發(fā)布時(shí)間：2017-08-14 20:32

  本文關(guān)鍵詞：擬南芥細(xì)胞黏彈性測(cè)定方法的建立

  更多相關(guān)文章： 石英晶體微天平(QCM) 擬南芥原生質(zhì)體 黏彈性 懸浮細(xì)胞 分化

【摘要】：目前,動(dòng)物細(xì)胞力學(xué)的研究已經(jīng)進(jìn)入了主流生物科學(xué)。然而,植物細(xì)胞力學(xué)的研究和監(jiān)測(cè)方法遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于動(dòng)物細(xì)胞。細(xì)胞的黏彈性是與細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能有關(guān)的一個(gè)重要的生物物理學(xué)參數(shù)。本文在優(yōu)化了擬南芥植株再生和懸浮細(xì)胞培養(yǎng)條件的基礎(chǔ)上,將石英晶體微天平(QCM)技術(shù)首次用于擬南芥原生質(zhì)體、愈傷組織和懸浮細(xì)胞黏彈性的動(dòng)態(tài)測(cè)量。在5 MHz Si02石英晶體上修飾帶正電荷的多聚賴氨酸(PLL)、低熔點(diǎn)瓊脂糖/PLL,實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)了擬南芥原生質(zhì)體、愈傷組織和懸浮細(xì)胞在修飾過(guò)的晶體上的黏附過(guò)程,及其對(duì)滲透壓、黏附基質(zhì)等不同條件的響應(yīng)。主要試驗(yàn)結(jié)果如下：1.優(yōu)化了擬南芥不同外植體誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基。擬南芥種子誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為：B5+2 mg/2,4-D+1 mg/L 6-BA+2g/L植物凝膠(pH 5.6)；根和葉片誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為：B5+0.5 mg/L 2,4-D+0.05 mg/L 6-BA+2g/L植物凝膠(pH 5.6)；擬南芥愈傷組織誘導(dǎo)生芽的培養(yǎng)基為：MS+5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA(pH 5.8)；擬南芥愈傷組織誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基為：MS+0.25 mg/LNAA(pH 5.8).2.本試驗(yàn)運(yùn)用QCM技術(shù)研究了擬南芥原生質(zhì)體的動(dòng)態(tài)黏彈性及其在不同滲透壓下的變化規(guī)律。結(jié)果表明擬南芥原生質(zhì)體的黏彈性由細(xì)胞骨架和細(xì)胞膜共同決定。在高滲情況,5 MHz及低泛音次數(shù)下測(cè)得原生質(zhì)體隨滲透壓增加而變硬,這與動(dòng)物細(xì)胞報(bào)道的結(jié)果相似,但高泛音次數(shù)時(shí)測(cè)得原生質(zhì)體隨滲透壓增加而變軟；在低滲時(shí)觀察到的結(jié)果不同于動(dòng)物細(xì)胞,5 MHz時(shí)觀察到原生質(zhì)體具有既可能變軟、又可能變硬的獨(dú)特行為,在更高泛音次數(shù)下觀察到原生質(zhì)體隨滲透壓降低變硬的現(xiàn)象。因此原生質(zhì)體細(xì)胞膜在無(wú)細(xì)胞壁情況下也具有高滲時(shí)變軟、低滲時(shí)變硬的功能。3.對(duì)擬南芥愈傷組織的分化過(guò)程進(jìn)行動(dòng)態(tài)測(cè)定,初步結(jié)果顯示愈傷組織在分化出根和芽的過(guò)程中都有黏彈性的變化,愈傷組織都變硬,并且分化出根的愈傷組織變硬的程度比分化出芽的愈傷組織大。4.對(duì)擬南芥懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè),初步結(jié)果顯示懸浮細(xì)胞在生長(zhǎng)的過(guò)程中有變硬的現(xiàn)象,這與文獻(xiàn)中報(bào)道的指數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞會(huì)變硬的結(jié)論相一致。
【關(guān)鍵詞】：石英晶體微天平(QCM) 擬南芥原生質(zhì)體 黏彈性 懸浮細(xì)胞 分化
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q942
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-21
• 1.1 細(xì)胞生物力學(xué)及其研究9-15
• 1.1.1 植物細(xì)胞力學(xué)的研究9-11
• 1.1.2 細(xì)胞力學(xué)參數(shù)的測(cè)定方法11-15
• 1.215-19
• 1.2.1 植物愈傷組織形成的影響因素15-18
• 1.2.2 植物愈傷組織分化的影響因素18-19
• 1.3 原生質(zhì)體的研究19
• 1.4 研究目的與意義19-21
• 第二章 擬南芥植株再生體系和懸浮細(xì)胞系的建立21-27
• 2.1 材料與方法21-24
• 2.1.1 試驗(yàn)材料21
• 2.1.2 擬南芥愈傷組織誘導(dǎo)21-23
• 2.1.3 擬南芥植株再生體系的建立23
• 2.1.4 擬南芥懸浮細(xì)胞系的建立23-24
• 2.2 結(jié)果與分析24-27
• 2.2.1 擬南芥愈傷組織誘導(dǎo)24-26
• 2.2.2 擬南芥植株再生體系的建立26
• 2.2.3 擬南芥懸浮細(xì)胞系的建立26-27
• 第三章 擬南芥原生質(zhì)體黏彈性的測(cè)定27-40
• 3.1 材料與方法27-29
• 3.1.1 試驗(yàn)材料27
• 3.1.2 試驗(yàn)方法27-29
• 3.2 結(jié)果與分析29-38
• 3.2.1 擬南芥原生質(zhì)體的提取29-30
• 3.2.2 擬南芥原生質(zhì)體黏彈性的測(cè)定30-33
• 3.2.3 RQCM測(cè)定擬南芥原生質(zhì)體不同滲透壓黏彈性的變化33-34
• 3.2.4 Q-sense測(cè)定擬南芥原生質(zhì)體不同滲透壓黏彈性的變化34-36
• 3.2.5 擬南芥原生質(zhì)體不同滲透壓下細(xì)胞形態(tài)的觀察36-38
• 3.3 討論38-40
• 第四章 擬南芥愈傷組織分化過(guò)程中黏彈性的測(cè)定40-44
• 4.1 材料與方法40-41
• 4.1.1 試驗(yàn)材料40
• 4.1.2 試驗(yàn)方法40-41
• 4.2 結(jié)果與分析41-43
• 4.3 討論43-44
• 第五章 擬南芥懸浮細(xì)胞黏彈性的測(cè)定44-46
• 5.1 材料與方法44-45
• 5.1.1 試驗(yàn)材料44
• 5.1.2 試驗(yàn)方法44-45
• 5.2 結(jié)果與分析45-46
• 第六章 全文總結(jié)46-48
• 6.1 小結(jié)46
• 6.2 本研究的主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)46
• 6.3 下一步研究設(shè)想46-48
• 參考文獻(xiàn)48-55
• 致謝55-56
• 作者簡(jiǎn)歷56

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