本文關(guān)鍵詞：雙酚A單克隆抗體的研制及免疫學(xué)檢測(cè)方法的研究

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【摘要】：雙酚A是一種酚類雌激素,廣泛用于水瓶、嬰兒奶瓶、罐頭瓶等食品和飲料容器。這些食品包裝材料中微量的雙酚A可以遷移到食品和周圍環(huán)境中,通過食物鏈或生物鏈進(jìn)入生物體內(nèi),對(duì)人和動(dòng)物的健康造成威脅。本論文旨在建立酶聯(lián)免疫吸附法,用于快速檢測(cè)雙酚A的殘留。本研究以雙酚A的結(jié)構(gòu)類似物雙酚酸為半抗原,采用碳二亞胺法將雙酚酸分別偶聯(lián)到KLH和OVA上,合成免疫抗原BVA-KLH和檢測(cè)抗原BVA-OVA。紫外掃描光譜表明偶聯(lián)成功。以BVA-KLH免疫BALB/c小鼠,采用PEG法將小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0與脾細(xì)胞進(jìn)行融合,成功篩選到2株分泌抗雙酚A抗體的雜交瘤細(xì)胞1G3和3H1。雜交瘤細(xì)胞3H1分泌的抗體為IgG1亞型,輕鏈為κ。建立了雙酚A的ELISA檢測(cè)方法,最低檢測(cè)限(IC10)為0.43ng/mL,檢測(cè)范圍為lng/mL～50ng/mL, IC50為6.56ng/mL。特異性實(shí)驗(yàn)表明,與雙酚S、雙酚酸、對(duì)苯二酚和鄰羥基苯甲酸的交叉反應(yīng)率的交叉反應(yīng)率均小于1%。對(duì)塑料瓶裝的礦泉水和人血清進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn),回收率分別為82.83%-101.94%和70.1%～87.8%,變異系數(shù)分別為2.94%～12.95%和4.79%～9.41%。采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法測(cè)定兒童血清中雙酚A含量,176份血清樣品中,95份可檢出雙酚A,檢出率為54%。全部樣品的雙酚A的濃度范圍為未檢出-26.48ng/mL。男童檢出率高于女童,檢出率差異在不同年齡組間不明顯。綜合各因素,本研究制備了特異性較高的雙酚A單克隆抗體,建立的ELISA方法具有較高的靈敏度和特異性,可用于水樣、人血清等樣品的雙酚A檢測(cè)。
【關(guān)鍵詞】：雙酚A 單克隆抗體 抗原 競(jìng)爭(zhēng)ELISA 血清
【學(xué)位授予單位】：江西科技師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q503
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 緒論11-23
• 1.1 雙酚A概述11-16
• 1.1.1 雙酚A的理化性質(zhì)11-12
• 1.1.2 雙酚A的用途12
• 1.1.3 雙酚A的污染情況12-13
• 1.1.4 雙酚A的危害性13-14
• 1.1.5 雙酚A的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)14-15
• 1.1.6 雙酚A的降解方法15-16
• 1.2 雙酚A殘留檢測(cè)方法研究進(jìn)展16-21
• 1.2.1 紫外分光光度法17
• 1.2.2 氣相色譜法17-18
• 1.2.3 高效液相色譜法18
• 1.2.4 極譜法18-19
• 1.2.5 免疫分析法19-21
• 1.3 本課題的研究意義21-22
• 1.4 本課題的研究思路及內(nèi)容22-23
• 第2章 雙酚A人工抗原的合成與鑒定23-28
• 2.1 材料與儀器23-24
• 2.1.1 材料與試劑23
• 2.1.2 溶液配制23
• 2.1.3 儀器23-24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-25
• 2.2.1 雙酚A免疫抗原的合成24
• 2.2.2 雙酚A檢測(cè)抗原的合成24-25
• 2.2.3 雙酚A人工抗原的鑒定25
• 2.3 結(jié)果與分析25-26
• 2.3.1 雙酚A半抗原及完全抗原的紫外掃描結(jié)果25-26
• 2.4 討論26-27
• 2.4.1 連接臂的選擇26
• 2.4.2 載體的選擇26-27
• 2.4.3 偶聯(lián)方法的選擇27
• 2.5 本章小結(jié)27-28
• 第3章 雙酚A單克隆抗體的制備28-42
• 3.1 材料與儀器28-29
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與細(xì)胞28
• 3.1.2 試劑和材料28-29
• 3.1.3 溶液配制29
• 3.1.4 儀器29
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法29-36
• 3.2.1 動(dòng)物免疫29-30
• 3.2.2 抗血清效價(jià)測(cè)定30
