本文關(guān)鍵詞：四種農(nóng)業(yè)生境昆蟲內(nèi)生放線菌的篩選、鑒定及抗菌活性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：天然產(chǎn)物(Natual Products)是普遍地存在于整個生態(tài)系統(tǒng)的特殊物質(zhì),是生物活性物質(zhì)和實用藥物發(fā)現(xiàn)的重要源泉,在人類的社會生活中扮演了重要角色。隨著抗生素耐藥性問題的日益嚴峻,迫使新藥的研發(fā)效率急需不斷提高。目前,從傳統(tǒng)分離源中分離新活性天然產(chǎn)物的幾率不斷地降低,進而新分離源的探索不斷引起研究者的關(guān)注。昆蟲種類豐富,其分布也極為廣泛,幾乎遍布地球上的各種生境。昆蟲共生微生物的獨特活性代謝產(chǎn)物,也引起了研究者們的極大興趣。其中,昆蟲共生放線菌的活性代謝產(chǎn)物研究不斷受到研究者的關(guān)注。因此,本研究以昆蟲綱中第一大目鞘翅目甲蟲為分離研究對象,進行內(nèi)生放線菌多樣性研究。將篩選獲得的內(nèi)生放線菌進行新種鑒定和抗病原微生物活性評價,并對活性菌株的活性代謝產(chǎn)物進行分離鑒定,結(jié)果如下:(1)從多種昆蟲樣本中共分離得到內(nèi)生放線菌41株,通過形態(tài)特征、培養(yǎng)特征及部分16S r RNA分析,將這41株菌歸類為放線菌的4個屬,包括鏈霉菌屬(Streptomyces)27株,小單孢菌屬(Micromonospora)11株,鏈孢囊菌屬(Streptosporangium)2株及野野村菌屬(Nonomuraea)1株。(2)綜合運用多相性分類鑒定方法對菌株NEAU-CX1進行分類學鑒定。通過16S rRNA基因序列分析判斷該菌屬于小單孢菌屬。菌株NEAU-CX1與Micromonospora coxensis JCM13248T(99.3%),Micromonospora purpureochromogenes DSM 43821T(99.1%)和Micromonospora siamensis TT2-4 JCM 12769T(99.1%)的16S r RNA基因序列相似性最高,與小單孢菌屬的其它菌株的相似性均低于99%。利用鄰位連接法和最大似然法將菌株NEAU-CX1與該屬的相關(guān)菌株的16S r RNA和gry B基因進行系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建,分析結(jié)果表明,兩種方法得到的拓撲結(jié)構(gòu)相同,菌株NEAU-CX1與M.purpureochromogenes DSM 43821T形成獨立分支。通過形態(tài)特征、生理生化特性、系統(tǒng)分類學及DNA雜交分析確定NEAU-CX1屬于小單孢菌屬的一個新種,命名為Micromonospora palomenae,保藏在中國科學院微生物研究所和日本理化學研究所微生物菌種保藏中心(=CGMCC 4.7175T=JCM 30056T)。(3)綜合運用多相性分類鑒定方法對菌株NEAU-JC6進行分類學鑒定。通過16S rRNA基因序列分析判斷該菌屬于小單孢菌屬。菌株NEAU-JC6與M.haikouensis DSM 45626T(99.3%),M.carbonacea JCM 3139T(99.1%)和M.krabiensis JCM 12869T(99.1%)的16S r RNA基因序列相似性最高,與小單孢菌屬其它菌株的相似性均低于98%。利用鄰位連接法和最大似然法將菌株NEAU-JC6與該屬的相關(guān)菌株的16S r RNA和gry B基因進行系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建,分析結(jié)果表明,兩種方法得到的拓撲結(jié)構(gòu)相同,菌株NEAU-JC6與M.haikouensis DSM45626T形成獨立分支。通過形態(tài)特征、生理生化特性、系統(tǒng)分類學及DNA雜交分析確定NEAU-JC6屬于小單孢菌屬的一個新種,命名為Micromonospora harpali,保藏在中國科學院微生物研究所和日本理化學研究所微生物菌種保藏中心(=CGMCC 4.7173T=JCM 30055T)。(4)綜合運用多相性分類鑒定方法對菌株NEAU-FHSN1進行分類學鑒定。通過16S r RNA基因序列分析判斷該菌屬于鏈孢囊菌屬。菌株NEAU-FHSN1與Streptosporangtum shengliensis NEAU-GH7T(98.7%)的16S r RNA基因序列相似性最高。利用鄰位連接法和最大似然法將菌株NEAU-FHSN與該屬的相關(guān)菌株的16S r RNA基因進行系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建,分析結(jié)果表明,兩種方法得到的拓撲結(jié)構(gòu)相同,菌株NEAU-FHSN1與Streptosporangtum roseum JCM 3005T(98.6%),Streptosporangtum vulgare DSM 43802T(98.6%),Streptosporangtum canum HBUM 170018T(98.5%)和Streptosporangtum album DSM 43023T(98.4%)形成一個獨立的分枝,與最高相似度菌株S.shengliensis NEAU-GH7T(98.7%)分枝距離較遠。通過形態(tài)特征、生理生化特性、系統(tǒng)分類學及DNA雜交分析確定NEAU-FHSN1屬于鏈孢囊菌屬的一個新種,命名為Streptosporangium lutulentum,保藏在中國科學院微生物研究所和德國不倫瑞克市德國菌種保藏中心(=CGMCC 4.7141T=DSM 46740T)。(5)通過對41株共生放線菌進行生物活性體外測試,得到2株生物活性較好的菌株,分別為C7(NEAU-TLV1)和C24(NEAU-T4),其中C7發(fā)酵產(chǎn)物對受試細菌活性較好,C24發(fā)酵產(chǎn)物對受試植物病原真菌活性較好。通過對C7和C24的發(fā)酵產(chǎn)物進行分離純化,經(jīng)鑒定分別得到已知化合物星形孢菌素(Staurosporine)和巴佛洛霉素B1(Bafilomycin B1)。
【關(guān)鍵詞】：昆蟲內(nèi)生放線菌 Micromonospora palomenae Micromonospora harpali Streptosporangium lutulentum 多相分類學 活性化合物
【學位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：Q939.132
【目錄】：

