核小體是真核生物染色質(zhì)的基本結構單元,由約147 bp的雙螺旋DNA纏繞在組蛋白八聚體上形成。組蛋白八聚體由H2A、H2B、H3和H4各兩分子的四種常規(guī)組蛋白構成,在體內(nèi)的核小體動態(tài)變化過程中組蛋白能夠發(fā)生翻譯后修飾或被組蛋白變體置換,發(fā)揮了基因組的表觀遺傳調(diào)控能力。核小體結構的組裝及解聚過程能夠直接調(diào)控反式作用因子與染色體上功能元件的接觸能力,影響著生物體內(nèi)轉(zhuǎn)錄,復制,重組和修復等諸多以DNA為模板的生物學過程。核小體的組裝及解聚動力學的研究對于核小體定位具有重要的生物學意義。體內(nèi)的核小體組裝及解聚是高度動態(tài)變化的,且受諸多因素的影響與調(diào)控,其具體的機制與過程并不清楚。目前,通過體外實驗研究核小體的組裝及解聚過程是研究核小體定位機制較為有效的手段。通過構建動力學模型和體外實驗研究核小體的組裝及解聚過程,為進一步研究體內(nèi)核小體滑動、定位等過程對基因表達的調(diào)控及染色質(zhì)動力學的影響奠定基礎,對理解其在眾多生物學過程中發(fā)揮的作用具有重要的理論參考意義。本文主要研究內(nèi)容:1基于化學反應動力學原理提出了核小體組裝動力學模型,并依據(jù)此動力學模型進行了實驗驗證。根據(jù)動力學模型,分別對組裝時間、組蛋白...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 研究背景
    1.1 核小體的結構與功能
        1.1.1 核小體結構
        1.1.2 組蛋白影響核小體結構穩(wěn)定性
        1.1.3 核小體的主要功能
    1.2 核小體定位
        1.2.1 核小體定位調(diào)控基因表達
        1.2.2 影響核小體定位的因素
        1.2.3 核小體動力學與核小體定位
    1.3 核小體定位的研究方法
    1.4 體外組裝核小體動力學的研究意義
    1.5 論文主要研究內(nèi)容
第二章 實驗材料與研究方法
    2.1 DNA序列準備
        2.1.1 菌種與質(zhì)粒
        2.1.2 實驗主要試劑及儀器
        2.1.3 實驗方法
    2.2 組蛋白八聚體準備
        2.2.1 菌種與質(zhì)粒
        2.2.2 實驗主要試劑及儀器
        2.2.3 實驗方法
    2.3 核小體組裝
        2.3.1 時間影響核小體組裝效率
        2.3.2 DNA濃度影響核小體組裝效率
    2.4 高溫刺激核小體體外解聚
        2.4.1 實驗材料
        2.4.2 實驗步驟
    2.5 FRET檢測鹽離子影響核小體結構
        2.5.1 實驗材料
        2.5.2 實驗步驟
        2.5.3 數(shù)據(jù)處理
    2.6 熒光熱漂移實驗體外檢測核小體的解聚狀態(tài)
        2.6.1 實驗材料
        2.6.2 實驗步驟
        2.6.3 數(shù)據(jù)處理
第三章 核小體組裝動力學模型驗證
    3.1 構建核小體組裝動力學模型
    3.2 DNA片段與組蛋白八聚體的獲取
        3.2.1 DNA序列準備
        3.2.2 組蛋白八聚體制備
    3.3 組蛋白濃度與組裝時間影響核小體組裝效率
    3.4 DNA濃度影響核小體組裝效率
    3.5 本章小結
第四章 核小體解聚過程研究
    4.1 FRET檢測核小體實驗體系的建立
        4.1.1 高溫刺激核小體解聚
        4.1.2 鹽離子濃度影響核小體結構
    4.2 FTS檢測體外核小體解聚狀態(tài)
        4.2.1 FTS檢測DNA序列
        4.2.2 FTS檢測組蛋白八聚體
        4.2.3 FTS檢測核小體
    4.3 本章小結
第五章 結論與展望
    5.1 核小體組裝動力學模型
    5.2 核小體解聚動力學特征
    5.3 研究工作展望
在校期間研究成果
參考文獻
附錄 A 實驗材料與藥品
附錄 B 實驗儀器
致謝



本文編號：3822392