牛流行熱(Bovine Ephemeral Fever,BEF)是由牛流行熱病毒(Bovine Ephemeral Fever Virus,BEFV)感染牛引起的一種急性、熱性傳染病。該病可導致產(chǎn)奶量下降和死亡率上升,給我國養(yǎng)牛業(yè)造成重大經(jīng)濟損失。盡管已經(jīng)生產(chǎn)了許多預防BEFV感染的商業(yè)疫苗,但目前的預防和控制策略不能對感染BEFV的牛提供可持續(xù)的保護。近年來,宿主因子與病毒的相互作用機制越來越受到人們的關注。因此深入研究BEFV復制的分子機制,開展病毒與宿主因子互作的研究將有助于我們更好地了解病毒感染的機制。BEFV基因組共編碼5個結構蛋白(N、P、M、G、L)和6個非結構蛋白(G_NS、α1、α2、α3、β、γ)。研究表明,病毒蛋白在病毒復制中發(fā)揮至關重要的作用,但目前BEFV非結構蛋白的功能在很大程度上是未知的。因此,通過對BEFV非結構蛋白的功能進行研究,為深入探討B(tài)EFV復制的分子機制奠定基礎。hnRNP K為hnRNPs家族成員,可以與RNA、DNA、蛋白質結合,參與RNA剪切加工、轉錄、翻譯調控、細胞增殖、細胞凋亡等生物學過程。目前研究表明,hnRNP...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 綜述
    1 BEFV研究進展
        1.1 BEF簡介
        1.2 BEF流行病學
        1.3 BEFV病原學
        1.4 BEFV診斷與防控
    2 hnRNP K研究進展
        2.1 hnRNP K概述
        2.2 hnRNP K基因結構
        2.3 hnRNP K的生物學功能
        2.4 hnRNP K與病毒的關系
    3 研究目的及意義
第二章 hnRNP K通過抑制α3 的表達抑制BEFV復制
    1 實驗材料
        1.1 實驗毒株和細胞
        1.2 實驗試劑
        1.3 試劑配制
        1.4 主要儀器及設備
    2 實驗方法
        2.1 細胞與病毒培養(yǎng)
        2.2 hnRNP K慢病毒表達載體構建
        2.3 穩(wěn)定細胞系的建立
        2.4 TCID50 測定
        2.5 免疫共沉淀
        2.6 蛋白質印跡
    3 實驗結果
        3.1 hnRNP K抑制BEFV在 BHK-21 細胞中的復制
        3.2 hnRNP K與病毒蛋白α3 互作
        3.3 hnRNP K抑制病毒蛋白α3 的表達
    4 討論
第三章 hnRNP K通過抑制BEFV誘導的細胞凋亡抑制病毒復制
    1 實驗材料
        1.1 實驗毒株和細胞系
        1.2 實驗試劑
        1.3 試劑配制
        1.4 主要儀器及設備
    2 實驗方法
        2.1 α3 誘導細胞凋亡
        2.2 細胞凋亡對BEFV復制的影響
        2.3 hnRNP K對 BEFV誘導的細胞凋亡的影響
    3 實驗結果
        3.1 BEFV非結構蛋白α3 誘導細胞凋亡
        3.2 BEFV感染誘導的細胞凋亡促進病毒復制
        3.3 hnRNP K抑制BEFV誘導的細胞凋亡
    4 討論
第四章 caspase3 活性介導hnRNP K的降解
    1 實驗材料
        1.1 實驗毒株和細胞
        1.2 實驗試劑
        1.3 試劑配制
        1.4 主要儀器及設備
    2 實驗方法
        2.1 細胞樣品的制備
        2.2 細胞總RNA提取
        2.3 合成c DNA
        2.4 熒光定量PCR
        2.5 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結果
        3.1 BEFV感染下調hnRNP K蛋白水平表達
        3.2 BEFV下調hnRNPK蛋白水平表達不通過蛋白酶體和自噬溶酶體途徑
        3.3 hnRNP K的降解由caspase3 活性介導
    4 討論
第五章 結論
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文
致謝



本文編號：3739543