• 摘要11-13
• 英文摘要13-16
• 1 前言16-32
• 1.1 昆蟲共生微生物的研究現(xiàn)狀16-18
• 1.2 昆蟲共生微生物與昆蟲的關(guān)系18-19
• 1.2.1 共生微生物與宿主昆蟲的營養(yǎng)18
• 1.2.2 共生微生物與宿主昆蟲的防御18-19
• 1.3 昆蟲共生放線菌19-30
• 1.3.1 共生放線菌與宿主昆蟲的關(guān)系19-25
• 1.3.2 昆蟲共生放線菌次級代謝產(chǎn)物的研究進展25-30
• 1.4 鞘翅目類昆蟲30-31
• 1.5 研究的內(nèi)容及課題來源31-32
• 1.5.1 研究的目的意義及內(nèi)容31
• 1.5.2 課題來源31-32
• 2 材料與方法32-48
• 2.1 試驗材料32
• 2.1.1 昆蟲樣品32
• 2.1.2 供試菌株32
• 2.2 試劑與儀器32-33
• 2.2.1 試劑32-33
• 2.2.2 主要儀器33
• 2.3 主要培養(yǎng)基及制備方法33-36
• 2.3.1 分離培養(yǎng)基33-34
• 2.3.2 純化培養(yǎng)基34
• 2.3.3 發(fā)酵培養(yǎng)基34
• 2.3.4 生測培養(yǎng)基34
• 2.3.5 生理生化培養(yǎng)基34-35
• 2.3.6 形態(tài)特征觀察培養(yǎng)基35-36
• 2.4 昆蟲樣品內(nèi)生放線菌的分離與純化36-37
• 2.4.1 樣品采集及前處理36
• 2.4.2 昆蟲樣品的內(nèi)生放線菌的分離、純化36-37
• 2.5 新的稀有放線菌的分類學鑒定37-45
• 2.5.1 形態(tài)和培養(yǎng)特征鑒定37
• 2.5.2 生理生化特性鑒定37-39
• 2.5.3 化學分類學鑒定39-42
• 2.5.4 分子水平鑒定42-45
• 2.6 抗菌生物活性檢測45-46
• 2.6.1 發(fā)酵液預(yù)處理45-46
• 2.6.2 發(fā)酵液粗提物抗細菌活性檢測46
• 2.6.3 發(fā)酵液粗提物抗真菌活性檢測46
• 2.7 放線菌NEAU-T4和NEAU-TLV1活性代謝產(chǎn)物的分離及鑒定46-48
• 2.7.1 菌體的發(fā)酵46
• 2.7.2 內(nèi)生菌生物活性代謝產(chǎn)物的分離純化46-47
• 2.7.3 活性化合物的結(jié)構(gòu)鑒定47-48
• 3 結(jié)果與分析48-83
• 3.1 昆蟲內(nèi)生放線菌的分離及初步鑒定48-49
• 3.2 菌株NEAU-CX1的多相分類學鑒定結(jié)果與分析49-59
• 3.2.1 16S r RNA和Gyr B基因測序及系統(tǒng)發(fā)育分析49-50
• 3.2.2 形態(tài)及培養(yǎng)特征50-51
• 3.2.3 生理生化特性51-55
• 3.2.4 微生物細胞化學組分分析結(jié)果55-57
• 3.2.5 菌株的(G+C)mol%含量57-58
• 3.2.6 DNA同源性分析結(jié)果58-59
• 3.3 菌株NEAU-JC6的多相分類學鑒定結(jié)果與分析59-68
• 3.3.1 16S r RNA和Gyr B基因測序及系統(tǒng)發(fā)育分析59
• 3.3.2 形態(tài)及培養(yǎng)特征59-60
• 3.3.3 生理生化特性60-64
• 3.3.4 微生物細胞化學組分分析結(jié)果64-66
• 3.3.5 菌株的(G+C)mol%含量66-67
• 3.3.6 DNA同源性分析結(jié)果67-68
• 3.4 菌株NEAU-FHSN1的多相分類學鑒定結(jié)果與分析68-76
• 3.4.1 16S r RNA基因測序及系統(tǒng)發(fā)育分析68
• 3.4.2 形態(tài)及培養(yǎng)特征68-70
• 3.4.3 生理生化特性70-72
• 3.4.4 微生物細胞化學組分分析結(jié)果72-74
• 3.4.5 菌株的(G+C)mol%含量74-75
• 3.4.6 DNA同源性分析結(jié)果75-76
• 3.5 昆蟲共生放線菌抑菌活性檢測76-78
• 3.5.1 昆蟲共生放線菌抗病原細菌活性檢測76
• 3.5.2 昆蟲共生放線菌抗真菌活性檢測76-78
• 3.6 菌株C7和C24的活性評估及代謝產(chǎn)物的分離78-83
• 3.6.1 菌株C7的活性評估及代謝產(chǎn)物的分離78-80
• 3.6.2 菌株C24的活性評估及代謝產(chǎn)物的分離80-83
• 4 討論83-85
• 4.1 昆蟲共生放線菌的研究83
• 4.2 昆蟲共生放線菌產(chǎn)生的天然產(chǎn)物研究83-85
• 5 結(jié)論85-86
• 5.1 本研究的主要結(jié)論85
• 5.2 本研究的主要創(chuàng)新85-86
• 致謝86-87
• 參考文獻87-96
• 附錄：縮略詞簡表96-97
• 攻讀博士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文97

