本文關(guān)鍵詞：油橄欖葉中三種活性成分含量動態(tài)變化及橄欖苦苷的分離鑒定與活性研究

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【摘要】：油橄欖(Olea europaea L.)為木犀科(Oleaceae)木犀欖屬(Olea)常綠喬木,是世界上著名的亞熱帶木本油料樹種。不僅其果富含高不飽和脂肪酸的油脂和豐富的酚類物質(zhì),且葉中含有與果實類似甚至含量更高的活性酚類物質(zhì),具有重要的研究前景和應(yīng)用價值。由于我國油橄欖種植起步較晚,目前對其研究主要集中在種質(zhì)資源和果實方面,而對其葉的研究和利用相對更加滯后。在油橄欖種植地,每年修剪和采摘果實季節(jié)產(chǎn)生的大量枝葉絕大多數(shù)被廢棄,造成資源浪費。為此,本文對西昌油橄欖葉中總酚、總黃酮和橄欖苦苷的含量動態(tài)變化以及橄欖苦苷的分離、鑒定和體外活性進行了研究,為油橄欖品種的選育及油橄欖葉的綜合開發(fā)利用提供參考,這對提高果農(nóng)的生產(chǎn)收益,促進我國油橄欖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。其主要研究結(jié)果如下：1.采用福林酚法、三氯化鋁法和紫外-可見光譜差減法分別測定了西昌29個油橄欖品種葉中總酚、總黃酮和橄欖苦苷一年內(nèi)不同時期的含量。結(jié)果表明,不同品種不同月份間油橄欖葉中總酚、總黃酮和橄欖苦苷含量差異較大：全年內(nèi),坦彩的總酚含量最高(37.20%),同時也出現(xiàn)含量最低(14.20%)的品種,但巴利亞的年平均含量最高(30.06%)；切姆阿爾的總黃酮含量最高(1.39%),云臺最低(0.30%),但奧托卡的年平均含量最高(0.82%)；小蘋果的橄欖苦苷含量最高(19.57%),美蘭開最低(1.56%),但巴利亞的年平均含量最高(13.64%)。全年內(nèi),29個油橄欖品種葉中總酚于1月份含量最高,9月份含量最低；橄欖苦苷在1月份含量最高,7月份含量最低；總黃酮在4月份含量最高,7月份含量最低�？傮w變化趨勢為冬春季含量偏高,夏秋季含量偏低。2.分別以80%甲醇、80%乙醇、丙酮、乙酸乙酯、水作為提取溶劑,采用超聲波輔助法對油橄欖葉中活性成分進行提取,并對各溶劑提取物的體外活性和化學成分進行了分析。結(jié)果表明：各溶劑提取物均具有較強的抑菌和抗氧化活性,其中80%甲醇提取物的抑菌和抗氧化活性均最強,乙酸乙酯提取物的抗氧化活性最弱,而水提取物的抑菌活性最弱。經(jīng)液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)分析顯示：水提取物和醇提取物中化合物種類較多,而丙酮提取物和乙酸乙酯提取物中化合物較少。在各溶劑提取物中均含橄欖苦苷和Ligstroside 2種成分,除水提取物外其他溶劑提取的橄欖苦苷含量較高,而水提取物中特有脫乙酰-10-羥基橄欖苦苷甘元和10-羥基橄欖苦苷2種物質(zhì)。3.以80%甲醇為提取溶劑,采用超聲波輔助法對油橄欖葉進行提取,提取液依次經(jīng)過石油醚和乙酸乙酯多次萃取、濃縮、硅膠柱層析、再濃縮、真空干燥,獲得橄欖苦苷純樣；經(jīng)紫外可見光譜(UV)、紅外光譜(IR)、核磁共振(NMR)和質(zhì)譜(MS)分析,以橄欖苦苷標準品為對照,確定提純樣品為橄欖苦苷。HPLC分析顯示,純樣品得率為13.52%,樣品純度達96.54%,純化率為78.49%。4.以Vc和BHT作為陽性對照,采用5種方法綜合評價橄欖苦苷的體外抗氧化活性。結(jié)果顯示：橄欖苦苷具有較強的抗氧化活性,其活性緊次于Vc,且總抗氧化能力、總還原能力和亞硝酸鹽清除能力均強于BHT,而自由基清除能力與BHT相當。因此,橄欖苦苷可以作為更好的、安全的、天然的抗氧化劑、食品添加劑或者防腐劑等廣泛被開發(fā)和應(yīng)用。5.采用濾紙片法考察了橄欖苦苷對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的抑制作用,用稀釋法分析了橄欖苦苷對這3種細菌生長曲線的影響及其最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果表明：橄欖苦苷具有較強的抑菌活性,對大腸桿菌抑制作用最強,MIC為0.025mg/mL；其次為金黃色葡萄球菌,MIC為0.05mg/mL；對枯草芽孢桿菌抑制作用最弱,MIC為0.4mg/mL。橄欖苦苷對3種細菌生長曲線的影響均表現(xiàn)為抑制或延緩細菌的快速生長期。
