發(fā)布時間：2023-10-06 10:35

　　組蛋白變體H2A.Z在真核生物的多種生命活動中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。目前,禾谷鐮孢H2A.Z的功能及其調(diào)控機制尚未見研究報道。本研究通過生物信息學(xué)方法,確定了禾谷鐮孢H2A.Z的編碼基因為FgHtz1;利用基因敲除技術(shù),獲得了FgHtz1基因的敲除突變體;通過對突變體的表型和致病力進行分析,明確了禾谷鐮孢H2A.Z在病菌生長、發(fā)育和致病過程中的功能。研究結(jié)果為闡明H2A.Z調(diào)控禾谷鐮孢生長、發(fā)育和致病力的分子機制奠定了基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:1.試驗構(gòu)建了禾谷鐮孢FgHtz1基因的同源重組載體,利用PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化技術(shù)轉(zhuǎn)化禾谷鐮孢野生型菌株P(guān)H-1,獲得了草銨膦抗性的轉(zhuǎn)化子;利用PCR和qRT-PCR技術(shù)對轉(zhuǎn)化子進行鑒定,確定了所獲得的陽性轉(zhuǎn)化子為FgHtz1基因的敲除突變體,分別命名為AFgHtz1-1、AFgHtz1-2與AFgHtz1-3。2.對FgHtz1基因的敲除突變體的表型和致病力進行分析,發(fā)現(xiàn)突變體的生長速度減慢,色素產(chǎn)生較少,分生孢子變小且產(chǎn)量降低,對玉米的致病力減弱,表明禾谷鐮孢H2A.Z參與病菌的生長、發(fā)育和致病力的調(diào)控過程。3.檢測FgHtz1基因的敲除突變體對...

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮寫詞表
1 引言
    1.1 禾谷鐮孢及其危害
    1.2 表觀修飾是調(diào)控基因表達(dá)的重要方式
    1.3 組蛋白變體的功能及其分子調(diào)控機制
        1.3.1 組蛋白變體H2A.X
        1.3.2 組蛋白變體macroH2A
        1.3.3 組蛋白變體H2Abd
        1.3.4 組蛋白變體H2A.Z
    1.4 本研究目的與意義
2 材料和方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 供試材料
        2.1.2 主要供試試劑、緩沖液及反應(yīng)底物溶液
        2.1.3 主要儀器和設(shè)備
    2.2 試驗方法
        2.2.1 禾谷鐮孢H2A.Z的生物信息學(xué)分析
        2.2.2 禾谷鐮孢基因組DNA的提取與純化
        2.2.3 禾谷鐮孢FgHtz1基因敲除載體的構(gòu)建
        2.2.4 禾谷鐮孢FgHtz1基因敲除突變體的構(gòu)建
        2.2.5 禾谷鐮孢FgHtz1基因敲除轉(zhuǎn)化子的分子鑒定
        2.2.6 FgHtz1基因敲除突變體的表型分析
        2.2.7 FgHtz1基因敲除突變體的致病力測定
        2.2.8 FgHtz1基因敲除突變體對非生物脅迫的敏感性測定
3 結(jié)果與分析
    3.1 禾谷鐮孢H2A.Z的生物信息學(xué)分析
        3.1.1 禾谷鐮孢H2A.Z的系統(tǒng)進化分析
        3.1.2 禾谷鐮孢H2A.Z的保守結(jié)構(gòu)域分析
    3.2 禾谷鐮孢FgHtz1基因敲除突變體的構(gòu)建
        3.2.1 FgHtz1基因敲除載體的構(gòu)建
        3.2.2 轉(zhuǎn)化子的篩選與純化
        3.2.3 轉(zhuǎn)化子的分子鑒定
    3.3 禾谷鐮孢FgHtz1基因突變對病菌生長、發(fā)育的影響
        3.3.1 突變體的生長速率測定
        3.3.2 突變體的菌落形態(tài)觀察
        3.3.3 突變體的菌絲形態(tài)觀察
        3.3.4 突變體的分生孢子形態(tài)觀察
        3.3.5 突變體的產(chǎn)孢量測定
        3.3.6 突變體的生物產(chǎn)量測定
    3.4 禾谷鐮孢FgHtz1基因突變對病菌致病力的影響
    3.5 禾谷鐮孢FgHtz1基因突變對病菌響應(yīng)非生物脅迫的影響
        3.5.1 突變體對滲透脅迫的敏感性測定
        3.5.2 突變體的細(xì)胞壁完整性分析
        3.5.3 突變體對氧脅迫的敏感性測定
4 討論
    4.1 禾谷鐮孢H2A.Z的功能及其調(diào)控機制
    4.2 組蛋白變體H2A.Z與染色質(zhì)重塑復(fù)合物SWR1的關(guān)系
    4.3 組蛋白變體H2A.Z參與氧化脅迫響應(yīng)過程
    4.4 今后的工作設(shè)想
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡歷
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號：3851688