發(fā)布時(shí)間：2022-12-07 17:32

　　腸道病毒71型（Enterovirus71,EV71）屬于小RNA病毒科,是引起嬰幼兒手足口病的主要病原體,會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,如無菌性腦膜炎,腦炎,脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹,嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡。小RNA病毒衣殼蛋白對(duì)于病毒包裝、侵入來說至關(guān)重要,然而在EV71病毒中,衣殼蛋白上,特定氨基酸位點(diǎn)對(duì)病毒功能方面的影響還知之甚少�；趯�(duì)其他小RNA病毒衣殼蛋白的研究可知,VP0豆蔻�；稽c(diǎn)影響病毒的入侵和脫衣殼過程;VP0裂解位點(diǎn)影響病毒衣殼的組裝和成熟。然而對(duì)于EV71病毒來說,這兩類氨基酸位點(diǎn)的位置與功能未見報(bào)道,所以弄清其作用機(jī)制對(duì)EV7病毒的預(yù)防與抗病毒藥物發(fā)現(xiàn)至關(guān)重要。所以本論文對(duì)這兩類位點(diǎn)進(jìn)行了研究,分別分為對(duì)豆蔻酸結(jié)合位點(diǎn)的研究和衣殼蛋白VP0裂解位點(diǎn)的研究兩部分。第一部分:豆蔻酸結(jié)合位點(diǎn)對(duì)EV71病毒侵入的影響豆蔻�；堑鞍譔末端與豆蔻酸共價(jià)連接的過程,一些文獻(xiàn)報(bào)道,小RNA病毒的豆蔻�；绊懖《窘M裝和感染力,是影響病毒生命周期的一個(gè)重要氨基酸位點(diǎn)。在EV71病毒中,發(fā)生豆蔻�；奈稽c(diǎn)是VP4 N末端的第二位甘氨酸。首先,我們構(gòu)建了帶有報(bào)告基因的EV71豆蔻�；笔图俨《荆↙... 

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 引言
    1.1 手足口病
    1.2 手足口病病原體
    1.3 EV71 的生命周期
        1.3.1 病毒與宿主的結(jié)合
        1.3.2 病毒的翻譯
        1.3.3 病毒的復(fù)制
        1.3.4 病毒的組裝
        1.3.5 病毒的釋放
    1.4 影響病毒生命周期的衣殼蛋白重要氨基酸位點(diǎn)
    1.5 豆蔻酸結(jié)合位點(diǎn)
        1.5.1 豆蔻�；�
        1.5.2 豆蔻酸結(jié)合位點(diǎn)
        1.5.3 豆蔻�；鞍准爸匾饔�
    1.6 EV71 VP0 的裂解位點(diǎn)
        1.6.1 小RNA病毒VP0 的裂解
        1.6.2 小RNA病毒的VP0 裂解位點(diǎn)
        1.6.3 VP0 裂解對(duì)病毒結(jié)構(gòu)的影響
        1.6.4 VP0 的裂解對(duì)病毒組裝的影響
    1.7 立題依據(jù)
    1.8 創(chuàng)新點(diǎn)
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞和菌株
        2.1.2 抗體
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)室保存質(zhì)粒列表
        2.1.4 常用試劑
        2.1.5 引物設(shè)計(jì)
    2.2 儀器與設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3.2 多肽合成
        2.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.4 病毒制備與包裝
        2.3.5 病毒蛋白電泳與免疫印跡(western-blot)
        2.3.6 透射電鏡(TEM)
        2.3.7 高壓冷凍電鏡
        2.3.8 熒光素報(bào)告基因的檢測(cè)
        2.3.9 細(xì)胞病變效應(yīng)檢測(cè)(CPE assay)
        2.3.10 病毒核酸提取與定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)
        2.3.11 病毒負(fù)鏈核酸提取與定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
        2.3.12 免疫熒光測(cè)定
        2.3.13 細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)分離實(shí)驗(yàn)
        2.3.14 脂質(zhì)體滲漏試驗(yàn)
        2.3.15 VP0和VP2 蛋白的質(zhì)譜分析
        2.3.16 統(tǒng)計(jì)分析
第三章 豆蔻�；稽c(diǎn)對(duì)EV71 生命周期的影響
    3.1 豆蔻�；娜笔Р挥绊懖《镜慕M裝
    3.2 豆蔻�；笔г斐刹《靖腥拘越档�
    3.3 豆蔻�；娜笔ё钄嗔瞬《净蚪MRNA在感染細(xì)胞中的復(fù)制
    3.4 豆蔻�；鶊F(tuán)影響病毒感染的早期階段
    3.5 豆蔻�；鶊F(tuán)與宿主細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)相互作用
    3.6 豆蔻�；鶊F(tuán)介導(dǎo)膜結(jié)構(gòu)的通透性
    3.7 討論
    3.8 本章小結(jié)
第四章 VP0 裂解位點(diǎn)對(duì)EV71 病毒組裝的影響
    4.1 EV71 VP0 裂解位點(diǎn)的確定
    4.2 VP0 裂解位點(diǎn)對(duì)EV71 病毒感染性和組裝的影響
        4.2.1 VP0 裂解位點(diǎn)對(duì)EV71 病毒感染性的影響
        4.2.2 VP0 裂解位點(diǎn)對(duì)EV71 病毒組裝的影響
    4.3 EV71 VP0 裂解機(jī)制的研究
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及攻讀博士期間發(fā)表的文章
致謝



本文編號(hào)：3712547