本文關(guān)鍵詞：大鼠中CYP2C11基因敲除對(duì)血壓及華法林藥動(dòng)藥效學(xué)影響研究

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【摘要】：細(xì)胞色素P450酶系廣泛存在于細(xì)菌、真菌、動(dòng)物及植物體內(nèi),它是外源性化合物的主要代謝酶,負(fù)責(zé)超過80%的藥物代謝。CYP2C是P450中一個(gè)重要的亞家族,人類CYP2C亞家族被研究較多的成員有CYP2C9和CYP2C19,負(fù)責(zé)代謝約20%的藥物。哺乳動(dòng)物體內(nèi)CYP2C酶參與腎臟中和血管平滑肌細(xì)胞中由花生四烯酸合成二十碳環(huán)氧烯酸(EETs)的過程。EETs是血管松弛的重要介質(zhì),主要作用是在阻力動(dòng)脈中調(diào)節(jié)組織血流量,是參與血壓調(diào)節(jié)的重要物質(zhì)。因此學(xué)界推測(cè)CYP2C酶在體內(nèi)可以通過上調(diào)EETs的生成來降低血壓,如何用實(shí)驗(yàn)直接證明CYP2C在血壓調(diào)節(jié)中的作用,是尚待解決的問題。此外,人類CYP2C9是代謝華法林的重要酶,由于該酶基因存在遺傳多態(tài)性,華法林使用者可被分為快代謝人群(EM)和慢代謝人群(PM)。慢代謝人群使用該藥時(shí)常出現(xiàn)藥物蓄積和過量現(xiàn)象,因此能否構(gòu)建一個(gè)可以模擬慢代謝人群中華法林代謝的動(dòng)物模型,是迫切需要解決的一個(gè)問題。本實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)造了CYP2C11大鼠基因敲除模型(CYP2C11-null)該基因(大鼠CYP2C11基因)與人類CYP2C9基因相比具有85%的同源性,被認(rèn)為是人類CYP2C9在大鼠中的直系同源基因。我們嘗試使用該模型來研究上述兩個(gè)問題。我們比較了CYP2C11-null和SD兩種大鼠的基礎(chǔ)血壓,及其在高鹽飲食誘導(dǎo)下血壓的變化,并評(píng)價(jià)了CYP2C11-null大鼠中參與EETs代謝相關(guān)的其他P450酶的表達(dá)。我們還比較了CYP2C11-null和SD兩種大鼠對(duì)華法林體內(nèi)、體外的藥物代謝差異,評(píng)價(jià)了兩種大鼠中華法林抗凝血作用。研究結(jié)果:1.CYP2C11-null大鼠模型血壓的變化及表型鑒定實(shí)驗(yàn)使用頸動(dòng)脈測(cè)血壓的方法對(duì)比CYP2C11-null大鼠與SD大鼠的血壓差別;用同樣方法研究了用高鹽飲食誘導(dǎo)后兩種大鼠的血壓差異。結(jié)果普通飲食下,CYP2C11-null大鼠血壓與SD大鼠血壓無顯著差異;在高鹽誘導(dǎo)下,CYP2C11-null大鼠血壓甚至低于SD野生型大鼠。病理組織切片和臟器指數(shù)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),高鹽飲食對(duì)兩種大鼠腎臟均造成不同程度損傷,但其他主要臟器無明顯影響。在該結(jié)果的基礎(chǔ)上,我們檢測(cè)了CYP2C11-null大鼠中與血壓調(diào)節(jié)相關(guān)的其他P450基因的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),CYP2C11-null大鼠肝腎微粒體中CYP4A1蛋白表達(dá)較SD鼠顯著增加,而CYP2J2蛋白表達(dá)無顯著變化;CYP2C11-null大鼠肝臟CYP2C23、CYP2C24的mRNA表達(dá)降低。2.CYP2C11-null大鼠模型對(duì)華法林體外活性研究實(shí)驗(yàn)提取了CYP2C11-null雄鼠與SD雄鼠的肝微粒體,進(jìn)行華法林的體外孵育后,采用高效液相色譜(HPLC)進(jìn)行華法林的定量。與SD大鼠相比,CYP2C11-null大鼠肝微粒體對(duì)華法林活性Km值顯著升高(P0.05),最大反應(yīng)速率Vmax及清除率Clint降低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CYP2C11-null大鼠肝微粒體對(duì)華法林的體外代謝活性降低。3.華法林在CYP2C11-null大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的研究實(shí)驗(yàn)使用了成年CYP2C11-null與SD大鼠,灌胃給藥(2 mg/kg華法林)后立即檢測(cè)其72小時(shí)內(nèi)血藥濃度變化,并計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)同性別組間,達(dá)峰時(shí)間CYP2C11-null雄鼠較SD雄鼠顯著延遲,且清除率也顯著降低(P0.01),AUC(0-t)、AUC(0-∞)、Cmax數(shù)值有升高但統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在CYP2C11酶缺失的狀態(tài)下CYP2C11-null雄鼠吸收速率變慢,清除率也降低。4.華法林在CYP2C11-null大鼠體內(nèi)藥效學(xué)的研究實(shí)驗(yàn)對(duì)成年CYP2C11-null大鼠及SD大鼠給藥2 mg/kg,然后使用凝血酶原時(shí)間試劑盒檢測(cè)凝血酶原時(shí)間(PT)及計(jì)算國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比率(INR)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)CYP2C11-null大鼠PT值上升較SD大鼠快,且數(shù)值高于SD大鼠,INR值變化規(guī)律與PT值基本一致。以上結(jié)果表明CYP2C11-null大鼠血漿中華法林抗凝血作用較強(qiáng),間接證明了CYP2C11-null大鼠與SD大鼠相比對(duì)華法林代謝能力減弱。綜上所述,得到以下結(jié)論:本論文研究發(fā)現(xiàn)在大鼠體內(nèi)P450相關(guān)的血壓調(diào)控機(jī)制中,CYP2C11酶并不占主導(dǎo)作用,其他P450酶的誘導(dǎo)上調(diào)可在功能上補(bǔ)償CYP2C11酶的缺失。此外,CYP2C11-null大鼠對(duì)華法林的代謝能力降低,該模型具有模擬華法林慢代謝人群的潛力。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R965

