細(xì)胞焦亡是促炎性細(xì)胞死亡方式的一種,主要形態(tài)特征包括細(xì)胞脹大,細(xì)胞膜破裂及細(xì)胞吹泡等。早期研究表明,細(xì)胞焦亡多起于微生物感染,由上游的促炎性caspase激活引起。近年來的研究則發(fā)現(xiàn),促凋亡caspase也可以切割下游通路的細(xì)胞焦亡效應(yīng)蛋白GSDME,誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡的發(fā)生�；熕幬镆话阃ㄟ^BAK/BAX依賴的線粒體途徑,引起促凋亡caspase激活并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。激活的BAK/BAX可以在線粒體外膜上發(fā)生寡聚化,引起線粒體外膜通透,促使細(xì)胞色素c釋放并誘導(dǎo)凋亡小體形成,激活caspase-9,進(jìn)而引起caspase-3/7的切割活化。研究表明,GSDME蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)水平與化療藥物引起的細(xì)胞死亡形式密切相關(guān),高水平表達(dá)的GSDME會誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生焦亡,反之,則傾向于發(fā)生凋亡。但是,抗腫瘤藥物誘導(dǎo)GSDME介導(dǎo)細(xì)胞焦亡的分子機(jī)制研究仍不充分,需進(jìn)一步深入探究。此外,翻譯后修飾是否參與GSDME介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡調(diào)節(jié),尤其是抗腫瘤藥物處理后細(xì)胞死亡方式的調(diào)控研究還比較匱乏。本研究中,我們使用多種抗腫瘤藥物（包括TNFα+CHX、navitoclax和etoposide）處理HCT11... 

【文章來源】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．２?ＧＳＤＭＤ介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡信號通路??Ｃａｓｐａｓｅ－１介導(dǎo)的經(jīng)典細(xì)胞焦亡信號通路需要炎性小體的參與

Ｎｌｒｐｌｂ??？丨?］［）（順??ＣｐＩＯｙＣ＾＾Ｃｐ＾Ｊ＾?Ｃａｓｐａｓｅ－１??Ｎｌｒｃ４????＾＾＾ＨＣＺＳＥ＾ＩＩｌＢＷｆｌ００ｆｌｆｌ００ｆｌＱ００＆ｉ??（ｊｊＴ５ｙ＾＾＾ＣＡＲ０）?Ｃａｓｐａｓｅ?１??ＡＩＭ２?？＿．??＾ＣＡＲ＾ｆｐＶＤｌ?ＡＳＣ??Ｃａｓｐａｓｅ－１??Ｎｏｎｃａｎｏｎｉｃａｌ?ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ??Ｃ３?Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ?ＬＰＳ?ｓｅｎｓｏ＜?Ｉ??（＾ｐｌ〇＾＾Ｃ＾＜［ＣＡＲＰｊ）?Ｃａｓｐａｓｅ?１１??圖１．３經(jīng)典炎性小體和非經(jīng)典炎性小體的組成??鼠的ＮＬＲｓ?（ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＰｌｂ和ＮＬＲＣ４）和ＡＬＲ?（ＡＩＭ２）組成的經(jīng)典炎性小體??可以激活ｃａｓｐａｓｅ－１。ＮＬＲｓ都含有ＮＡＣＨＴ和ＬＲＲ結(jié)構(gòu)域，大多數(shù)的ＮＬＲｓ在其Ｎ??端還含有一個ＣＡＲＤ或ＰＹＤ結(jié)構(gòu)域。ＡＩＭ２則由Ｎ端的ＰＹＤ結(jié)構(gòu)域和Ｃ端的ＤＮＡ??結(jié)合結(jié)構(gòu)域ＨＩＮ２００構(gòu)成。ＮＬＲＰｌｂ和ＮＬＲＣ４通過其ＣＡＲＤ結(jié)構(gòu)域募集ｃａｓｐａｓｅ－１，??ＮＬＲＰ３和ＡＩＭ２則通過雙接頭蛋白ＡＳＣ募集ｃａｓｐａｓｅ－１和ｃａｓｐａｓｅ－１１。圖片來源于??Ｌａｍｋａｎｆｉ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１４［６９］?〇??中間區(qū)域的ＮＡＣＴＨ結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)介導(dǎo)炎性小體組裝過程中的同源或異源寡聚化??結(jié)合，Ｎ端的ＰＹＤ結(jié)構(gòu)域則能夠與ＡＳＣ的ＰＹＤ結(jié)構(gòu)域發(fā)生同源結(jié)合，間接地??招募和活化ｃａｓｐａｓｅ－１。ＮＬＲＰ１和ＮＬＲＣ４則可以通過其自身的ＣＡＲＤ結(jié)構(gòu)域與??ｃａｓｐａｓｅ－１的ＣＡＲＤ結(jié)構(gòu)域同源結(jié)合并誘導(dǎo)其激活［４（＞］。ＡＩＭ２和ＩＦＩ１６也是通過其??Ｎ基末端的ＰＹＤ與接頭蛋白ＡＳＣ的Ｐ

