毛囊的生長發(fā)育過程受到一系列生長因子和信號通路的調(diào)控,成纖維細(xì)胞生長因子家族和骨形成蛋白家族就是其中兩種參與調(diào)控的生長因子。FGF5在影響被毛長度方面的作用現(xiàn)已被廣泛證實,Noggin主要通過抑制BMPs功能的發(fā)揮進(jìn)而參與毛囊生長發(fā)育的調(diào)控。CRISPR/Cas系統(tǒng)作為一種新興的第三代基因編輯技術(shù),有簡便易行、省時高效的優(yōu)勢,其應(yīng)用對于畜牧育種而言可以大大提高育種的效率,縮短育種時間,減少育種成本,也可以實現(xiàn)許多之前難以完成的工作。本研究的出發(fā)點是希望利用CRISPR/Cas系統(tǒng)和原核顯微注射技術(shù)構(gòu)建FGF5、Noggin雙基因編輯小鼠模型,通過研究這兩個基因?qū)γ野l(fā)育的影響,為加快優(yōu)良產(chǎn)絨性狀絨山羊新品種培育工作提供參考。本實驗通過脫毛實驗觀察小鼠的毛發(fā)生長速度;通過石蠟切片H&E染色的方法檢測小鼠皮膚毛發(fā)的再生情況及毛囊分布和毛干數(shù)目的變化;通過實時定量PCR檢測陽性小鼠皮膚組織中與毛囊發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)情況。1、轉(zhuǎn)基因小鼠的制備通過原核顯微注射法將基于CRISPR/Cas9系統(tǒng)作用機(jī)理構(gòu)建的FGF5-gRNA、pKI-Noggin載體以及Cas9質(zhì)粒注入小鼠受精卵原核中,... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)211工程院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 毛囊及其周期性生長
    2 FGF5及相關(guān)背景介紹
        2.1 成纖維細(xì)胞生長因子及其受體
        2.2 成纖維細(xì)胞生長因子及其受體與毛囊發(fā)育
        2.3 FGF5與毛囊發(fā)育
    3 Noggin基因及相關(guān)背景介紹
        3.1 Noggin基因的發(fā)現(xiàn)
        3.2 Noggin在機(jī)體內(nèi)的表達(dá)
        3.3 Noggin的作用機(jī)制
        3.4 Noggin基因的主要功能
            3.4.1 Noggin與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育
            3.4.2 Noggin與骨骼系統(tǒng)發(fā)育
            3.4.3 Noggin與毛囊發(fā)育
    4 CRISPR/Cas系統(tǒng)簡介
        4.1 基因編輯技術(shù)及CRISPR/Cas系統(tǒng)的出現(xiàn)
        4.2 CRISPR/Cas系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)
        4.3 CRISPR/Cas系統(tǒng)的分類
        4.4 CRISPR/Cas系統(tǒng)的作用機(jī)制
        4.5 CRISPR/Cas系統(tǒng)在家畜育種中的應(yīng)用
        4.6 CRISPR/Cas系統(tǒng)的脫靶效應(yīng)
            4.6.1 CRISPR/Cas系統(tǒng)脫靶效應(yīng)的影響因素
            4.6.2 降低CRISPR/Cas系統(tǒng)脫靶的策略
        4.7 CRISPR/Cas系統(tǒng)應(yīng)用展望
第二章 利用顯微注射技術(shù)制備CRISPR/Cas9介導(dǎo)的FGF5敲除及Noggin過表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠及其鑒定
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要儀器設(shè)備
            2.1.2 活體材料
            2.1.3 外源基因
            2.1.4 主要試劑
        2.2 方法
            2.2.1 注射基因的準(zhǔn)備
            2.2.2 實驗用鼠的準(zhǔn)備
            2.2.3 受精卵的采集
            2.2.4 原核注射
            2.2.5 胚胎移植
            2.2.6 轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定
            2.2.7 轉(zhuǎn)基因小鼠的檢測
            2.2.8 實時定量PCR
    3 結(jié)果
        3.1 Noggin基因過表達(dá)F0代小鼠PCR鑒定結(jié)果
        3.2 F0代小鼠FGF5基因敲除測序結(jié)果
        3.3 轉(zhuǎn)基因陽性小鼠傳代的結(jié)果
        3.4 脫毛實驗觀察小鼠皮膚毛發(fā)再生情況
        3.5 石蠟切片H&E染色觀察毛囊分布與毛干數(shù)目
        3.6 小鼠毛囊發(fā)育相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平
    4 討論
    5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
圖版
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Noggin基因沉默對BMP和Wnt信號通路表達(dá)的影響[J]. 馬雨楠,游穎,沈歡歡,孫兆增,曾林,法云智.  中國實驗動物學(xué)報. 2016(05)
[2]CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)研究進(jìn)展及其在動物基因編輯研究中的應(yīng)用[J]. 王瑋瑋,劉瑞琪,吳勇延,楊嚴(yán)格,王勇勝,卿素珠.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2016(07)
[3]毛囊干細(xì)胞及Noggin對其調(diào)控作用的研究進(jìn)展[J]. 馬雨楠,曾林.  實驗動物科學(xué). 2016(01)
[4]毛囊形態(tài)發(fā)生的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及相關(guān)因子研究進(jìn)展[J]. 胡慧艷,墨鋒濤,賈青,陶文歡,趙思思.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2015(17)
[5]CRISPR/Cas9的應(yīng)用及脫靶效應(yīng)研究進(jìn)展[J]. 鄭武,谷峰.  遺傳. 2015(10)
[6]PDR中血管內(nèi)皮生長因子與纖維化相關(guān)細(xì)胞因子的相關(guān)性[J]. 魏美琪,陳曉隆,馮雪梅,楊宏偉,蓋春柳.  國際眼科雜志. 2015(03)
[7]轉(zhuǎn)基因小鼠在生命科學(xué)中的研究進(jìn)展[J]. 余科科,汪思應(yīng).  醫(yī)學(xué)綜述. 2015(01)
[8]內(nèi)蒙古白絨山羊FGF5基因克隆及其靶向shRNA表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定[J]. 鮑文蕾,其布日,姚睿原,郭志新,朝格圖,王彥鳳,王志鋼.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2014(11)
[9]CRISPR/Cas9系統(tǒng)介導(dǎo)基因組編輯的研究進(jìn)展[J]. 劉志國.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2014(10)
[10]動物毛囊發(fā)育分子調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 康曉龍,李新海,馮登偵.  中國獸醫(yī)雜志. 2014(09)

博士論文
[1]胸腺素β4對小鼠毛發(fā)生長的影響及其作用機(jī)制[D]. 高笑宇.內(nèi)蒙古大學(xué) 2015

碩士論文
[1]利用CRISPR-Cas9技術(shù)構(gòu)建FGF21基因敲除小鼠及其對毛發(fā)生長的作用研究[D]. 張平.內(nèi)蒙古大學(xué) 2016
[2]以原核顯微注射技術(shù)建立Csnk1ε轉(zhuǎn)基因小鼠及其表達(dá)檢測[D]. 王新.內(nèi)蒙古大學(xué) 2016
[3]CRISPR-Cas9介導(dǎo)FGF5敲除及Noggin過表達(dá)對毛發(fā)生長相關(guān)因子影響[D]. 張蒙.內(nèi)蒙古大學(xué) 2015
[4]利用原核顯微注射技術(shù)制備VEGF164轉(zhuǎn)基因小鼠及其檢測[D]. 張志鵬.內(nèi)蒙古大學(xué) 2014



本文編號：3622415