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7 鐘莉;田新莉;周敏;王韜;成秋香;陳振華;范云;覃重軍;;內(nèi)生放線菌和寄主植物的抑菌活性及其關(guān)系[J];中國抗生素雜志;2008年09期

8 李小林;袁紅梅;戚珊珊;馮茂林;劉洪偉;張小平;;丹參、黃精內(nèi)生放線菌的分離及遺傳多樣性分析[J];微生物學通報;2010年09期

9 金城;;老鼠|內(nèi)生放線菌[J];微生物學通報;2013年09期

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1 秦盛;趙國振;李潔;朱文勇;徐麗華;李文均;;滇南美登木內(nèi)生放線菌多樣性及生物活性初步研究[A];2008年中國微生物學會學術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

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3 王彩霞;董向麗;李保華;于馮;劉海南;;植物內(nèi)生放線菌A-1的鑒定及其防病潛力和防病機制研究[A];中國植物病理學會2009年學術(shù)年會論文集[C];2009年

4 黃麗麗;涂璇;康振生;高小寧;;植物內(nèi)生放線菌TIASA5菌株抑菌活性物質(zhì)的研究[A];中國植物病理學會2008年學術(shù)年會論文集[C];2008年

5 徐紅星;呂仲賢;陳建明;鄭許松;張玨鋒;陳列忠;俞曉平;王向軍;;銀杏內(nèi)生放線菌HG2393菌株發(fā)酵過程及其殺蟲活性的初步研究[A];農(nóng)業(yè)生物災(zāi)害預(yù)防與控制研究[C];2005年

6 王心選;黃麗麗;康振生;;一株生防內(nèi)生放線菌發(fā)酵液的抑菌譜及其穩(wěn)定性研究[A];中國植物病理學會2008年學術(shù)年會論文集[C];2008年

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