?第３章實(shí)驗(yàn)結(jié)果???５５－｜?＾ｍ＾ｒｎｍ?擊?１１???｜?ｊ?＿—－＾?—？?｜?ＧＳＤＭＥ??５５－１?－＂－￣ｉｉ?—?？丨ｒ＾？ｗｐ罾罾勖：譬－?ＧＳＤＭＤ??４〇一一—■?二Ｔ］｜?？？？？？零馨＾?丨丨■，—＿？＿＿■？—卜ａｃｔｉｎ??圖３．１?ＧＳＤＭＥ在不同細(xì)胞系中的表達(dá)??在細(xì)胞狀態(tài)良好的時候收集細(xì)胞，并使用ＲＩＰＡ裂解液進(jìn)行裂解，ＢＣＡ蛋白定量后??各�。担�?ｎｇ總蛋白進(jìn)行ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ檢測。??３．?１．２?ＢＡＫ／ＢＡＸ介導(dǎo)抗腫瘤藥物引起的細(xì)胞焦亡??大量的研宄表明，抗腫瘤藥物大多是通過ＢＡＫ／ＢＡＸ依賴的細(xì)胞凋亡殺死腫??瘤細(xì)胞的。在這一過程中，ＢＡＫ／ＢＡＸ寡聚化引起線粒體外膜透化（ＭＯＭＰ），??釋放細(xì)胞色素ｃ到細(xì)胞質(zhì)中，進(jìn)而激活ｃａｓｐａｓｅ－３，啟動細(xì)胞凋亡程序。邵峰等課??題組［１２４］則發(fā)現(xiàn)化療藥物的處理能夠引起ｃａｓｐａｓｅ－３－ＧＳＤＭＥ介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡的發(fā)??生，這也提示細(xì)胞凋亡和細(xì)胞焦亡信號通路之間可能存在一定程度的交叉重合，??對于二者之間轉(zhuǎn)換關(guān)系的研宄可能有助于我們更好地理解細(xì)胞死亡機(jī)制的調(diào)控。??為了研宄細(xì)胞凋亡效應(yīng)蛋白ＢＡＫ／ＢＡＸ和細(xì)胞焦亡效應(yīng)蛋白ＧＳＤＭＥ二者之間的??調(diào)控關(guān)系，我們選�。牵樱模停鸥弑磉_(dá)和ＧＳＤＭＤ沉默的結(jié)直腸癌細(xì)胞系ＨＣＴ１１６??作為我們的研究對象，并對其ＢＡＫ／ＢＡＸ進(jìn)行了敲除（圖３．２）。??２５－｜?？?｜?Ｂａｋ??十？?１?Ｂａｘ??ｐ－ａｃｔｉｎ??圖３．２?ＢＡＫ／ＢＡＸ敲除效果檢測??ＷＴ：野生型，ＤＫＯ：?ＢＡＫ＿／＿ＢＡＸ＿／＿。??３．?１．２．?１?Ｅｔｏｐｏｓ?ｉ?ｄｅ誘導(dǎo)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]多發(fā)性骨髓瘤相關(guān)基因MMSA-1的表達(dá)及定位研究[J]. 蒙珊,周芙玲,張王剛,曹星梅,王佰言,王嫄,白改改.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2012(01)



本文編號：3578420