薤白(Allii macrostemonis bulbus)為百合科植物小根蒜(Allium macrostemon Bge.)或薤(Allium chinense G.Don)的干燥鱗莖,具有抗腫瘤、抗氧化、降脂、解痙、抑菌、抑制動(dòng)脈粥樣硬化等藥理作用,可用于治療冠心病、心絞痛、支氣管哮喘、高血脂以及心肌缺血等疾病。本文從薤白的75%乙醇提取物中分離得到18個(gè)單體化合物(分別標(biāo)記為XB-1~XB-18),利用核磁、質(zhì)譜等波譜學(xué)手段,結(jié)合其理化性質(zhì),鑒定出其中15個(gè)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu),其中2個(gè)為新化合物,1個(gè)為首次從薤白中分離得到的化合物。新化合物分別為(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5α-呋甾-2α,3β,22,26-四醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(化合物XB-15)和26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5α-呋甾-25(27)-烯-3β,22,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(化合物XB-16)。首次分得的化合物為26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5α-呋甾-25(27)-烯-2α,3β,22,26-四醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(化合物XB-12)。在化學(xué)成分研究的基礎(chǔ)上,本文建立了薤白中螺甾型皂苷薤白甙甲(化合物XB-1)和(25R)-5β-螺甾-3β-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(化合物XB-4)含量的SPE-HPLC-ELSD測(cè)定方法。首先,通過(guò)提取溶劑種類、提取方法、提取溶劑用量和提取次數(shù)的考察,確立了最佳提取方法;其次,進(jìn)行了方法學(xué)考察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,化合物XB-1和XB-4分別在0.40~20.00μg和0.20~10.00μg范圍內(nèi)峰面積y(lgS均)和進(jìn)樣濃度x(lgm)線性關(guān)系良好,化合物XB-1和XB-4的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性的RSD值均小于2.0%,加樣回收率的RSD值分別為1.59%和1.87%,說(shuō)明所建立的含量測(cè)定方法具有精密度好、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)。含量測(cè)定結(jié)果表明,化合物XB-1和XB-4的平均含量分別為0.21 mg·g-1和0.07 mg·g-1。本文通過(guò)CCK-8抗腫瘤細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn),對(duì)分得的新化合物(XB-15,25S-構(gòu)型)及其異構(gòu)體(XB-14,25R-構(gòu)型)對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞、黑色素瘤A375細(xì)胞、乳腺癌MCF-7細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞的增殖抑制活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,互為R/S異構(gòu)的化合物XB-14和XB-15對(duì)于肺癌A549細(xì)胞、黑色素瘤A375細(xì)胞和乳腺癌MCF-7細(xì)胞抑制作用均較弱,對(duì)于肝癌HepG2細(xì)胞均具有一定的抑制作用,且R構(gòu)型的化合物XB-14的抑制作用大于XB-15。說(shuō)明相同的化合物對(duì)不同的腫瘤細(xì)胞具有不同的增殖抑制作用,同時(shí)僅僅R/S結(jié)構(gòu)上的不同也會(huì)產(chǎn)生增殖抑制作用上的差異。綜上,本論文從薤白乙醇提取物中共計(jì)分離并鑒定了15個(gè)化合物,其中2個(gè)為新化合物,1個(gè)為首次分得的化合物;建立了薤白藥材中兩種螺甾型皂苷的含量測(cè)定方法;研究了互為R/S異構(gòu)的化合物XB-14和XB-15對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用。本論文的研究結(jié)果為薤白藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的深入研究、薤白質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善以及薤白中甾體皂苷類化合物在抗腫瘤方面的應(yīng)用提供了新的科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：O657;R284.1
文章目錄
摘要
Abstract
第一章 緒論
1.1 植物學(xué)特征
1.1.1 小根蒜
1.1.2 薤
1.2 化學(xué)成分
1.2.1 甾體皂苷類化合物