• 3.2.3 抗雙酚A多克隆抗體的特異性測(cè)定30-31
• 3.2.4 細(xì)胞融合31-33
• 3.2.5 雜交瘤細(xì)胞的篩選33-34
• 3.2.6 雜交瘤細(xì)胞的克隆化34-35
• 3.2.7 雜交瘤細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇35
• 3.2.8 單克隆抗體的大量生產(chǎn)35
• 3.2.9 單克隆抗體腹水的純化35-36
• 3.2.10 單克隆抗體蛋白含量的測(cè)定36
• 3.2.11 抗體亞型的鑒定36
• 3.3 結(jié)果與分析36-39
• 3.3.1 免疫血清效價(jià)及特異性的測(cè)定36-37
• 3.3.2 細(xì)胞融合37
• 3.3.3 雜交瘤細(xì)胞的篩選及亞克隆37-38
• 3.3.4 注射雜交瘤細(xì)胞的小鼠形態(tài)變化38-39
• 3.3.5 單克隆抗體蛋白含量的確定39
• 3.3.6 抗體亞型的鑒定39
• 3.4 討論39-41
• 3.4.1 細(xì)胞融合39-40
• 3.4.2 雜交瘤細(xì)胞的篩選及克隆40
• 3.4.3 腹水的純化40-41
• 3.5 本章小結(jié)41-42
• 第4章 雙酚A免疫學(xué)檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用42-60
• 4.1 材料與儀器42-43
• 4.1.1 試劑和材料42-43
• 4.1.2 溶液配制43
• 4.1.3 儀器43
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法43-48
• 4.2.1 檢測(cè)抗原包被濃度及抗體稀釋度的確定43-44
• 4.2.2 間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA操作步驟44
• 4.2.3 雙酚A標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的優(yōu)化44-45
• 4.2.4 抗體稀釋緩沖液pH值的優(yōu)化45
• 4.2.5 ELISA標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的建立及檢測(cè)限的確定45
• 4.2.6 抗體特異性的測(cè)定45
• 4.2.7 塑料瓶裝礦泉水雙酚A加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)45-46
• 4.2.8 間接ELISA法測(cè)定兒童血清中雙酚A含量46-47
• 4.2.9 高效液相色譜(HPLC)法47-48
• 4.3 結(jié)果與分析48-58
• 4.3.1 檢測(cè)抗原包被濃度及抗體稀釋度的確定48-49
• 4.3.2 雙酚A標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的優(yōu)化49-50
• 4.3.3 抗體稀釋緩沖液pH值的優(yōu)化50
• 4.3.4 ELISA標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的建立及檢測(cè)限的確定50-51
• 4.3.5 抗體特異性的測(cè)定51-52
• 4.3.6 塑料瓶裝礦泉水雙酚A加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)52
• 4.3.7 間接ELISA法測(cè)定兒童血清中雙酚A含量52-55
• 4.3.8 高效液相色譜(HPLC)法55-58
• 4.4 討論58
• 4.5 本章小結(jié)58-60
• 第5章 結(jié)論與展望60-61
• 參考文獻(xiàn)61-67
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果67-68
• 致謝68

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1 張麗莎;瞿思宜;倪健;陳娟娟;施曼玲;;雙酚A檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J];杭州師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年05期

2 ;[J];;年期

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1 許龍;雙酚A單克隆抗體的研制及免疫學(xué)檢測(cè)方法的研究[D];江西科技師范大學(xué);2015年

2 馬怡;雙酚酸及其衍生物的合成工藝研究[D];鄭州大學(xué);2008年

3 陳曉玲;聚雙酚酸苯基磷酸酯的合成及其在膨脹阻燃ABS中的應(yīng)用[D];浙江大學(xué);2011年

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本文編號(hào)：954157