目的:通過對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)的分離、純化和鑒定,以及誘導(dǎo)BMSCs體外成骨分化,過表達(dá)hsa-miR-223-3p,探討hsa-miR-223-3p對BMSCs成骨分化細(xì)胞的調(diào)控作用。方法:抽取新鮮人骨髓10 mL,通過肝素(2500 U/mL,0.5 mL)抗凝后注入預(yù)置有Percoll密度梯度離心液的試管內(nèi),通過Percoll密度梯度離心法來分離純化單個核細(xì)胞。利用10%FBS DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)檢測鑒定貼壁的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞上相關(guān)表面抗原標(biāo)志物的表達(dá)。使用含地塞米松、β-甘油磷酸鈉、維生素C的成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)人BMSCs向成骨細(xì)胞分化。分別于細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)的第7天、14天、21天,進(jìn)行培養(yǎng)液ALP水平的檢測以及細(xì)胞茜素紅染色。在誘導(dǎo)成功的成骨細(xì)胞中,過表達(dá)hsa-miR-223-3p,通過實(shí)時熒光定量PCR方法檢測Wnt信號通路標(biāo)志物Wnt5a及其下游信號分子OPG、RUNX2的mRNA水平的變化。在蛋白水平上,通過Western blot方法檢測Wnt5a、OPG和RUN...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 分離人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)檢測鑒定
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
第二部分 hsa-miR-223-3p對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化細(xì)胞的影響
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
第三部分 驗(yàn)證hsa-miR-223-3p與Wnt5a的靶定關(guān)系
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
全文結(jié)論
文章的不足之處
參考文獻(xiàn)
英漢縮略詞對照表
miRNA與Wnt信號通路調(diào)控成骨分化的研究進(jìn)展(綜述)
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況
致謝



本文編號：4023721