發(fā)布時(shí)間：2022-01-23 16:55

　　天然過(guò)氧化物酶具有分離過(guò)程復(fù)雜,不易保存和不穩(wěn)定易失活等缺點(diǎn),作為具有高過(guò)氧化物酶催化活性和良好穩(wěn)定性的模擬酶可以替代天然過(guò)氧化物酶應(yīng)用于食品、醫(yī)藥和疾病檢測(cè)等領(lǐng)域。反膠束體系可避免酶與周?chē)袡C(jī)溶劑直接接觸,保護(hù)酶的催化活性和穩(wěn)定性。近年來(lái)已有研究表明適當(dāng)?shù)奈⒉l件可以增強(qiáng)酶的催化活性。本文將具有過(guò)氧化物酶模擬酶活性的甲烷氧化菌素-銅配合物增溶于反膠束體系中,利用微波輔助該模擬酶催化的反應(yīng),旨在尋找增強(qiáng)擬酶活性的新方法。主要研究?jī)?nèi)容如下:利用甲基彎菌OB3b產(chǎn)生的甲烷氧化菌素（Mb）與銅配位結(jié)合合成具有過(guò)氧化物酶活性的模擬酶Mb-Cu,通過(guò)紫外-可見(jiàn)光譜分析監(jiān)測(cè)Mb-Cu模擬酶的合成。使用陽(yáng)離子型CTAB、陰離子型AOT以及非離子型Brij35三種表面活性劑制備反膠束體系。以羅丹明B為探針確定了CTAB的臨界膠束濃度為3?10^-44 mol/L,Brij35的臨界膠束濃度為2?10^-44 mol/L,AOT的臨界膠束濃度為3?10^-44 mol/L。三種反膠束的電導(dǎo)率均隨著含水量增加而增大,未見(jiàn)轉(zhuǎn)折點(diǎn),體系穩(wěn)定。對(duì)反膠束... 

【文章來(lái)源】：哈爾濱商業(yè)大學(xué)黑龍江省

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Mb結(jié)構(gòu)[12]（a）與配位結(jié)合方式

2甲烷氧化菌素-銅擬酶配合物合成及反膠束體系構(gòu)建-25-膠束體系中電導(dǎo)率均沒(méi)有大幅增加的現(xiàn)象存在，據(jù)此推斷反膠束體系處于球形單相區(qū)，形狀規(guī)整，體系穩(wěn)定，可以用作微反應(yīng)器。2.4.7含水量對(duì)反膠束粒徑的影響由于三種反膠束中粒徑與含水量的關(guān)系趨勢(shì)相同，以CTAB為例觀察含水量與膠束粒徑的關(guān)系。配置濃度為310-2mol/L的CTAB反膠束，設(shè)定含水量w分別為0、5、10、15、20、25、30、35，觀察含水量對(duì)膠束粒徑的影響。含水量與反膠束粒徑的關(guān)系如圖2-11所示。圖2-11含水量對(duì)粒徑的影響Fig.2-11Effectofwatercontentonparticlesize由圖可知，當(dāng)表面活性劑濃度不變時(shí)含水量增大反膠束粒徑也隨之增大，同時(shí)膠束分布范圍也有變化。未增溶水時(shí)反膠束的粒徑較小，且分布較窄，當(dāng)體系中有少量水增溶后膠束粒徑略有增加，繼續(xù)增大含水量可以發(fā)現(xiàn)膠束粒徑逐漸增大，且粒徑分布范圍變大，當(dāng)含水量為35時(shí)反膠束粒徑為31.68nm。表明含水量適中時(shí)的反膠束的粒徑比較均勻。這是由于含水量能夠影響反膠束的界面膜強(qiáng)度，含水量較低時(shí)水核中多為結(jié)合水，當(dāng)含水量增大到一定程度后，水核中自由水含量的增加導(dǎo)致界面膜強(qiáng)度的降低，水核的運(yùn)動(dòng)速度以及碰撞頻率均被增強(qiáng)，容易發(fā)生團(tuán)聚也容易引起反膠束中界面膜發(fā)生破裂。2.4.8陳化時(shí)間對(duì)反膠束體系的影響配置濃度為310-2mol/L的CTAB、AOT和Brij35反膠束，加入適量的水溶液，觀察時(shí)間對(duì)反膠束體系的影響，其變化規(guī)律如圖2-12、2-13。由圖可知無(wú)論是陽(yáng)離子型CTAB反膠束、陰離子型AOT反膠束還是非離子型Brij35反膠束，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，初期粒徑略有增大，可能是由于剛制備好的反膠束系統(tǒng)不是特別穩(wěn)定，繼續(xù)延長(zhǎng)時(shí)間粒徑基本保持不變，此時(shí)體系趨于穩(wěn)定。表明反膠束體系可以

4微波輔助反膠束體系中Mb-Cu的擬酶催化反應(yīng)-54-酶的平均活性為5.26710-3mol/L·s。實(shí)際結(jié)果與響應(yīng)面預(yù)測(cè)值的擬合性良好，證明了微波對(duì)反膠束中模擬酶催化有較大的促進(jìn)效果，可以縮短時(shí)間加快反應(yīng)速率。圖4-6因素交互作用效果圖Fig.4-6Interactiondiagramoffactors4.4.6微波輻射與水浴加熱方式對(duì)Mb-Cu擬酶活性的影響將Mb-Cu過(guò)氧化物酶模擬酶分別采用微波輻射與傳統(tǒng)加熱的方式進(jìn)行催化過(guò)氧化氫氧化甲基氫醌的反應(yīng)，觀察不同方式對(duì)Mb-Cu模擬酶催化反應(yīng)的影響，其結(jié)果如圖4-7所示。由圖可知，反膠束體系中Mb-Cu模擬酶催化過(guò)氧化氫氧化甲基氫醌的反應(yīng)中，微波輔助催化反應(yīng)中Mb-Cu模擬酶的催化活性高于水浴加熱反應(yīng)中的催化活性，表明在反膠束體系中微波輻射輻射比水浴加熱有更大的優(yōu)勢(shì)，可以加快反應(yīng)速率，提高M(jìn)b-Cu模擬酶的催化活性。該結(jié)果與微波輻射在非水相酶催化反應(yīng)中相似[120-121]，出現(xiàn)這種結(jié)果可能是由于微波輻射能夠影響Mb-Cu模擬酶的活性中心，使其活性部位更好地與底物結(jié)合，從而增大了模擬酶的催化活性。

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