紫紅絲膜菌（Cortinarius rufo-olivaceus（Pere.）Fr.）是主要生長在我國寧夏回族自治區(qū)和內(nèi)蒙古自治區(qū)賀蘭山上的一種非常稀有的大型可食用野生真菌資源。有研究報道該菌的次級代謝產(chǎn)物具有豐富的生物活性。但生于賀蘭山上的大型真菌種類豐富,形態(tài)學(xué)特征相似,根據(jù)形態(tài)特征分類不夠準(zhǔn)確。且關(guān)于紫紅絲膜菌的次級代謝產(chǎn)物和生物活性的研究目前全部集中在其子實(shí)體上。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用表型分類法和基因型分類法兩種方法對紫紅絲膜菌進(jìn)行了鑒定。并分離了紫紅絲膜菌的菌種,通過對比篩選出最合適的培養(yǎng)基對其進(jìn)行批量發(fā)酵培養(yǎng),利用離心、抽濾、萃取及各種色譜技術(shù)將所得發(fā)酵液和菌絲分別進(jìn)行提取分離,利用各種波譜技術(shù)對所得單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。同時,對比了紫紅絲膜菌子實(shí)體次級代謝產(chǎn)物與菌種發(fā)酵培養(yǎng)條件下次級代謝產(chǎn)物的異同,并對菌種發(fā)酵產(chǎn)物的各萃取物進(jìn)行了抗菌活性測試,最終得到如下結(jié)果:1、通過對比文獻(xiàn)中所描述的紫紅絲膜菌的形態(tài)特征確定所采集到的大型真菌為紫紅絲膜菌,利用ITS測序方法對其加以鑒定顯示其與Cortinarius rufo-olivaceus TUB 011463具有99.57%的同源性進(jìn)一步... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

紫紅絲膜菌瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果（A：總DNA，B：PCR產(chǎn)物）

第3章紫紅絲膜菌菌種發(fā)酵次級代謝產(chǎn)物研究34物Cr-15、Cr-17和Cr-18。3.4.5紫紅絲膜菌發(fā)酵產(chǎn)物單體化合物的結(jié)構(gòu)鑒定本實(shí)驗(yàn)中所得到的18個單體化合物的結(jié)構(gòu)主要通過質(zhì)譜和核磁共振譜等波譜數(shù)據(jù)鑒定，所需譜圖委托中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所進(jìn)行打譜提供。3.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.5.1培養(yǎng)基篩選經(jīng)篩選發(fā)現(xiàn)不同培養(yǎng)基上紫紅絲膜菌生長狀態(tài)不同，色素物質(zhì)產(chǎn)量不同。在燕麥汁培養(yǎng)基中，紫紅絲膜菌色素產(chǎn)量高，前期以紅色為主，后期紫色素含量增多，化合物種類豐富，菌液粘稠度高，前期菌絲生長較緩慢，后期菌絲含量增多但比較細(xì)碎，無大面積結(jié)團(tuán)現(xiàn)象。在CD培養(yǎng)基中，紫紅絲膜菌色素產(chǎn)量低，前期以淡橙色為主，生產(chǎn)緩慢，菌液粘稠度較低，固體培養(yǎng)基中前期菌絲生長快，菌絲無法直立，貼在培養(yǎng)基表面。在PD和PD+培養(yǎng)基中，色素生產(chǎn)較慢，以褐色為主，菌液粘稠度低，固體培養(yǎng)基上菌絲生長快且有結(jié)團(tuán)現(xiàn)象。紫紅絲膜菌在不同液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)10d和30d前后狀態(tài)如圖3.1所示。在不同固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)10d后菌絲狀態(tài)如圖3.2所示。圖3.1紫紅絲膜菌在不同液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)10d、30d后發(fā)酵液狀態(tài)（A：接種前培養(yǎng)基，B：培養(yǎng)10d后發(fā)酵液，C：培養(yǎng)30d后發(fā)酵液）Fig.3.1Fermentationbrothbeforeandafter10and30daysofcultureindifferentliquidmedia(A:medium,B:fermentationbrothafter10d,C:fermentationbrothafter30d)

第3章紫紅絲膜菌菌種發(fā)酵次級代謝產(chǎn)物研究35圖3.2紫紅絲膜菌在不同固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)10d后菌絲狀態(tài)（A：PDA培養(yǎng)基，B：PDA+培養(yǎng)基，C：CDA培養(yǎng)基，D：OA培養(yǎng)基）Fig.3.2Myceliumstatusafter10daysofcultureindifferentsolidmedia(A:PDAmedium,B:PDA+medium,C:CDAmedium,D:OAmedium)3.5.2次級代謝產(chǎn)物比較經(jīng)過薄層色譜結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同配方培養(yǎng)基的發(fā)酵液萃取物、菌絲粗提物以及子實(shí)體粗提物的成分有所不同，子實(shí)體和發(fā)酵液的次級代謝產(chǎn)物成分差異相對較大，和菌絲體的次級代謝產(chǎn)物成分差異相對較校且所有石油醚相的成分很少，主要是一些小極性的脂肪酸類化合物，乙酸乙酯和正丁醇相次級代謝產(chǎn)物豐富。不同配方培養(yǎng)基的發(fā)酵液萃取物、菌絲粗提物中以燕麥汁培養(yǎng)基所產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物最為豐富，也最接近子實(shí)體的代謝產(chǎn)物。3.5.3紫紅絲膜菌批量發(fā)酵和提取經(jīng)過對紫紅絲膜菌的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行提取萃取后分別得到液體培養(yǎng)基培養(yǎng)菌絲乙酸乙酯相24g、正丁醇相17g以及萃余水相浸膏42g，菌液乙酸乙酯相41g、正丁醇相33g和萃余水相浸膏58g，固體培養(yǎng)基培養(yǎng)乙酸乙酯相67g、正丁醇相55g和萃余水相浸膏83g。所有萃取物的薄層色譜結(jié)果顯示液體培養(yǎng)基發(fā)酵的紫紅絲膜菌的菌絲和發(fā)酵液中的次級代謝產(chǎn)物差別不大，而固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的紫紅絲膜菌的次級代謝產(chǎn)物與液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的紫紅絲膜菌次級代謝產(chǎn)物有所差別，固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的紫

【參考文獻(xiàn)】：
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