本文關鍵詞：基于高內涵技術的腎纖維化體外模型建立及中藥化合物篩選

  更多相關文章： 高內涵篩選 腎纖維化 細胞模型 中藥化合物

【摘要】：腎纖維化是各種慢性腎病(chronic kidney disease,CKD)進展至終末期腎病(end stage renal disease,ESRD)的共同病理過程,其主要特征是持續(xù)存在的慢性損傷導致腎臟的固有細胞和結構不斷遭到破壞,取而代之的是不斷積聚的細胞外基質(extracellular matrix,ECM),進而腎臟正常功能逐漸衰減�，F(xiàn)代醫(yī)學對于慢性腎病、終末期腎病的治療,尚缺乏行之有效的方法與藥物。而中醫(yī)藥在腎纖維化的治療中顯示出了較好的應用前景。目的:本課題依托藥物高內涵篩選技術平臺,探索建立可用于抗腎纖維化藥物高內涵篩選的體外細胞模型,選用文獻報道中具有抗腎纖維化功效的化合物進行模型評價和驗證。在此基礎上對344種中藥化合物進行高內涵篩選,以期發(fā)現(xiàn)具有抗腎纖維化功效的化合物,為下一步的藥物研發(fā)和相關機制研究奠定基礎。方法:1.腎纖維化體外高內涵藥物篩選模型的建立:采用正常大鼠腎成纖維細胞NRK49F作為研究對象,以轉化生長因子-β1(TGF-β1)作為誘導劑,分別設置不同細胞種板密度、不同誘導時間以及不同誘導培養(yǎng)基中血清濃度的實驗組,以肌成纖維細胞的主要標記物αα-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)為檢測指標,通過高內涵分析系統(tǒng)對不同組別NRK49F細胞的α-SMA表達情況進行檢測分析,以誘導組與空白對照組α-SMA表達差異最大的組別實驗條件作為模型建立的條件。2.腎纖維化體外高內涵藥物篩選模型的評價與驗證:在確立的模型優(yōu)化條件下,以TGF-β1受體阻滯劑SB525334和文獻報道的具有抗腎纖維化功效的中藥化合物姜黃素、大黃素為陽性藥物,利用高內涵分析系統(tǒng)檢測上述化合物對TGF-β1誘導的NRK49F細胞α-SMA表達的影響。3.抗腎纖維化中藥化合物的高內涵篩選:在成功建立細胞模型的基礎上,以α-SMA為評價指標,將344種中藥化合物進行以10μmol/L的濃度進行初步篩選,從中篩選獲取可能具有抗腎纖維化活性的化合物。將篩選獲取的化合物分別設置最高濃度為72 μmol/L,3等倍稀釋5個濃度梯度的不同實驗組,進一步檢測分析其對細胞模型中α-SMA和Ⅲ型膠原表達的影響。結果:1.通過對細胞種板密度、誘導時間以及誘導培養(yǎng)基中血清濃度等各種條件進行優(yōu)化,最終確定了模型建立的條件:細胞接種于96孔板,種板密度為6,000個/孔,將TGF-β1加入到含5%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基,誘導濃度為10 μ g/L,誘導時間為72h。2.TGF-β 1受體阻滯劑SB525334和文獻報道的具有抗腎纖維化功效的中藥化合物姜黃素、大黃素均能在一定程度上抑制α-SMA的表達,與文獻報道結果基本一致。3.通過對實驗室344種中藥化合物進行篩選,獲得了具有抗腎纖維化活性的化合物16種。其中,迷迭香酸對α-SMA以及Ⅲ型膠原的表達無明顯影響;貝母素乙、歐前胡素、人參皂苷F2、新橙皮苷有下調α-SMA的表達的趨勢,但對Ⅲ型膠原的表達無明顯影響;丹酚酸B、丹參素、牛磺酸明顯下調Ⅲ型膠原的表達,但對α-SMA的表達無明顯影響;姜黃素、大黃素、甘草酸、川芎嗪、羥基紅花黃色素A、黃芪甲苷、絞股藍皂苷、西紅花苷則對α-SMA和Ⅲ型膠原的表達均有明顯的抑制作用。實驗結論:1.通過對腎纖維化細胞模型誘導的條件進行優(yōu)化,構建了適用于高內涵篩選平臺的腎纖維化體外細胞模型,并驗證了模型的穩(wěn)定性,為開展相關藥物的研發(fā)和機制研究奠定了基礎。2.篩選出了十余種具有抗腎纖維化功效的中藥化合物,其中甘草酸、羥基紅花黃色素A、西紅花苷、絞股藍皂苷等此前未見有抗腎纖維化的研究報道。這幾種化合物可作為課題組后期開展體內動物實驗研究的候選藥物。
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R284;R285

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Jia Xia;Li-qun He;Xiao Su;;Interventional mechanisms of herbs or herbal extracts on renal interstitial fibrosis[J];Journal of Integrative Medicine;2016年03期

2 Li Jun;Gu Tong;Fu Xu;Zhao Renjie;;Effect of salvianolic acid A and C compatibility on inflammatory cytokines in rats with unilateral ureteral obstruction[J];Journal of Traditional Chinese Medicine;2015年05期

3 Bo Liang;Xiao-Ling Guo;Jing Jin;Yong-Chun Ma;Zheng-Quan Feng;;Glycyrrhizic acid inhibits apoptosis and fibrosis in carbontetrachloride-induced rat liver injury[J];World Journal of Gastroenterology;2015年17期

4 張茗晰;張萌;Harris Ripps;Wen Shen;;�；撬岬难芯窟M展[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2015年07期

5 安梅;周瑾;陳曉宇;;白藜蘆醇藥理學作用的研究進展[J];腫瘤藥學;2014年04期

6 Ping Li;Mei-Lan Liang;Ying Zhu;Yao-Yao Gong;Yun Wang;Ding Heng;Lin Lin;;Resveratrol inhibits collagen Ⅰ synthesis by suppressing IGF-1R activation in intestinal fibroblasts[J];World Journal of Gastroenterology;2014年16期

7 Xiao-Ling Guo;Bo Liang;Xue-Wei Wang;Fu-Gang Fan;Jing Jin;Rui Lan;Jing-Hui Yang;Xiao-Chun Wang;Lei Jin;Qin Cao;;Glycyrrhizic acid attenuates CCl_4-induced hepatocyte apoptosis in rats via a p53-mediated pathway[J];World Journal of Gastroenterology;2013年24期

8 胡經(jīng)陽;嚴春琳;朱彥;高秀梅;;高內涵篩選應用于中藥現(xiàn)代化的前景展望[J];天津中醫(yī)藥大學學報;2013年02期

9 Shuang Ren;Hua Zhang;Yongping Mu;Mingyu Sun;Ping Liu;;Pharmacological effects of Astragaloside IV: a literature review[J];Journal of Traditional Chinese Medicine;2013年03期

10 王文祥;熊曉濱;;黃芪總皂苷提取物對牛血清白蛋白致大鼠肝纖維化作用的影響[J];中國實驗方劑學雜志;2013年09期

，

本文編號：1264702