【關(guān)鍵詞】：油橄欖葉 總酚 總黃酮 橄欖苦苷 含量變化 生物活性
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：Q946
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 第一章 引言12-23
• 1 油橄欖12
• 2 油橄欖中的酚類物質(zhì)12-14
• 2.1 酚類化合物12-13
• 2.2 酚類物質(zhì)的生物活性13-14
• 3 油橄欖中的橄欖苦苷14-22
• 3.1 橄欖苦苷概述14-15
• 3.2 油橄欖中橄欖苦苷的含量變化及其影響因素15-17
• 3.3 油橄欖葉中橄欖苦苷的提取純化和含量測定17-20
• 3.3.1 油橄欖葉的預處理17
• 3.3.2 橄欖苦苷的提取和純化17-19
• 3.3.3 橄欖苦苷的含量測定19-20
• 3.4 橄欖苦苷的穩(wěn)定性20
• 3.5 橄欖苦苷的生物活性20-22
• 3.5.1 藥理活性20-21
• 3.5.2 體外抗氧化活性21
• 3.5.3 體外抑菌活性21-22
• 4 本研究的目的意義22-23
• 第二章 油橄欖葉中總酚、總黃酮和橄欖苦苷含量的動態(tài)變化研究23-35
• 1 材料與方法23-26
• 1.1 材料23-24
• 1.1.1 供試材料及其處理23-24
• 1.1.2 主要試劑24
• 1.1.3 主要儀器24
• 1.2 方法24-26
• 1.2.1 油橄欖葉中總酚含量的測定24-25
• 1.2.1.1 油橄欖葉中總酚的提取24
• 1.2.1.2 油橄欖葉中總酚含量的測定24-25
• 1.2.2 油橄欖葉中總黃酮與橄欖苦苷含量的測定25-26
• 1.2.2.1 油橄欖葉中總黃酮與橄欖苦苷的提取25
• 1.2.2.2 油橄欖葉中總黃酮含量的測定25
• 1.2.2.3 油橄欖葉中橄欖苦苷含量的測定25-26
• 2 結(jié)果與討論26-34
• 2.1 油橄欖葉中總酚含量及其變化規(guī)律26-29
• 2.1.1 福林酚顯色法標準曲線的繪制26-27
• 2.1.2 油橄欖葉中總酚含量分析27-28
• 2.1.3 油橄欖葉中總酚含量的變化規(guī)律28-29
• 2.2 油橄欖葉中總黃酮含量及其變化規(guī)律29-31
• 2.2.1 三氯化鋁顯色法標準曲線的繪制29
• 2.2.2 油橄欖中總黃酮含量分析29-30
• 2.2.3 油橄欖葉總黃酮含量的變化規(guī)律30-31
• 2.3 油橄欖葉中橄欖苦苷含量及其變化規(guī)律31-34
• 2.3.1 亞硝酸鈉顯色法標準曲線的繪制31-32
• 2.3.2 油橄欖中橄欖苦苷含量分析32-33
• 2.3.3 油橄欖葉橄欖苦苷含量的變化規(guī)律33-34
• 3 本章小結(jié)34-35
• 第三章 油橄欖葉不同溶劑超聲提取物的體外抑菌、抗氧化活性與主要成分分析35-48
• 1 材料與方法35-38
• 1.1 材料35-36
• 1.1.1 供試材料35
• 1.1.2 主要試劑35-36
• 1.1.3 主要儀器36
• 1.2 方法36-38
• 1.2.1 油橄欖葉不同溶劑提取物的制備36
• 1.2.2 油橄欖葉不同溶劑提取物的抑菌活性測定36-37
• 1.2.2.1 抑菌活性測定36-37
• 1.2.2.2 最低抑菌濃度測定37
• 1.2.3 油橄欖葉不同溶劑提取物的抗氧化活性測定37
• 1.2.3.1 對DPPH自由基清除活性37
• 1.2.3.2 對ABTS自由基清除活性37
• 1.2.4 油橄欖葉不同溶劑提取物的化學成分分析37-38
