本文關鍵詞：慢病毒介導的CYP17A1基因沉默對膠質瘤細胞生物學活性的影響

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【摘要】：目的:檢測不同病理級別膠質瘤組織中CYP17A1的表達,及CYP17A1和AR共表達的意義。建立CYP17A1基因沉默膠質瘤細胞株,并研究CYP17A1基因沉默對膠質瘤細胞生物學活性的影響,為進一步研究雄激素信號通路在膠質瘤發(fā)生發(fā)展中的作用奠定了基礎。方法:(1)采用免疫組化、Real time-PCR、Western blot實驗方法,檢測55例膠質瘤組織及10例正常腦組織中CYP17A1的表達情況。(2)采用免疫組化的方法檢測CYP17A1及AR在膠質瘤組織中的共表達。(3)通過慢病毒包裝的CYP17A1特異性sh RNA表達載體,建立CYP17A1表達沉默的細胞株,并通過Real time-PCR實驗檢測該細胞株中CYP17A1的m RNA的表達情況。(4)通過Western blot、CCK-8、Transwell細胞遷移侵襲實驗、流式細胞術、裸鼠成瘤實驗等方法檢測CYP17A1基因沉默對膠質瘤細胞生物學活性的影響。結果:(1)與正常腦組織相比,在膠質瘤組織中CYP17A1基因在蛋白質水平和m RNA水平的表達量明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)CYP17A1蛋白和AR蛋白在膠質瘤組織明顯高表達,在正常組織中不表達或低表達,并隨著病理級別升高而表達增強(P0.05)。(3)成功建立CYP17A1基因沉默細胞株,并用Real time-PCR檢測T98G-CYP17A1組與空白對照組及空質粒組CYP17A1m RNA的表達,T98G-CYP17A1組的CYP17A1的m RNA表達水平明顯降低(F=15.44,P0.05)。(4)與空白對照組和空質粒組相比,T98G-CYP17A1組膠質瘤細胞在增殖水平、侵襲和遷移能力均明顯下降,細胞凋亡明顯增加;T98G-CYP17A1異位移植瘤的裸鼠皮下成瘤能力明顯弱于空白對照組及空質粒組(P0.05)。結論:(1)在膠質瘤組織中CYP17A1在蛋白質和m RNA水平的表達量明顯高于正常腦組織。(2)CYP17A1蛋白和AR蛋白在膠質瘤組織中高表達提示雄激素通路參與了膠質瘤的發(fā)生發(fā)展過程。(3)成功建立了CYP17A1基因沉默細胞株,為進一步研究CYP17A1與膠質瘤生物學活性奠定了基礎。(4)T98G-CYP17A1細胞的增殖、遷移和侵襲力均明顯下調;且細胞凋亡顯著增加。CYP17A1基因沉默能抑制膠質瘤細胞在體內外的生物學活性。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R739.41

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：1265406