發(fā)布時(shí)間：2017-07-18 15:19

  本文關(guān)鍵詞：氮素對(duì)印楝組織細(xì)胞基因表達(dá)的影響

  更多相關(guān)文章： 印楝 葉綠素 可溶性蛋白 高通量測(cè)序 轉(zhuǎn)錄組

【摘要】：印楝(Azadirachta indica A.Juss)是一種熱帶植物,含有多種生物活性物質(zhì),其中印楝素的生物活性最強(qiáng)。由于印楝分布區(qū)域狹窄、生長周期長、繁殖率低等因素,以致從種子中提取其天然代謝物的產(chǎn)量低,限制了它的廣泛應(yīng)用。采用生物技術(shù)手段進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)印楝次生代謝物可較好地改善這一問題。MS培養(yǎng)基,在常用培養(yǎng)基中最有利于印楝的組織培養(yǎng),其中的氮素由硝態(tài)氮與銨態(tài)氮組成,二者摩爾比為2：1。當(dāng)硝態(tài)氮與銨態(tài)氮摩爾比為3：1時(shí),印楝素全部積累在胞內(nèi)；當(dāng)硝態(tài)氮與銨態(tài)氮摩爾比為4：1時(shí),印楝素全部分泌到胞外。本論文采用了硝態(tài)氮與銨態(tài)氮摩爾比為2：1、3：1與4：1的3種MS改良培養(yǎng)基,分別培養(yǎng)印楝葉誘導(dǎo)的愈傷組織及其形成的懸浮細(xì)胞。繼代培養(yǎng)25天左右,測(cè)定其生物量、可溶性蛋白、印楝素、檸檬苦素類物質(zhì)和葉綠素含量；并運(yùn)用高通量法對(duì)其細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組的核苷酸序列進(jìn)行測(cè)序,進(jìn)一步比較它們的基因表達(dá)差異性。結(jié)果表明,在N03":NH4+=4:1時(shí),愈傷組織和懸浮細(xì)胞中的生物量均達(dá)到最大值,分別為25.85 g/L和92.13g/L；愈傷組織中的可溶性蛋白、印楝素、檸檬苦素類物質(zhì)和葉綠素也達(dá)到最高含量,分別為12.67 mg/g、37.55μg/g、116.10 μg/g和30.24mg/kg;而在NO3-:NH4+=3:1時(shí),懸浮細(xì)胞中的可溶性蛋白、印楝素、檸檬苦素類物質(zhì)和葉綠素的含量均達(dá)到最大值,分別為10.18 mg/g、35.61μg/g、123.20 μg/g和36.78 mg/kg。不同印楝愈傷組織及細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和基因表達(dá)差異性分析后發(fā)現(xiàn),氮源的含量和形態(tài)的變化對(duì)萜類前體物質(zhì)的生物合成影響較小,僅表現(xiàn)在HMGR還原酶和PPI異構(gòu)酶兩種關(guān)鍵性酶活性的上調(diào)或下調(diào)；對(duì)類黃酮物質(zhì)的生物合成影響較大,表現(xiàn)在多種氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶和異構(gòu)酶的活性調(diào)節(jié)中;同時(shí)也影響著甾醇、細(xì)胞色素P450、核糖體亞基等物質(zhì)的生物合成代謝過程。因此,培養(yǎng)體系中氮素的變化對(duì)印楝印楝素的生物合成代謝有著重要的影響。
【關(guān)鍵詞】：印楝 葉綠素 可溶性蛋白 高通量測(cè)序 轉(zhuǎn)錄組
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q943.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 1 前言8-16
• 1.1 印楝素的來源、應(yīng)用及作用機(jī)理8-9
• 1.2 印楝愈傷組織、懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)9-10
• 1.3 栽培條件對(duì)印楝器官中印楝素含量的影響10-11
• 1.4 組織細(xì)胞培養(yǎng)中印楝素含量的變化11-12
• 1.5 培養(yǎng)基中氮素對(duì)細(xì)胞內(nèi)外印楝素含量的影響12
• 1.6 培養(yǎng)細(xì)胞次生代謝物合成與分泌的基因表達(dá)特點(diǎn)12-14
• 1.7 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序在印楝中的應(yīng)用14-15
• 1.8 研究內(nèi)容及意義15-16
• 1.8.1 立體依據(jù)及研究意義15
• 1.8.2 研究內(nèi)容15-16
• 2 材料與方法16-29
• 2.1 材料16
• 2.2 主要試劑16-18
• 2.3 主要試驗(yàn)儀器18-19
• 2.4 試驗(yàn)方法19-20
• 2.4.1 印楝愈傷組織的誘導(dǎo)19
• 2.4.2 印楝懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系的建立19-20
• 2.4.3 銨態(tài)氮與硝態(tài)氮對(duì)愈傷組織繼代培養(yǎng)的影響20
• 2.4.4 銨態(tài)氮與硝態(tài)氮對(duì)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的影響20
• 2.5 分析方法20-29
• 2.5.1 愈傷組織誘導(dǎo)率的測(cè)定20
• 2.5.2 印楝細(xì)胞生物量的測(cè)定20-21
• 2.5.3 檸檬苦素含量的測(cè)定21-22
• 2.5.4 印楝素的含量測(cè)定22-23
• 2.5.5 印楝細(xì)胞中葉綠素含量的測(cè)定23
• 2.5.6 印楝細(xì)胞中可溶性蛋白的測(cè)定(考馬斯亮藍(lán)法)23-25
• 2.5.7 基因表達(dá)差異性分析25-27
• 2.5.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR27-29
• 3 結(jié)果與討論29-59
• 3.1 氮素對(duì)印楝組織細(xì)胞生長的影響29
• 3.2 氮素對(duì)生物量的影響29-30
• 3.3 氮素對(duì)可溶性蛋白含量的影響30-31
• 3.4 氮素對(duì)印楝素含量的影響31-32
• 3.5 氮素對(duì)檸檬苦素含量的影響32
• 3.6 氮素對(duì)葉綠素含量的影響32-33
• 3.7 RNA提取與文庫構(gòu)建33-35
• 3.8 高通量測(cè)序和Reads的拼接35-37
• 3.9 印楝葉、愈傷組織和懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組功能注釋及其基因表達(dá)差異分析37-39
• 3.10 印楝葉、愈傷組織和懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組代謝途徑的分析39-59
• 3.10.1 差異表達(dá)基因的基因本體學(xué)(GO)分類39-45
• 3.10.2 差異表達(dá)基因的KEGG分析45-59
• 4 結(jié)論59-60
• 5 展望60-61
• 6 參考文獻(xiàn)61-67
• 7 攻讀工學(xué)學(xué)位期間發(fā)表論文情況67-68
• 8 致謝68

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林杏芳;印楝研究的進(jìn)展[J];世界熱帶農(nóng)業(yè)信息;2000年05期

2 樊榮;;印楝在攀枝花的繁植及推廣技術(shù)[J];攀枝花科技與信息;2002年04期

3 ;印楝全身都是寶[J];中國科技信息;2003年Z1期

4 鄭益興;吳疆，

本文編號(hào)：558355