目的:通過EGFP慢病毒感染大鼠脂肪干細(xì)胞(ADSCs)進(jìn)行標(biāo)記,經(jīng)局部皮下注射移植入同種異體正常大鼠體內(nèi),利用熒光顯微鏡及免疫組化檢測(cè)移植細(xì)胞在大鼠體內(nèi)的分布、遷移和定居情況,評(píng)價(jià)EGFP慢病毒對(duì)大鼠脂肪干細(xì)胞的標(biāo)記及示蹤效果。方法:提取培養(yǎng)大鼠脂肪干細(xì)胞,HE染色查看細(xì)胞形態(tài),成骨、成脂、成軟骨多向誘導(dǎo)分化。CCK8法繪制脂肪干細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。慢病毒攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因以不同的感染復(fù)數(shù)(Multiplicity of infection,MOI)轉(zhuǎn)染ADSCs(MOI=0、1、5、10、25、50),流式細(xì)胞儀測(cè)轉(zhuǎn)染率。CCK8法檢測(cè)標(biāo)記后脂肪干細(xì)胞(EGFP—ADSCs)的增殖能力。標(biāo)記后的脂肪干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)14天、成脂誘導(dǎo)21天、成軟骨誘導(dǎo)14天后分別進(jìn)行堿性磷酸酶、油紅O及阿爾新藍(lán)染色檢測(cè)。將標(biāo)記后的細(xì)胞注射到同種異體大鼠皮下,術(shù)后7天,14天,28天取移植部位及主要臟器(心、肝、脾、肺、腎、腦)行冰凍切片熒光觀察及免疫組織化學(xué)染色,觀察EGFP—ADSCs在體內(nèi)的表達(dá)情況。結(jié)果:提取大鼠脂肪干細(xì)胞24h后見少量貼壁細(xì)胞,形態(tài)多不規(guī)則。傳代后細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)梭形,分布方向規(guī)律...

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
前言
中文摘要
Abstract
英文縮略語對(duì)照表
第1章 引言
第2章 慢病毒攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因標(biāo)記大鼠脂肪干細(xì)胞
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 SD大鼠脂肪干細(xì)胞的提取
        2.3.2 脂肪干細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.3.2.1 脂肪干細(xì)胞純化與傳代
            2.3.2.2 脂肪干細(xì)胞的凍存
            2.3.2.3 脂肪干細(xì)胞的復(fù)蘇
        2.3.3 脂肪干細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)
        2.3.4 繪制脂肪干細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
        2.3.5 脂肪干細(xì)胞成骨、成脂、成軟骨誘導(dǎo)及檢測(cè)
        2.3.6 攜帶EGFP基因的慢病毒轉(zhuǎn)染大鼠脂肪干細(xì)胞
        2.3.7 流式細(xì)胞儀分析陽性轉(zhuǎn)染率
        2.3.8 標(biāo)記后的大鼠脂肪干細(xì)胞(EGFP—ADSCs)增殖能力檢測(cè)
        2.3.9 標(biāo)記后的大鼠脂肪干細(xì)胞成骨、成脂、成軟骨誘導(dǎo)及檢測(cè)
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        2.4.2 脂肪干細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
        2.4.3 脂肪干細(xì)胞成骨、成脂、成軟骨誘導(dǎo)
        2.4.4 轉(zhuǎn)染率分析
        2.4.5 EGFP—ADSCs增殖能力檢測(cè)
        2.4.6 EGFP—ADSCs成骨、成脂、成軟骨誘導(dǎo)
    2.5 討論
第3章 EGFP—ADSCs注入到同種異體正常大鼠體內(nèi)
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇和分組
        3.3.2 EGFP—ADSCs注入到大鼠體內(nèi)
        3.3.3 熒光顯微鏡觀察及HE染色
        3.3.4 EGFP免疫組織化學(xué)檢測(cè)
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 HE染色及EGFP熒光顯微鏡下觀察結(jié)果
        3.4.2 EGFP免疫組織化學(xué)染色結(jié)果
    3.5 討論
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及科研成果
致謝



本文編號(hào)：3864640