1.2.2 含硫化合物
1.2.3 含氮化合物
1.2.4 脂肪酸類化合物
1.2.5 多糖類化合物
1.2.6 其他成分
1.3 含量測(cè)定
1.4 藥理活性
1.4.1 抗腫瘤作用
1.4.2 抑制血小板凝聚作用
1.4.3 降脂和抑制動(dòng)脈粥樣硬化
1.4.4 保護(hù)心肌細(xì)胞作用
1.4.5 抗氧化作用
1.4.6 抑菌作用
1.4.7 解痙平喘作用
1.4.8 其他作用
1.5 臨床應(yīng)用
1.5.1 治療冠心病和心絞痛
1.5.2 治療支氣管哮喘
1.5.3 治療高血脂
1.5.4 治療心肌缺血
1.6 研究目的與研究?jī)?nèi)容
第二章 薤白的化學(xué)成分研究
2.1 實(shí)驗(yàn)部分
2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
2.1.2 薤白化學(xué)成分的提取與分離
2.1.2.1 藥材來(lái)源與鑒定
2.1.2.2 藥材提取與分離
2.1.2.3 酸水解與HPLC-MS檢驗(yàn)
2.2 薤白的化學(xué)成分結(jié)構(gòu)鑒定
2.2.1 新化合物的結(jié)構(gòu)解析
2.2.1.1 化合物XB-15 的結(jié)構(gòu)解析
2.2.1.2 化合物XB-16 的結(jié)構(gòu)解析
2.2.2 已知化合物的結(jié)構(gòu)解析
2.2.2.1 化合物XB-12 的結(jié)構(gòu)解析
2.2.2.2 化合物XB-1 的結(jié)構(gòu)解析
2.2.2.3 化合物XB-2 的結(jié)構(gòu)解析
2.2.2.4 化合物XB-3 的結(jié)構(gòu)解析
2.2.2.5 化合物XB-4 的結(jié)構(gòu)解析
2.2.2.6 化合物XB-5 的結(jié)構(gòu)解析
2.2.2.7 化合物XB-6 的結(jié)構(gòu)解析
2.2.2.8 化合物XB-7 的結(jié)構(gòu)解析
2.2.2.9 化合物XB-9 的結(jié)構(gòu)解析
2.2.2.10 化合物XB-10 的結(jié)構(gòu)解析
2.2.2.11 化合物XB-11 的結(jié)構(gòu)解析
2.2.2.12 化合物XB-14 的結(jié)構(gòu)解析
2.2.2.13 化合物XB-17 的結(jié)構(gòu)解析
2.2.3 未確定化合物的結(jié)構(gòu)解析
2.2.3.1 化合物XB-8 的結(jié)構(gòu)分析
2.2.3.2 化合物XB-13 的結(jié)構(gòu)分析
2.2.3.3 化合物XB-18 的結(jié)構(gòu)分析
第三章 SPE-HPLC-ELSD法測(cè)定薤白中螺甾皂苷的含量
3.1 實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及對(duì)照品
3.2 色譜條件
3.2.1 ELSD條件選擇
3.2.2 流動(dòng)相選擇
3.3 提取條件的考察
3.3.1 提取溶劑考察
3.3.2 提取方法考察
3.3.3 液料比考察
3.3.4 提取次數(shù)考察
3.3.5 提取條件的確立
3.4 SPE條件考察
3.4.1 SPE小柱預(yù)處理
3.4.2 樣品前處理
3.4.3 上樣
3.4.4 淋洗劑條件考察
3.4.5 洗脫劑條件考察
3.4.6 供試品溶液的制備
3.4.7 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備
3.5 方法學(xué)考察
3.5.1 線性關(guān)系的考察
3.5.2 精密度實(shí)驗(yàn)
3.5.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
3.5.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
3.5.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)
3.6 含量測(cè)定
3.6.1 供試品溶液的制備
3.6.2 對(duì)照品溶液的制備
3.6.3 樣品的測(cè)定
第四章 薤白皂苷單體的抗腫瘤活性研究
4.1 實(shí)驗(yàn)材料
4.1.1 細(xì)胞株
4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及樣品
4.2 實(shí)驗(yàn)方法
4.2.1 樣品溶液配制
4.2.1.1 pH 7.4 的PBS磷酸鹽緩沖溶液配制
4.2.1.2 化合物XB-14 母液的配制
4.2.1.3 化合物XB-15 母液的配制
4.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
4.2.3 CCK-8 法抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)
4.2.4 數(shù)據(jù)處理
4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
4.3.1 化合物XB-14 的抗腫瘤活性
4.3.2 化合物XB-15 的抗腫瘤活性
4.3.3 小結(jié)
第五章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附圖
作者簡(jiǎn)介
致謝
【相似文獻(xiàn)】
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本文編號(hào)：
1896311
