牛流行熱(Bovine Ephemeral Fever,BEF)是由牛流行熱病毒(Bovine Ephemeral Fever Virus,BEFV)感染牛引起的一種急性、熱性傳染病。該病可導(dǎo)致產(chǎn)奶量下降和死亡率上升,給我國養(yǎng)牛業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。盡管已經(jīng)生產(chǎn)了許多預(yù)防BEFV感染的商業(yè)疫苗,但目前的預(yù)防和控制策略不能對(duì)感染BEFV的牛提供可持續(xù)的保護(hù)。近年來,宿主因子與病毒的相互作用機(jī)制越來越受到人們的關(guān)注。因此深入研究BEFV復(fù)制的分子機(jī)制,開展病毒與宿主因子互作的研究將有助于我們更好地了解病毒感染的機(jī)制。BEFV基因組共編碼5個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(N、P、M、G、L)和6個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(G_NS、α1、α2、α3、β、γ)。研究表明,病毒蛋白在病毒復(fù)制中發(fā)揮至關(guān)重要的作用,但目前BEFV非結(jié)構(gòu)蛋白的功能在很大程度上是未知的。因此,通過對(duì)BEFV非結(jié)構(gòu)蛋白的功能進(jìn)行研究,為深入探討B(tài)EFV復(fù)制的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。hnRNP K為hnRNPs家族成員,可以與RNA、DNA、蛋白質(zhì)結(jié)合,參與RNA剪切加工、轉(zhuǎn)錄、翻譯調(diào)控、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡等生物學(xué)過程。目前研究表明,hnRNP...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 綜述
    1 BEFV研究進(jìn)展
        1.1 BEF簡介
        1.2 BEF流行病學(xué)
        1.3 BEFV病原學(xué)
        1.4 BEFV診斷與防控
    2 hnRNP K研究進(jìn)展
        2.1 hnRNP K概述
        2.2 hnRNP K基因結(jié)構(gòu)
        2.3 hnRNP K的生物學(xué)功能
        2.4 hnRNP K與病毒的關(guān)系
    3 研究目的及意義
第二章 hnRNP K通過抑制α3 的表達(dá)抑制BEFV復(fù)制
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)毒株和細(xì)胞
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 試劑配制
        1.4 主要儀器及設(shè)備
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞與病毒培養(yǎng)
        2.2 hnRNP K慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建
        2.3 穩(wěn)定細(xì)胞系的建立
        2.4 TCID50 測(cè)定
        2.5 免疫共沉淀
        2.6 蛋白質(zhì)印跡
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 hnRNP K抑制BEFV在 BHK-21 細(xì)胞中的復(fù)制
        3.2 hnRNP K與病毒蛋白α3 互作
        3.3 hnRNP K抑制病毒蛋白α3 的表達(dá)
    4 討論
第三章 hnRNP K通過抑制BEFV誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡抑制病毒復(fù)制
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)毒株和細(xì)胞系
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 試劑配制
        1.4 主要儀器及設(shè)備
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 α3 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
        2.2 細(xì)胞凋亡對(duì)BEFV復(fù)制的影響
        2.3 hnRNP K對(duì) BEFV誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 BEFV非結(jié)構(gòu)蛋白α3 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
        3.2 BEFV感染誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡促進(jìn)病毒復(fù)制
        3.3 hnRNP K抑制BEFV誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡
    4 討論
第四章 caspase3 活性介導(dǎo)hnRNP K的降解
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)毒株和細(xì)胞
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 試劑配制
        1.4 主要儀器及設(shè)備
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞樣品的制備
        2.2 細(xì)胞總RNA提取
        2.3 合成c DNA
        2.4 熒光定量PCR
        2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 BEFV感染下調(diào)hnRNP K蛋白水平表達(dá)
        3.2 BEFV下調(diào)hnRNPK蛋白水平表達(dá)不通過蛋白酶體和自噬溶酶體途徑
        3.3 hnRNP K的降解由caspase3 活性介導(dǎo)
    4 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號(hào)：3739543