高表達(dá),參與調(diào)控軟骨細(xì)胞的形態(tài)、體積和功能。AQP4是單通道水通透性最高的水通道蛋白(水通透性約是AQP1的3倍),其既往研究多集中于神經(jīng)系統(tǒng)疾病,至今尚未見AQP4在哺乳動(dòng)物關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞表達(dá)的研究報(bào)道,AQP4在RA關(guān)節(jié)軟骨損傷中的可能致病作用仍然空白。為此,本研究體內(nèi)構(gòu)建佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant-induced arthritis,AIA)大鼠模型,觀察AQP4在AIA大鼠關(guān)節(jié)軟骨中的表達(dá)及病理意義,并從影響軟骨細(xì)胞增殖和凋亡的角度,探討AQP4 siRNA對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞損傷的保護(hù)作用,為RA防治提供新的思路和藥物靶標(biāo)。本課題的主要研究?jī)?nèi)容包括以下兩個(gè)方面:1.AQP4在AIA大鼠關(guān)節(jié)軟骨中的表達(dá)及其病理意義目的:探討AQP4在AIA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中的表達(dá)及其參與AIA發(fā)生發(fā)展的病理意義。方法:大鼠右后足皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑建立AIA大鼠模型;檢測(cè)AIA大鼠在造模后各時(shí)間點(diǎn)的繼發(fā)性足腫脹度并進(jìn)行踝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)評(píng)分;免疫組化法和Western blot實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)AQP4在正常和AIA大鼠關(guān)節(jié)軟骨組織中的表達(dá);體外分離培養(yǎng)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,免疫細(xì)胞化學(xué)染色法和Western blot檢測(cè)AQP4在正常大鼠和AIA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果:AQP4定位于大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì),且AQP4在AIA模型組大鼠軟骨組織中的蛋白表達(dá)量高于正常組;相關(guān)性分析結(jié)果表明AIA大鼠軟骨組織中AQP4蛋白表達(dá)與AIA大鼠繼發(fā)性足腫脹度(d26)和踝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)總評(píng)分呈正相關(guān);同時(shí),AQP4在體外培養(yǎng)的AIA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中的蛋白表達(dá)高于正常組。結(jié)論:AQP4在AIA大鼠關(guān)節(jié)軟骨中存在異常高表達(dá),并參與大鼠AIA的發(fā)病過程,表明AQP4可能是RA治療的新靶點(diǎn)。2.AQP4 si RNA對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制研究目的:觀察AQP4 siRNA對(duì)IL-1β體外誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。方法:AQP4 siRNA和p38 mitogen activated protein kinases(MAPK)信號(hào)通路抑制劑SB203580對(duì)正常軟骨細(xì)胞進(jìn)行24 h預(yù)處理,IL-1β刺激24 h體外誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡。MTT法檢測(cè)軟骨細(xì)胞的增殖反應(yīng);Hoechst 33258染色法和流式細(xì)胞法檢測(cè)軟骨細(xì)胞的凋亡;RT-PCR法檢測(cè)軟骨細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因的表達(dá)情況(Bcl-2、Bax及Caspase3);Western blot檢測(cè)軟骨細(xì)胞中p38和P-p38的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:AQP4 si RNA可以促進(jìn)IL-1β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞的增殖,減少IL-1β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)的改變,降低IL-1β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞的凋亡率;與IL-1β處理組比較,AQP4 siRNA能夠顯著下調(diào)Bax和Caspase3基因表達(dá)、上調(diào)Bcl-2基因表達(dá);Western blot結(jié)果顯示,AQP4 siRNA可降低P-p38蛋白的表達(dá),對(duì)p-38蛋白的表達(dá)無明顯影響。結(jié)論:AQP4 siRNA能抑制IL-1β誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的凋亡,該作用可能與上調(diào)Bcl-2基因表達(dá)、下調(diào)Bax和Caspase3基因表達(dá)及抑制p38信號(hào)通路活化有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R593.22

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 岳燕林;劉劍平;劉青松;蔣紅;謝傳美;;乙酰唑胺對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞水通道蛋白1,3表達(dá)的影響[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2013年11期

2 呂嘉;向川;衛(wèi)小春;張曉琴;劉小麗;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及水通道蛋白1與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜血管生成的相關(guān)性分析[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2012年03期

3 唐進(jìn);黃良庫;彭李華;李東;陳世榮;;低頻脈沖超聲干預(yù)膝骨關(guān)節(jié)炎模型兔關(guān)節(jié)軟骨及滑膜水通道蛋白3的表達(dá)[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年11期

4 蒲春霞;;水通道蛋白研究進(jìn)展[J];成都大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年02期

5 韋嵩;耿麗;鄧偉民;陳志煌;沈鷹;;透痹轉(zhuǎn)氣法對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)滑膜AQP1表達(dá)的影響[J];山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2008年05期

6 韋嵩;劉健;邱樂;陳志煌;沈鷹;;類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)滑膜組織中水通道蛋白1表達(dá)與透痹轉(zhuǎn)氣法的影響[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2008年28期

7 ;Aquaporin-1 and aquaporin-3 expressions in the temporo-mandibular joint condylar cartilage after an experimentally induced osteoarthritis[J];Chinese Medical Journal;2007年24期

8 路煒,漆洪波;水通道蛋白調(diào)節(jié)的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).婦幼保健分冊(cè);2005年01期

，

本文編號(hào)：1271257