本文關(guān)鍵詞：色譜分離材料的設(shè)計(jì)和制備新方法研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：色譜分離材料是色譜技術(shù)的核心,是各種分離模式賴以建立和發(fā)展的基礎(chǔ)。開發(fā)和制備結(jié)構(gòu)新穎、分離性能優(yōu)異的分離材料一直是色譜研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。本論文成功制備了多種新型色譜分離材料,這些材料在手性化合物拆分、堿性化合物分離以及生物樣品中糖蛋白的分離鑒定方面均取得優(yōu)異效果。針對目前β-環(huán)糊精手性固定相存在合成路線繁瑣、穩(wěn)定性差、功能基團(tuán)密度低等問題,我們采用巰基-烯點(diǎn)擊化學(xué)方法快速、高效地將苯基異氰酸酯功能化的p-環(huán)糊精接枝到3-巰丙基功能化二氧化硅微球上,成功制備了β-環(huán)糊精手性固定相。該方法具有反應(yīng)步驟少、操作簡單、反應(yīng)條件溫和、反應(yīng)效率高等特點(diǎn)。該固定相在HPLC中成功地拆分了15種對映體,而且分離的重現(xiàn)性良好。針對堿性化合物在反相液相色譜分離中容易出現(xiàn)色譜峰拖尾的問題,我們在3-氨丙基功能化二氧化硅微球表面依次采用Michael加成反應(yīng)和巰基-炔點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng),制備了分支狀十八烷基修飾的二氧化硅微球固定相。該固定相對三種堿性藥物組成的混合物和延胡索水提物的分離效果明顯優(yōu)于適合極性化合物分離的Atlantis dC 18柱。針對目前常用的親水作用色譜材料在糖肽富集時(shí)出現(xiàn)特異性差、靈敏度低的問題,我們采用可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移(RAFT)聚合方式制備了聚2-(甲基丙烯�；趸�)二甲基-(3-磺酸丙基)氫氧化銨(PMSA)功能化的二氧化硅納米微球(SiO2-RAFT@ PMSA)。該親水性納米微球?qū)θ薎gG胰蛋白酶解液中糖肽檢測限為10 fmol,回收率為88.7%-97.1%。進(jìn)一步將SiO2-RAFT@PMSA應(yīng)用于鼠肝樣品中糖肽的富集,在3次質(zhì)譜重復(fù)中共鑒定到303個(gè)非冗余糖基化位點(diǎn)和185個(gè)糖蛋白,這一結(jié)果明顯優(yōu)于其它方式制備的二氧化硅微球,包括單層功能分子修飾的SiO2@single-MSA、多層不均勻PMSA刷修飾的SiO2@PMSA、商品化ZIC@HILIC材料以及Click Maltose材料。針對目前常用的肼化學(xué)功能化材料在糖肽富集時(shí)存在分離過程耗時(shí)、表面肼基團(tuán)含量低的問題,我們采用RAFT聚合方式制備了肼聚合物刷功能化磁性納米顆粒(Fe3O4@SiO2@GMA-NHNH2)。該材料對糖蛋白酶解液中糖肽的富集效果要明顯優(yōu)于單層肼基團(tuán)修飾磁核(Fe3O4@SiO2-single-NHNH2),并且與商品化的Affi-Gel Hz酰肼微球的性能相當(dāng)。進(jìn)一步將其應(yīng)用于肝癌組織樣品中糖肽的富集,結(jié)果發(fā)現(xiàn)這種新型肼聚合物刷功能化磁性納米顆粒鑒定到的糖基化位點(diǎn)數(shù)為189,而采用單層肼基團(tuán)修飾磁性納米顆粒只能鑒定到68個(gè)糖基化位點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：β-環(huán)糊精手性固定相 堿性化合物分離 糖肽富集 磁性納米顆粒
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：O652.63
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-20
• 1 緒論20-45
• 1.1 手性化合物的分離20-29
• 1.1.1 胺、酰胺以及氨基甲酸酯連接劑制備的CD CSPs22-23
• 1.1.2 脲連接劑制備的CD CSPs23-25
• 1.1.3 醚連接劑制備的CD CSPs25-27
• 1.1.4 聚合物連接劑制備的CD CSPs27-28
• 1.1.5 點(diǎn)擊化學(xué)方式制備的CD CSPs28-29
• 1.2 堿性化合物的分離29-33
• 1.3 糖基化蛋白質(zhì)組的分離富集33-43
• 1.3.1 凝集素親和色譜法34-35
• 1.3.2 親水作用色譜法35-38
• 1.3.3 肼化學(xué)法38-41
• 1.3.4 硼酸親和色譜法41-42
• 1.3.5 糖基化蛋白質(zhì)生物質(zhì)譜鑒定42-43
• 1.4 本文主要研究思路43-45
• 2 全苯基氨基甲酸酯衍生的β-環(huán)糊精手性固定相的新型制備方法45-57
• 2.1 引言45-46
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分46-49
• 2.2.1 材料與試劑46-48
