Hippo信號通路參與多種生物學(xué)過程,如胚胎發(fā)育、器官大小調(diào)控、成體干細胞維持、天然免疫調(diào)節(jié)、腫瘤發(fā)生發(fā)展。該通路已經(jīng)成為生命科學(xué)研究的熱點方向。Hippo通路最早于2003年在果蠅中通過EMS介導(dǎo)的突變體篩選被發(fā)現(xiàn),后續(xù)的研究發(fā)現(xiàn),該通路再進化中高度保守。Hippo通路的失調(diào)會導(dǎo)致多種人類疾病,甚至腫瘤發(fā)生。探究Hippo通路活性調(diào)控機制,對于理解發(fā)育、腫瘤發(fā)生,都具有重要意義。果蠅中,Hippo通路通過一系列激酶偶聯(lián)反應(yīng)將信號傳遞給輔助轉(zhuǎn)錄因子Yki,調(diào)控Yki蛋白的磷酸化和亞細胞定位。當Hippo通路處于活化狀態(tài),激酶Hpo和Sav形成具有活性的復(fù)合體,磷酸化下游激酶Wts,Wts被激活。激酶Wts和Mats形成復(fù)合體,磷酸化下游的轉(zhuǎn)錄輔助因子Yki。磷酸化的Yki在細胞質(zhì)中于微管相關(guān)蛋白14-3-3結(jié)合,滯留在細胞質(zhì),無法進入細胞核發(fā)揮轉(zhuǎn)錄活性。當Hippo通路失活,Yki的磷酸化被解除,非磷酸化的Yki蛋白進入細胞核,和轉(zhuǎn)錄因子Sd結(jié)合,共同激活下游靶基因表達。我們最新的研究也顯示,Hippo通路不僅調(diào)控Yki的磷酸化和亞細胞定位,也調(diào)控Yki蛋白的穩(wěn)定性。Hippo通路抑制Y...

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【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 果蠅作為模式生物的基本概況
        1.1.1 果蠅發(fā)育過程簡介
        1.1.2 果蠅作為模式生物的優(yōu)點
        1.1.3 GAL4/UAS系統(tǒng)簡述
        1.1.4 FLP/FRT技術(shù)簡述
        1.1.5 果蠅翅原基模型
    1.2 Hippo信號通路的研究進展
        1.2.1 Hippo信號通路的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 Hippo信號通路簡述
        1.2.3 Hippo信號通路的模式簡述
    1.3 Kto研究進展
        1.3.1 Kto簡介
        1.3.2 Kto與腫瘤發(fā)生
    1.4 研究目的與意義
    1.5 研究思路
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 果蠅品系和培養(yǎng)條件
        2.1.2 試劑耗材及試劑盒
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 信息檢索網(wǎng)站及相關(guān)數(shù)據(jù)處理分析軟件
        2.1.5 實驗所用細胞株系及培養(yǎng)條件
        2.1.6 PCR實驗所用引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 相關(guān)試劑的配制
        2.2.2 果蠅飼養(yǎng)培養(yǎng)基的制備
        2.2.3 DNA片段擴增及載體的構(gòu)建
        2.2.4 果蠅翅原基的解剖及抗體染色
        2.2.5 顯微注射轉(zhuǎn)基因果蠅
        2.2.6 果蠅染色體置換雜交方案
        2.2.7 細胞相關(guān)操作
        2.2.8 Western blotting實驗
        2.2.9 Co-IP實驗
        2.2.10 細胞染色
3 結(jié)果與分析
    3.1 Kto調(diào)控果蠅器官的大小
    3.2 Kto通過Hippo信號通路參與器官大小的調(diào)節(jié)
    3.3 Skd,CDK8和Cyc C參與調(diào)節(jié)果蠅器官大小
    3.4 Skd,CDK8和Cyc C參與調(diào)節(jié)Hippo信號通路活性
    3.5 Kto作用于Hippo信號通路的下游
    3.6 驗證Kto在 Hippo信號通路的作用位點
    3.7 Kto定位于細胞核中
    3.8 Kto、Skd與 Yki存在蛋白-蛋白間互作
    3.9 Yki可能通過招募RNA聚合酶Ⅱ調(diào)控Hippo信號通路
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號：4036387