• 1.2.4.1 紫外-可見光譜分析37-38
• 1.2.4.2 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析38
• 1.2.5 數(shù)據(jù)處理38
• 2 結(jié)果與討論38-47
• 2.1 油橄欖葉不同溶劑提取物的抑菌活性38-41
• 2.2 油橄欖葉不同溶劑提取物的抗氧化活性41-43
• 2.2.1 對DPPH自由基的清除活性41-42
• 2.2.2 對ABTS自由基的清除活性42-43
• 2.3 油橄欖葉不同溶劑提取物的主要化學成分43-47
• 2.3.1 紫外-可見光譜分析43
• 2.3.2 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析43-47
• 3 本章小結(jié)47-48
• 第四章 油橄欖葉中橄欖苦苷的分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定48-55
• 1 材料與方法48-50
• 1.1 材料48-49
• 1.1.1 供試材料48
• 1.1.2 主要試劑48
• 1.1.3 主要儀器48-49
• 1.2 方法49-50
• 1.2.1 橄欖苦苷純樣的制備49
• 1.2.2 橄欖苦苷的提取效率和純度測定49
• 1.2.3 橄欖苦苷純樣的結(jié)構(gòu)鑒定49-50
• 1.2.3.1 紫外光譜與紅外光譜分析49-50
• 1.2.3.2 核磁共振與質(zhì)譜分析50
• 2 結(jié)果與討論50-54
• 2.1 橄欖苦苷樣品純度和提取效率50-51
• 2.2 橄欖苦苷的結(jié)構(gòu)鑒定51-54
• 2.2.1 紫外光譜分析51
• 2.2.2 紅外光譜分析51-52
• 2.2.3 核磁共振分析52-53
• 2.2.4 質(zhì)譜分析53-54
• 3 本章小結(jié)54-55
• 第五章 橄欖苦苷體外抑菌和抗氧化活性分析55-69
• 1 材料與方法55-58
• 1.1 材料55-56
• 1.1.1 供試材料55
• 1.1.2 主要試劑55
• 1.1.3 主要儀器55-56
• 1.2 方法56-58
• 1.2.1 橄欖苦苷抑菌活性的測定56
• 1.2.1.1 抑菌活性測定56
• 1.2.1.2 橄欖苦苷對3種細菌生長曲線的影響56
• 1.2.1.3 橄欖苦苷對3種細菌最低抑菌濃度測定56
• 1.2.2 橄欖苦苷抗氧化活性的測定56-58
• 1.2.2.1 橄欖苦苷對DPPH自由基的清除活性56-57
• 1.2.2.2 橄欖苦苷對ABTS自由基的清除活性57
• 1.2.2.3 橄欖苦苷的總還原能力測定57
• 1.2.2.4 橄欖苦苷的總抗氧化能力測定57
• 1.2.2.5 橄欖苦苷對亞硝酸鹽的清除能力57-58
• 2 結(jié)果與討論58-68
• 2.1 橄欖苦苷抑菌活性分析58-63
• 2.1.1 橄欖苦苷對3種細菌的抑制作用58-59
• 2.1.2 橄欖苦苷對3種細菌生長曲線的影響59-63
• 2.1.2.1 對大腸桿菌生長曲線的影響59-60
• 2.1.2.2 對金黃色葡萄球菌生長曲線的影響60-61
• 2.1.2.3 對枯草芽孢桿菌生長曲線的影響61-63
• 2.1.3 橄欖苦苷對3種細菌的最低抑菌濃度63
• 2.2 橄欖苦苷的抗氧化活性分析63-68
• 2.2.1 橄欖苦苷對DPPH自由基清除能力63-64
• 2.2.2 橄欖苦苷對ABTS自由基清除能力64-65
• 2.2.3 橄欖苦苷總還原能力65-66
• 2.2.4 橄欖苦苷總抗氧化能力66-67
• 2.2.5 橄欖苦苷亞硝酸鹽清除能力67-68
• 3 本章小結(jié)68-69
• 全文總結(jié)69-70
• 參考文獻70-81
• 致謝81-82
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文82

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本文編號：546128