蒙古冰草（Agropyron Mongolicum Keng）又名沙蘆草,是我國北方寒冷干旱地區(qū)（內(nèi)蒙古、山西、陜西、甘肅等省區(qū)）的優(yōu)良禾本科牧草及草地植被恢復(fù)的重要資源,對我國農(nóng)牧業(yè)發(fā)展和生態(tài)環(huán)境的改善具有重要意義。落粒是植物為了抵御外界環(huán)境、繁衍后代,長期演化形成的一種適應(yīng)機制,具有重要的生物學(xué)意義。但在牧草種子生產(chǎn)中,落粒性嚴(yán)重影響種子的產(chǎn)量和質(zhì)量,為其生產(chǎn)造成巨大損失�；陔s交等方法的傳統(tǒng)育種方法,效率低下,耗時耗力,且依賴育種專家的經(jīng)驗;隨機誘變的方法需要耗費大量的人力物力進行突變體的篩選;基因組定點編輯技術(shù)則具有巨大的優(yōu)勢,但傳統(tǒng)的基因組定點編輯技術(shù)過程復(fù)雜,價格高昂,很難得到廣泛的應(yīng)用。由RNA-介導(dǎo)的CRISPR/Cas9系統(tǒng)作為新興的基因組定點編輯技術(shù),因其構(gòu)建簡單、精確度高、成本低、能同時對多個靶位點進行編輯等優(yōu)勢,已成為基因功能研究及分子育種改良的有效工具。目前,CRISPR/Cas9系統(tǒng)作為高效的基因組編輯技術(shù)在多年生牧草-蒙古冰草中的應(yīng)用尚未見報道。本研究分兩部分內(nèi)容,一部分是蒙古冰草原生質(zhì)體提取條件的優(yōu)化及瞬時轉(zhuǎn)化體系的建立;另一部分開展了在原生質(zhì)體水平利用... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 原生質(zhì)體分離及轉(zhuǎn)化概況
        1.1.1 原生質(zhì)體分離
        1.1.2 原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化
    1.2 CRISPR-Cas系統(tǒng)研究概況
        1.2.1 研究歷史
        1.2.2 CRISPR基因座結(jié)構(gòu)
        1.2.3 CRISPR-Cas系統(tǒng)分類及免疫作用機制
        1.2.4 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的設(shè)計原理
        1.2.5 CRISPR/Cas9系統(tǒng)應(yīng)用
        1.2.6 CRISPR/Cas9系統(tǒng)展望
    1.3 落粒相關(guān)基因研究進展
    1.4 技術(shù)路線
    1.5 研究目的及意義
2 蒙古冰草葉肉細胞原生質(zhì)體分離最適條件的探索及瞬時表達體系的建立
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗儀器與試劑
        2.1.3 試劑配制
        2.1.4 植株培養(yǎng)
        2.1.5 原生質(zhì)體的提取與轉(zhuǎn)化
        2.1.6 原生質(zhì)體活力測定
        2.1.7 原生質(zhì)體的轉(zhuǎn)化
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 蒙古冰草幼莖原生質(zhì)體最佳分離條件的確定
        2.2.2 蒙古冰草幼苗葉片原生質(zhì)體最佳分離條件的確定
        2.2.3 蒙古冰草幼莖和葉片原生質(zhì)體分離比較
    2.3 討論
    2.4 結(jié)論
3 利用CRISPR/Cas9技術(shù)對蒙古冰草落粒相關(guān)基因Sh1基因進行研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗儀器與試劑
        3.1.3 原始載體
        3.1.4 載體的構(gòu)建
        3.1.5 大腸桿菌轉(zhuǎn)化(熱激法)
        3.1.6 大腸桿菌中質(zhì)粒的提取
        3.1.7 原生質(zhì)體提取及轉(zhuǎn)化
        3.1.8 植物基因組DNA提取
        3.1.9 突變體檢測方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 序列查找與靶位點選擇
        3.2.2 CRISPR/Cas9載體構(gòu)建
        3.2.3 突變體檢測
        3.2.4 突變率及突變類型的統(tǒng)計和計算
    3.3 討論
    3.4 結(jié)論
致謝
參考文獻
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]普通小麥幼苗葉肉細胞原生質(zhì)體分離方法的優(yōu)化[J]. 席海秀,艾可筠,佟少明.  生物技術(shù)通報. 2016(04)
[2]植物CRISPR/Cas9基因組編輯系統(tǒng)與突變分析[J]. 馬興亮,劉耀光.  遺傳. 2016(02)
[3]禾本科植物原生質(zhì)體分離研究進展[J]. 彭小群,唐然,解新明.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2015(01)
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[5]玉米胚乳細胞原生質(zhì)體的分離與流式純化[J]. 郭艷萍,任成杰,李志偉,王文斌,張仁和,路海東,劉建超,張興華,薛吉全,郭東偉.  作物學(xué)報. 2014(03)
[6]雜花和紫花苜蓿原生質(zhì)體分離培養(yǎng)條件的篩選[J]. 李玉珠,師尚禮.  西北植物學(xué)報. 2014(01)
[7]玉米、小麥、水稻原生質(zhì)體制備條件優(yōu)化[J]. 孫鶴,郎志宏,朱莉,黃大昉.  生物工程學(xué)報. 2013(02)
[8]人工鋅指核酸酶介導(dǎo)的基因組定點修飾技術(shù)[J]. 肖安,胡瑩瑩,王唯曄,楊志芃,王展翔,黃鵬,佟向軍,張博,林碩.  遺傳. 2011(07)
[9]小麥愈傷組織誘導(dǎo)及原生質(zhì)體的分離與純化[J]. 張小紅,閔東紅,邵景俠.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2010(21)
[10]草地早熟禾原生質(zhì)體培養(yǎng)與融合[J]. 趙小強,馬暉玲,周萬海,林棟.  核農(nóng)學(xué)報. 2010(04)

碩士論文
[1]擬南芥原生質(zhì)體分離及水稻植酸酶基因OsMINPP瞬時表達研究[D]. 趙嚴(yán)偉.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]擬南芥葉肉原生質(zhì)體分離及瞬時表達體系的建立[D]. 梁大偉.蘭州大學(xué) 2009
[3]水稻OsSPX家族表達特征分析[D]. 黃紅杰.浙江大學(xué) 2006



本文編號：3535077