芪類化合物是植物體內(nèi)一種重要的植保素,是作為植物參與應(yīng)激反應(yīng)、保護(hù)其免受外界環(huán)境包括微生物侵害的重要物質(zhì)。芪合酶(stilbene synthase,STS)屬于Ⅲ型聚酮化合物合酶(PKSIII)超家族,是芪類化合物合成的關(guān)鍵酶,其活性直接受制于芪合酶基因的活性和表達(dá)。自然界中存在兩種類型的芪類化合物——白藜蘆醇和赤松素。本課題采用白藜蘆醇含量較高的歐洲葡萄作為研究材料,STS基因作為研究對(duì)象,利用反轉(zhuǎn)錄PCR方法,從歐洲葡萄葉片中分離得到了STS基因家族中的一個(gè)成員VvSTS6。通過對(duì)NCBI-UniGene數(shù)據(jù)庫進(jìn)行搜索,最終得到六個(gè)具有完整開放閱讀框(ORF)的歐洲葡萄STS基因,查找與VvSTS6基因編碼的氨基酸序列有較高相似性的其他物種STS氨基酸序列及其對(duì)應(yīng)的基因編碼區(qū)序列(CDS),并對(duì)以上這些基因序列以及氨基酸序列進(jìn)行相關(guān)生物信息學(xué)分析,主要包括葡萄STS基因的生物信息學(xué)分析和不同物種STS基因的分子進(jìn)化研究?jī)刹糠謨?nèi)容:第一部分內(nèi)容涵蓋歐洲葡萄STS基因的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)特征及其生化功能等方面的分析。結(jié)果表明葡萄STS家族蛋白各成員具有相同的保守結(jié)構(gòu)域CHS-like,相...

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 葡萄的生物學(xué)研究概況
    1.2 芪類化合物的研究進(jìn)展
    1.3 芪類化合物的藥理作用
    1.4 芪合酶基因的研究進(jìn)展與應(yīng)用現(xiàn)狀
        1.4.1 芪合酶基因的發(fā)現(xiàn)與分類
        1.4.2 芪合酶的結(jié)構(gòu)特征與功能
        1.4.3 芪合酶基因表達(dá)的研究進(jìn)展
        1.4.4 芪合酶的基因工程研究
    1.5 生物信息學(xué)概述
    1.6 本課題研究的目的及意義
2 葡萄STS基因的克隆
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 溶液的配制
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 葡萄STS基因序列的獲得
        2.2.2 葡萄STS基因的分子克隆
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 葡萄STS基因序列的獲得
        2.3.2 葡萄STS基因的分子克隆
    2.4 本章小結(jié)
3 葡萄STS基因的生物信息學(xué)分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 葡萄STS基因編碼的氨基酸序列的理化性質(zhì)分析
        3.2.2 葡萄STS氨基酸序列保守結(jié)構(gòu)域、coiled-coil結(jié)構(gòu)分析
        3.2.3 葡萄STS氨基酸序列功能位點(diǎn)的分析
        3.2.4 葡萄STS信號(hào)肽、跨膜結(jié)構(gòu)域、亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)和分析
        3.2.5 葡萄STS疏水性/親水性的預(yù)測(cè)和分析
        3.2.6 葡萄STS的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        3.2.7 葡萄STS的三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        3.2.8 葡萄STS基因啟動(dòng)子順式作用元件分析
        3.2.9 葡萄科植物STS氨基酸序列的比對(duì)及親緣關(guān)系分析
    3.3 本章小結(jié)
4 不同物種STS基因的分子進(jìn)化研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 軟件與方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 12種不同植物STS基因密碼子適應(yīng)指數(shù)分析
        4.2.2 不同物種STS多序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化分析
        4.2.3 不同物種STS保守結(jié)構(gòu)域分析
    4.3 本章小結(jié)
5 不同脅迫處理后葡萄STS基因的表達(dá)
    5.1 材料處理
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 葡萄RNA的提取、純化及cDNA的合成
        5.2.2 引物設(shè)計(jì)
        5.2.3 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 葡萄總RNA的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)
        5.3.2 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)
    5.4 結(jié)果分析
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄 高粱和花生的STS蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝



本文編號(hào)：3932684