發(fā)布時(shí)間：2017-12-08 06:32

  本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的CYP17A1基因沉默對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)活性的影響

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【摘要】：目的:檢測不同病理級別膠質(zhì)瘤組織中CYP17A1的表達(dá),及CYP17A1和AR共表達(dá)的意義。建立CYP17A1基因沉默膠質(zhì)瘤細(xì)胞株,并研究CYP17A1基因沉默對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)活性的影響,為進(jìn)一步研究雄激素信號通路在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用奠定了基礎(chǔ)。方法:(1)采用免疫組化、Real time-PCR、Western blot實(shí)驗(yàn)方法,檢測55例膠質(zhì)瘤組織及10例正常腦組織中CYP17A1的表達(dá)情況。(2)采用免疫組化的方法檢測CYP17A1及AR在膠質(zhì)瘤組織中的共表達(dá)。(3)通過慢病毒包裝的CYP17A1特異性sh RNA表達(dá)載體,建立CYP17A1表達(dá)沉默的細(xì)胞株,并通過Real time-PCR實(shí)驗(yàn)檢測該細(xì)胞株中CYP17A1的m RNA的表達(dá)情況。(4)通過Western blot、CCK-8、Transwell細(xì)胞遷移侵襲實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)等方法檢測CYP17A1基因沉默對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)活性的影響。結(jié)果:(1)與正常腦組織相比,在膠質(zhì)瘤組織中CYP17A1基因在蛋白質(zhì)水平和m RNA水平的表達(dá)量明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)CYP17A1蛋白和AR蛋白在膠質(zhì)瘤組織明顯高表達(dá),在正常組織中不表達(dá)或低表達(dá),并隨著病理級別升高而表達(dá)增強(qiáng)(P0.05)。(3)成功建立CYP17A1基因沉默細(xì)胞株,并用Real time-PCR檢測T98G-CYP17A1組與空白對照組及空質(zhì)粒組CYP17A1m RNA的表達(dá),T98G-CYP17A1組的CYP17A1的m RNA表達(dá)水平明顯降低(F=15.44,P0.05)。(4)與空白對照組和空質(zhì)粒組相比,T98G-CYP17A1組膠質(zhì)瘤細(xì)胞在增殖水平、侵襲和遷移能力均明顯下降,細(xì)胞凋亡明顯增加;T98G-CYP17A1異位移植瘤的裸鼠皮下成瘤能力明顯弱于空白對照組及空質(zhì)粒組(P0.05)。結(jié)論:(1)在膠質(zhì)瘤組織中CYP17A1在蛋白質(zhì)和m RNA水平的表達(dá)量明顯高于正常腦組織。(2)CYP17A1蛋白和AR蛋白在膠質(zhì)瘤組織中高表達(dá)提示雄激素通路參與了膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展過程。(3)成功建立了CYP17A1基因沉默細(xì)胞株,為進(jìn)一步研究CYP17A1與膠質(zhì)瘤生物學(xué)活性奠定了基礎(chǔ)。(4)T98G-CYP17A1細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲力均明顯下調(diào);且細(xì)胞凋亡顯著增加。CYP17A1基因沉默能抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞在體內(nèi)外的生物學(xué)活性。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：1265406