本文關(guān)鍵詞：豬GPIHBP1基因啟動子功能研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：脂蛋白酶(Lipoprotein lipase, LPL)在脂質(zhì)的代謝與轉(zhuǎn)運(yùn)過程中起著重要的作用。LPL通過與脂蛋白相互作用,將脂蛋白錨定到血管壁,以促進(jìn)脂蛋白顆粒的吸收,且LPL通過水解富含甘油三酯的脂蛋白還可以為重要組織提供脂質(zhì)營養(yǎng)素。糖基化磷脂酰肌醇錨定高密度脂蛋白結(jié)合蛋白1 (Glycosylphosphatidylinositol-anchored high density lipoprotein-binding protein 1, GPIHBP1)作為LPL重要的調(diào)控因子,其功能是既可以與LPL結(jié)合作為脂肪分解的平臺,又可以作為LPL的載體參與其向毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)。但GPIHBP1基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)理國內(nèi)外迄今未見報(bào)道,因此,GPIHBP1基因啟動子功能至今也未見研究。本研究擬通過對豬GPIHBP1基因啟動子轉(zhuǎn)錄活性的初步研究,找到核心啟動子區(qū)和啟動子區(qū)的主要轉(zhuǎn)錄因子；通過對啟動子區(qū)單核苷酸多態(tài)性的分析,找到與豬脂肪性狀有關(guān)的多態(tài)位點(diǎn)。文章運(yùn)用生物信息學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等實(shí)驗(yàn)方法對豬GPIHBP1基因啟動子功能進(jìn)行了研究,取得結(jié)果如下：1.獲得了豬GPIHBP1基因5’端啟動子區(qū)全長2232 bp的DNA序列,并成功構(gòu)建了豬GPIHBP1基因不同啟動子片段的重組載體：pGL3-95、pGL3-288、pGL3-490、 pGL3-1000、pGL3-1299、pGL3-1966。2.將構(gòu)建好的不同啟動子片段的載體分別轉(zhuǎn)染PK15細(xì)胞,利用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)對啟動子活性進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)：-490—+265區(qū)間的活性最強(qiáng),預(yù)測是核心啟動子所在區(qū)間；-95—+265區(qū)間具有基本啟動子功能,推測這與SOX-9轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合元件有關(guān)；在-95—-490和-1229—-1996區(qū)間存在正調(diào)控,推測這與STER、ADR1與c-ets-1等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合元件有關(guān)；-490—-1227區(qū)間存在負(fù)調(diào),推測這與MyoD、HSF和Barbie Box轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合元件有關(guān)。3.采用PCR產(chǎn)物直接測序法,對6個(gè)品種(藏豬、雅南豬、金華豬、涼山豬、長白豬和杜洛克豬)共56頭個(gè)體的GPIHBP1基因啟動子區(qū)序列進(jìn)行直接測序。共篩選出11個(gè)SNPs位點(diǎn),這些位點(diǎn)均位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游,其中-903 GC位點(diǎn)能被Sma Ⅰ限制酶識別。4.為進(jìn)一步分析這些多態(tài)位點(diǎn)是否影響豬機(jī)體的脂肪代謝,我們在56頭豬群體中,對GPIHBP1基因啟動子區(qū)出現(xiàn)的11個(gè)SNPs與背膘厚進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)-703 GA位點(diǎn)與背膘厚存在顯著相關(guān)性(P0.05),此位點(diǎn)基因型分布在6個(gè)群體中存在極顯著差異(P0.01)。
【關(guān)鍵詞】：豬 GPIHBP1基因 啟動子活性 SNPs
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：Q78;S828
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-21
• 1 GPIHBP1基因研究進(jìn)展11-16
• 1.1 GPIHBP1基因發(fā)現(xiàn)與功能11-12
• 1.2 GPIHBP1的結(jié)構(gòu)12-13
• 1.3 GPIHBP1基因的表達(dá)13-14
• 1.4 GPIHBP1與高乳糜微粒血癥14-15
• 1.5 豬GPIHBP1研究現(xiàn)狀15-16
• 2 啟動子概述16-20
• 2.1 RNA聚合酶Ⅱ啟動子16-17
• 2.3 RNA聚合酶Ⅱ啟動子的分類與特點(diǎn)17-18
• 2.4 啟動子區(qū)的CpG島與DAN甲基化18-20
• 3 本研究的目的及意義20-21
• 第二章 豬GPIHBP1基因啟動子活性初步分析21-47
• 1 試驗(yàn)材料21-26
• 1.1 DNA樣品21
• 1.2 主要儀器和設(shè)備21-22
• 1.3 試驗(yàn)主要試劑22-23
• 1.4 質(zhì)粒、菌種和細(xì)胞23-24
• 1.5 生物信息學(xué)分析軟及參考數(shù)據(jù)庫24-26
• 2 試驗(yàn)方法26-35
• 2.1 基因組DNA的提取與檢測26-27
• 2.2 豬GPIHBP1基因啟動子5’側(cè)翼缺失片段的設(shè)計(jì)27
• 2.3 用于構(gòu)建豬GPIHBP1基因5’側(cè)翼啟動子缺失載體的引物設(shè)計(jì)27-28
• 2.4 豬GPIHBP1基因5’側(cè)翼啟動子缺失載體第一部分的構(gòu)建28-30
• 2.5 豬GPIHBP1基因5’側(cè)翼啟動子缺失載體第二部分的構(gòu)建30-31
• 2.6 去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取31-32
• 2.7 細(xì)胞培養(yǎng)32-33
• 2.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染33-34
• 2.9 雙熒光素酶活性的檢測34
• 2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析34-35
• 3 結(jié)果與分析35-43
• 3.1 基因組DNA的提取與檢測35
• 3.2 豬GPIHBP1基因啟動子區(qū)的生物信息學(xué)分析35-36
• 3.3 豬GPIHBP1基因啟動子目的片段的獲得36
• 3.4 豬GPIHBP1基因啟動子重組載體的構(gòu)建載36-41
• 3.5 GPIHBP1啟動子不同片段重組載體熒光素酶活性分析41-43
• 4 討論43-47
• 4.1 豬、人、小鼠GPIHBP1基因啟動子區(qū)結(jié)構(gòu)比較43-44
• 4.2 豬GPIHBP1基因5’側(cè)翼啟動子活性及轉(zhuǎn)錄因子分析44-47
• 第三章 豬GPIHBP1基因啟動子區(qū)單核苷多態(tài)性研究47-55
• 1 引言47
• 2 試驗(yàn)材料47
• 2.1 試驗(yàn)豬群及表型數(shù)據(jù)47
• 2.2 主要試劑47
• 3 試驗(yàn)方法47-49
• 3.1 GPIHBP1基因啟動子區(qū)SNPs的檢測與分型47-48
• 3.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析48-49
• 4 結(jié)果與分析49-54
• 4.1 豬GPIHBP1基因啟動子區(qū)SNP篩選結(jié)果49-52
• 4.2 豬GPIHBP1基因啟動子SNPs遺傳效應(yīng)分析52-54
• 5 討論54-55
• 第四章 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 致謝61-62
• 附錄62-63
• 碩士在讀期間發(fā)表的論文63

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