合成生物學(xué)旨在系統(tǒng)地設(shè)計和構(gòu)建能夠用于解決能源、環(huán)境和健康問題的新型生物系統(tǒng),將這些生物系統(tǒng)組合在細(xì)菌中,通過控制細(xì)菌行為達(dá)到生產(chǎn)、醫(yī)療甚至抗腫瘤治療等目的。本研究敲除銅綠假單胞菌PAO1基因組中pelF、pslA-B、pscF、fabV基因,構(gòu)建四重基因突變菌株P(guān)AO1?4,以此為底盤生物,在其體內(nèi)構(gòu)建表達(dá)元件以及自裂解系統(tǒng)(細(xì)胞主動裂解機(jī)制:在菌株P(guān)AO1?4染色體中融合P_PA2069-prtN元件;細(xì)胞被動裂解機(jī)制:敲除菌株P(guān)AO1?4基因組中Pf4絲狀噬菌體的完整編碼基因簇),從而構(gòu)建銅綠假單胞菌工程菌,作為定向投放蛋白的微生物工具。為了評價工程菌中構(gòu)建的生物系統(tǒng)能否工作,本研究在其表達(dá)元件中表達(dá)胞外多糖水解酶PelA和PslG,構(gòu)建了工程菌PAO1102。其工作原理為:在工程菌PAO1102生長時,在過表達(dá)系統(tǒng)作用下,大量表達(dá)并積累胞外多糖水解酶PelA和PslG;工程菌生長在穩(wěn)定生長時期,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到閾值時,銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)開始啟動PA2069啟動子表達(dá)溶菌素激活蛋白PrtN,PrtN激活細(xì)胞產(chǎn)生裂解蛋白而誘導(dǎo)工程菌裂解,使過表達(dá)的胞外多糖水... 

【文章來源】：延安大學(xué)陜西省

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

銅綠假單胞菌工程菌構(gòu)建流程圖

具有定向投放蛋白功能的銅綠假單胞菌工程菌的構(gòu)建和評價-15-圖1-1銅綠假單胞菌工程菌構(gòu)建流程圖Figure1-1Flowchartofconstructionofpseudomonasaeruginosaengineeringbacteria圖1-2工程菌檢測方法Figure1-2Detectionmethodofengineeringbacteria

PAO1pelF突變株構(gòu)建示意圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]銅綠假單胞菌鐵攝取與生物被膜形成研究進(jìn)展[J]. 于珊,馬旅雁.  生物工程學(xué)報. 2017(09)



本文編號：3556006