目的:通過對人骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)的分離、純化和鑒定,以及誘導BMSCs體外成骨分化,過表達hsa-miR-223-3p,探討hsa-miR-223-3p對BMSCs成骨分化細胞的調(diào)控作用。方法:抽取新鮮人骨髓10 mL,通過肝素(2500 U/mL,0.5 mL)抗凝后注入預置有Percoll密度梯度離心液的試管內(nèi),通過Percoll密度梯度離心法來分離純化單個核細胞。利用10%FBS DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞。結合免疫細胞化學檢測鑒定貼壁的人骨髓間充質(zhì)干細胞上相關表面抗原標志物的表達。使用含地塞米松、β-甘油磷酸鈉、維生素C的成骨誘導液誘導人BMSCs向成骨細胞分化。分別于細胞誘導培養(yǎng)的第7天、14天、21天,進行培養(yǎng)液ALP水平的檢測以及細胞茜素紅染色。在誘導成功的成骨細胞中,過表達hsa-miR-223-3p,通過實時熒光定量PCR方法檢測Wnt信號通路標志物Wnt5a及其下游信號分子OPG、RUNX2的mRNA水平的變化。在蛋白水平上,通過Western blot方法檢測Wnt5a、OPG和RUN...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 分離人骨髓間充質(zhì)干細胞,并進行免疫細胞化學檢測鑒定
    材料與方法
    結果
    討論
    結論
第二部分 hsa-miR-223-3p對人骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化細胞的影響
    材料與方法
    結果
    討論
    結論
第三部分 驗證hsa-miR-223-3p與Wnt5a的靶定關系
    材料與方法
    結果
    討論
    結論
全文結論
文章的不足之處
參考文獻
英漢縮略詞對照表
miRNA與Wnt信號通路調(diào)控成骨分化的研究進展(綜述)
    參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況
致謝



本文編號：4023721