本文關(guān)鍵詞：基于定點(diǎn)突變技術(shù)對苦蕎麥胰蛋白酶抑制劑活性位點(diǎn)的研究

  更多相關(guān)文章： 苦蕎麥 胰蛋白酶抑制劑 定點(diǎn)突變 表達(dá) 抑制活性

【摘要】：目的:為了研究胰蛋白酶抑制劑的活性位點(diǎn),揭示Ft TI結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。將Ft TI和突變體aFtTI-R65L,aFtTI-D67V和aFtTI-R65L/D67V經(jīng)IPTG誘導(dǎo)培養(yǎng)5h,收集菌液經(jīng)過超聲波破碎得到粗產(chǎn)物,經(jīng)過純化后的胰蛋白酶抑制劑對胰蛋白酶的摩爾抑制比分別為1∶1,1∶1.15,1∶1.3,1∶1.2;抑制常數(shù)Ki分別為1.62n M,1.69 n M,1.9 n M,1.8 n M(BAp NA作為底物)。結(jié)果:SDSPAGE分析表明突變前和突變后表達(dá)產(chǎn)物胰蛋白酶抑制劑的大小一致,均為9.5 k Da。對突變體aFtTI-R65L,aFtTI-D67V和aFtTI-R65L/D67V抑制反應(yīng)溫度研究表明,其最適反應(yīng)溫度均為40℃。在10~80℃保溫30 min后,突變體對胰蛋白酶的抑制活性仍保留80%以上;在90℃保溫30min,突變體的抑制活性開始顯著下降,只保留其39%。具有較高的耐熱性。將aFtTI在pH 3.0~10.0的不同緩沖溶液中放置30 min后,其抑制活性可保留90%左右,在pH 2.0條件下,aFtTI抑制活性喪失約31%;在pH 11.0條件下,aFtTI抑制活性喪失約43%。結(jié)論:對苦蕎麥蛋白酶抑制劑Ft TI的定點(diǎn)突變并不會(huì)改變它是一種偏堿性的胰蛋白酶抑制劑的性質(zhì),突變前后均保持了耐堿性的特點(diǎn)。
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;武漢生物工程學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 苦蕎麥 胰蛋白酶抑制劑 定點(diǎn)突變 表達(dá) 抑制活性
【基金】：四川省科技廳國際合作項(xiàng)目(2010hh0040)資助項(xiàng)目
【分類號】：Q946
【正文快照】： 目前苦蕎在我國西南云貴川紅土高原和北方黃土高原等一些高寒、邊遠(yuǎn)、干旱的山區(qū)和少數(shù)民族聚居地廣泛種植,是當(dāng)?shù)氐闹饕Z食作物和經(jīng)濟(jì)作物。四川省涼山彝族自治州擁有最大面積、最集中分布的苦蕎麥栽種區(qū)域,并且也是苦蕎麥的發(fā)源地之一[1]。胰蛋白酶抑制(Trypsin inhibitor,

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 胡一冰;楊敬東;鄒亮;趙鋼;;苦蕎麥藥理研究及臨床應(yīng)用概況[J];成都大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2006年04期

2 楊敬東;郭露穗;鄒亮;胡一冰;趙鋼;;高藥用價(jià)值多倍體苦蕎麥誘導(dǎo)及特性研究[J];成都大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2007年03期

3 李海平;李靈芝;任彩文;李向東;桑鵬圖;;溫度、光照對苦蕎麥種子萌發(fā)、幼苗產(chǎn)量及品質(zhì)的影響[J];西南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2009年05期

4 牛保山;;淺談苦蕎麥的栽培技術(shù)及其開發(fā)利用[J];科技情報(bào)開發(fā)與經(jīng)濟(jì);2011年12期

5 郭曉娜;姚惠源;;光譜法研究變性劑對苦蕎麥蛋白質(zhì)構(gòu)象的影響[J];光譜學(xué)與光譜分析;2011年06期

6 趙鋼;;營養(yǎng)保健的苦蕎麥[J];大自然;1993年02期

7 趙鋼;楊敬東;鄒亮;;苦蕎麥染色體的加倍研究(英文)[J];成都大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年04期

8 羅定澤,趙佐成,周明德,沈國坤;苦蕎麥(Fagopyrum tataricum)栽培居群的聚類分析和主成分分析[J];四川師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2000年03期

9 唐宇;趙鋼;;光溫條件對苦蕎麥?zhǔn)芫饔玫挠绊慬J];植物生理學(xué)通訊;1988年04期

10 包塔娜,周正質(zhì),張帆,彭樹林,李伯剛;苦蕎麥麩皮的化學(xué)成分研究[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2003年02期

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1 席志勇;王鳳花;;近紅外光譜分析技術(shù)預(yù)處理方法研究進(jìn)展及應(yīng)用[A];中國農(nóng)業(yè)工程學(xué)會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)（CSAE 2011）論文摘要集[C];2011年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者　 岳川 曾海西 通訊員　 丁曉;四川苦蕎麥順利出口日本[N];中國國門時(shí)報(bào);2006年

2 楊曉荔 傅沛;我州苦蕎麥?zhǔn)状沃变N日本[N];涼山日報(bào)(漢);2006年

3 本報(bào)記者 李化民　本報(bào)通訊員 劉潤合 王鵬;苦蕎麥皮何以變廢為寶[N];山西日報(bào);2008年

4 陳志奇;中西部苦蕎麥開發(fā)面臨新機(jī)遇[N];糧油市場報(bào);2001年

5 章洋;苦蕎麥香富裕來[N];中國工商報(bào);2011年

6 曹盈 楊雪;安徽樅陽工商助推苦蕎麥產(chǎn)業(yè)發(fā)展[N];中國食品報(bào);2011年

7 本報(bào)記者 程宗萍　蘇勇 實(shí)習(xí)記者 錢榮倫;將苦蕎麥打造為世界級產(chǎn)業(yè)[N];涼山日報(bào)(漢);2011年

8 仁明;苦蕎麥的營養(yǎng)價(jià)值[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2005年

9 本刊記者 馮海瑞邋喬亭 通訊員 馮海瑞 曹瓊;“苦蕎麥”種植業(yè)在汾西興起[N];山西經(jīng)濟(jì)日報(bào);2007年

10 彭東海;“蕎老”王應(yīng)洪和他的苦蕎麥[N];中國食品質(zhì)量報(bào);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 王曉玲;胡桃醌類物對苦蕎麥生長及保護(hù)酶活性的影響[D];山西大學(xué);2012年

2 凌孟碩;苦蕎麥芽—小米復(fù)合谷物飲料的工藝研究[D];江南大學(xué);2013年

3 楊雪峰;苦蕎麥總黃酮對軟脂酸誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞IRS2/eNOS信號途徑影響的研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2014年

4 汪嘉慶;苦蕎麥的化學(xué)成分研究及槲皮素的結(jié)構(gòu)修飾[D];沈陽藥科大學(xué);2009年

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本文編號：521719