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1 ;某些因素對(duì)大鼠胃肌電的影響[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2001年S1期

2 陳同度,張昌穎;素食大鼠的貧血現(xiàn)象[J];營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);1957年04期

3 陳偉強(qiáng);趙善廣;;自制注射用大鼠固定裝置[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);1992年04期

4 肖柳英,林培英,馮昭明,張丹;不同周齡的SD大鼠生理、生化及體重的正常值測(cè)定[J];中藥新藥與臨床藥理;1996年03期

5 李淑云;簡(jiǎn)易大鼠灌胃器的制作[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年04期

6 楊明智,陳積圣;一種大鼠抓取與固定的新工具介紹[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);2001年03期

7 戴英,陸群;復(fù)方H_(505)對(duì)Wistar大鼠外周血的血液流變學(xué)指標(biāo)的影響[J];中國(guó)血液流變學(xué)雜志;2001年01期

8 韋應(yīng)波,孫喜慶,曹新生,姚永杰,馮岱雅,楊長(zhǎng)斌;+Gz暴露時(shí)間對(duì)大鼠記憶功能和行為的影響[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2003年01期

9 呂學(xué)軍,郭俊生,李敏,周利梅,張永娟;暈船大鼠體內(nèi)鐵含量的變化[J];中國(guó)職業(yè)醫(yī)學(xué);2003年04期

10 湯仁仙,王迎偉,王慧,周峰;201A中藥合劑對(duì)大鼠抗腎小球基底膜腎炎病變的影響[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年06期

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1 尹音;孫振宇;胡敏;李冬霞;;持續(xù)性高正加速度對(duì)大鼠顳頜關(guān)節(jié)損傷的作用[A];第八屆全國(guó)顳下頜關(guān)節(jié)病學(xué)及（牙合）學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2011年

2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

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