本文關(guān)鍵詞：基于顯微定量化及生物效價的山藥藥材規(guī)格研究

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【摘要】：中藥材商品規(guī)格等級是中藥材質(zhì)量優(yōu)劣的標(biāo)志,隨著我國藥材市場發(fā)生的變化,需要相應(yīng)地完善或制訂新的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),以適應(yīng)當(dāng)前市場需要。山藥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,原植物為薯蕷科植物薯蕷的干燥根莖,藥材市場上將山藥分為兩個主流商品規(guī)格:價格較高的鐵棍山藥和價格相對較低的非鐵棍山藥。正品鐵棍山藥與非鐵棍山藥的原植物均為薯蕷科薯蕷(Dioscorea opposita Thunb.),兩者價格卻相差一倍以上,說明在市場流通中兩者的品質(zhì)可能存在較大差異。為了探索鐵棍山藥和非鐵棍山藥的不同,本課題組收集了 9個省共17批山藥藥材,引進(jìn)中藥顯微數(shù)字化平臺統(tǒng)計區(qū)分不同品種山藥之間顯微結(jié)構(gòu)的差異;并從生物效價的角度評價不同山藥的生物活性。希望本課題的研究能夠為山藥藥材不同商品規(guī)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供理論依據(jù)。本研究的實驗內(nèi)容主要分為兩部分,分別從顯微結(jié)構(gòu)定量化及生物活性兩方面探討不同品種山藥的區(qū)別,為山藥藥材規(guī)格的劃分提供依據(jù)。主要內(nèi)容及相應(yīng)結(jié)果簡介如下:1.《中國藥典》規(guī)定山藥藥材的來源植物僅有薯蕷,但市場上作為山藥應(yīng)用的還有參薯、山薯等其他物種。本研究收集了 17批不同產(chǎn)地及品種的山藥,經(jīng)外觀鑒定發(fā)現(xiàn)有三批樣品為參薯,再將其制作成石蠟切片,采用顯微鑒別法對不同批次的山藥進(jìn)行觀察,結(jié)果顯示薯蕷與參薯的最大區(qū)別在于中柱鞘是否有石細(xì)胞環(huán)層。而薯蕷的不同品種之間顯微結(jié)構(gòu)相似,主要顯微特征包括淀粉粒、薄壁細(xì)胞、維管束、含針晶黏液細(xì)胞、無針晶黏液細(xì)胞等。2.關(guān)于山藥的質(zhì)地描述中,《本草原始》言"肉白指細(xì)緊實者入藥",強調(diào)了質(zhì)地的緊實。在實地調(diào)研時,山藥種植人員也說鐵棍山藥"顆粒細(xì)密"、"硬而堅韌"。本課題組亦從外觀性狀觀察中發(fā)現(xiàn)不同山藥橫斷面中顆粒的密度不同,如鐵棍山藥的較為細(xì)密,而麻山藥、長山藥中顆粒間的間隙則較大,而外觀性狀是內(nèi)在特征的顯現(xiàn),因此本實驗決定從顯微量化的角度驗證這種外在差異性。本研究制作了百余張不同品種山藥的石蠟切片,并采用數(shù)字切片掃描儀對其進(jìn)行掃描,可以得到更便于觀察的數(shù)字化切片,再對主要的顯微特征進(jìn)行定量化統(tǒng)計,并采用統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行聚類分析和顯著性檢驗。實驗結(jié)果表明:以維管束的分布密度進(jìn)行聚類分析,可將不同山藥聚類為鐵棍山藥和非鐵棍山藥兩大類,這與市場劃分相一致;而且這兩類山藥的維管束密度存在顯著性差異,表明本實驗從顯微結(jié)構(gòu)量化鑒別這一微觀層面成功證實了不同山藥質(zhì)地的差異性,為山藥感官評價中質(zhì)地的描述提供了科學(xué)依據(jù)。3.本研究以鐵棍山藥為模式藥,采用高內(nèi)涵篩選技術(shù),通過考察給藥時間、熒光標(biāo)記細(xì)菌加入量、細(xì)菌刺激時間等因素,初步建立了基于高內(nèi)涵技術(shù)檢測山藥水提物調(diào)節(jié)RAW264.7巨噬細(xì)胞系吞噬綠色熒光蛋白標(biāo)記大腸桿菌(GFP-E.coli)活性的體外生物模型。結(jié)果顯示本實驗所建立方法的最佳方案為:給藥12 h、細(xì)菌加入量為50倍、細(xì)菌刺激時間1.5 h;方法重復(fù)性考察的RSD值為2.31%。并且與不加藥組相比,在山藥水提取物為0.156-1.25 mg/ml濃度范圍內(nèi),各濃度樣品都能促進(jìn)巨噬細(xì)胞的增殖,提高單個細(xì)胞的平均吞噬率;在濃度為1.25 mg/ml時鐵棍山藥水提取物促進(jìn)巨噬細(xì)胞的增殖及吞噬活性的能力最強。上述結(jié)果表明:本實驗基于高內(nèi)涵篩選技術(shù)所建立的巨噬細(xì)胞吞噬熒光標(biāo)記細(xì)菌的方法適用于鐵棍山藥水提物生物活性的研究;且鐵棍山藥在一定濃度范圍內(nèi)既能促進(jìn)巨噬細(xì)胞增殖,又能提高單個細(xì)胞的吞噬能力。4.通過CCK8法及以上建立的巨噬細(xì)胞吞噬細(xì)菌的方法,檢測不同品種山藥對RAW264.7細(xì)胞增殖活性及細(xì)胞吞噬活性的影響,并結(jié)合"質(zhì)反應(yīng)平行線法"將測得的細(xì)胞吞噬率轉(zhuǎn)化為生物效價,檢測鐵棍山藥與其他山藥生物效價的區(qū)別。結(jié)果顯示:在一定濃度范圍內(nèi),各種山藥都能促進(jìn)巨噬細(xì)胞的增殖及細(xì)胞吞噬率的增高;生物效價結(jié)果表明,不同批次山藥的生物效價介于39.56-100之間,以鐵棍山藥的生物效價為高,且平均效價值明顯高于非鐵棍山藥(P0.05),這與普遍認(rèn)為的"鐵棍山藥質(zhì)量最佳"也相符。市場上將山藥的主流品種劃分為鐵棍山藥與非鐵棍山藥兩類,本文從不同品種山藥之間顯微結(jié)構(gòu)的定量化研究及山藥調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞吞噬細(xì)菌的生物活性差異兩個方面,證實了鐵棍山藥與非鐵棍山藥的差異性,希望本研究能為山藥藥材主流商品的規(guī)格劃分提供依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1261089