• 2.2.2 單/雙(十一烯酰氧)-全苯基氨基甲酰氧β-環(huán)糊精的合成48
• 2.2.3 3-巰丙基二氧化硅微球的制備48
• 2.2.4 單/雙(十一烷酰氧)-全苯基氨基甲酰氧β-環(huán)糊精功能化二氧化硅微球的合成48
• 2.2.5 β-CD CSP的填裝48
• 2.2.6 儀器設(shè)備48-49
• 2.3 結(jié)果與討論49-56
• 2.3.1 單/雙(十一烯酰氧)-全苯基氨基甲酰氧β-環(huán)糊精及其功能化二氧化硅微球的表征49-51
• 2.3.2 反相模式下對映體拆分能力的考察51-53
• 2.3.3 正相模式下對映體拆分能力的考察53-55
• 2.3.4 對映體分離結(jié)果的重現(xiàn)性55-56
• 2.4 本章小結(jié)56-57
• 3 分支狀十八烷修飾的硅基固定相的合成及其對堿性化合物的分離57-70
• 3.1 引言57-58
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分58-61
• 3.2.1 材料與試劑58
• 3.2.2 3-氨丙基二氧化硅微球的合成58
• 3.2.3 分支狀丙烯酸丙炔酯修飾的二氧化硅微球的制備58-59
• 3.2.4 分支狀十八烷修飾的二氧化硅微球的制備59
• 3.2.5 儀器設(shè)備59-60
• 3.2.6 色譜柱填充60
• 3.2.7 色譜評價(jià)60
• 3.2.8 固定相SiO_2-N(C_(18))_4的應(yīng)用60-61
• 3.3 結(jié)果與討論61-68
• 3.3.1 SiO_2-N(C_(18))_4的表征61-63
• 3.3.2 SiO_2-N(C_(18))_4的保留性能63-65
• 3.3.3 SiO_2-N(C_(18))_4的應(yīng)用65-68
• 3.4 本章小結(jié)68-70
• 4 兩性離子聚合物刷雜化硅納米微球的制備及其應(yīng)用70-87
• 4.1 引言70-71
• 4.2 實(shí)驗(yàn)部分71-77
• 4.2.1 材料與試劑71
• 4.2.2 SiO_2納米顆粒的合成71-72
• 4.2.3 4-(氯甲基)苯基功能化SiO_2納米顆粒的制備72
• 4.2.4 SiO_2-RAFT納米顆粒的合成72
• 4.2.5 SiO_2-RAFT@PMSA納米顆粒的合成72
• 4.2.6 3-甲基丙烯酰氧基丙基功能化的二氧化硅納米顆粒的合成72-74
• 4.2.7 SiO_2@PMSA的合成74
• 4.2.8 3-巰基丙基功能化二氧化硅的合成74
• 4.2.9 SiO_2@single-MSA納米顆粒的合成74
• 4.2.10 蛋白質(zhì)酶解74-75
• 4.2.11 糖肽富集75-76
• 4.2.12 回收率分析76
• 4.2.13 質(zhì)譜分析76-77
• 4.2.14 數(shù)據(jù)庫檢索與數(shù)據(jù)分析77
• 4.2.15 材料表征77
• 4.3 結(jié)果與討論77-85
• 4.3.1 材料的合成與表征77-80
• 4.3.2 富集人IgG酶解液中的糖肽80-83
• 4.3.3 糖肽檢測限83-84
• 4.3.4 糖肽富集的回收率84
• 4.3.5 富集鼠肝樣品中的糖肽84-85
• 4.4 本章小結(jié)85-87
• 5 肼聚合物刷雜化磁性納米顆粒的制備及其應(yīng)用87-102
• 5.1 引言87-88
• 5.2 實(shí)驗(yàn)部分88-94
• 5.2.1. 材料與試劑88
• 5.2.2 Fe_3O_4@SiO_2納米顆粒的合成88-90
• 5.2.3 4-(氯甲基)苯基功能化的Fe_3O_4@SiO_2的合成90
• 5.2.4 Fe_3O_4@SiO_2-RAFT的合成90
• 5.2.5 Fe_3O_4@SiO_2@GMA的合成90
• 5.2.6 Fe_3O_4@SiO_2-single的合成90
• 5.2.7 材料的肼基團(tuán)功能化90-91
• 5.2.8 材料的表征91
• 5.2.9 蛋白質(zhì)提取與酶解91-92
• 5.2.10 糖肽富集92-93
• 5.2.11 質(zhì)譜分析93-94
• 5.3 結(jié)果與討論94-101
• 5.3.1 磁性納米材料的合成與表征94-97
• 5.3.2 富集標(biāo)準(zhǔn)糖蛋白酶解液中的糖肽97-98
• 5.3.3 糖肽檢測限98-99
• 5.3.4 富集半復(fù)雜肽段混合物中的糖肽99-100
• 5.3.5 富集肝癌樣品中的糖肽100-101
• 5.4 本章小結(jié)101-102
• 6 結(jié)論與展望102-105
• 6.1 結(jié)論102-103
• 6.2 創(chuàng)新點(diǎn)103
• 6.3 展望103-105
• 參考文獻(xiàn)105-119
• 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況119-120
• 致謝120-121
• 作者簡介121

  本文關(guān)鍵詞：色譜分離材料的設(shè)計(jì)和制備新方法研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：255110