發(fā)布時間：2021-11-02 19:28

　　脯氨酸內(nèi)肽酶（Prolyl endopeptidase,PEP,[EC 3.4.21.26]）,也稱脯氨酰寡肽酶（Prolyl oligopeptidase,POP）,是絲氨酸蛋白酶家族中的一類水解酶。該酶在脯氨酸殘基羧基端水解小肽（<33個氨基酸）。本研究以來源于皺紋盤鮑（Haliotis discus hannai）肌肉的重組PEP（Hdh-PEP）為研究對象,對Hdh-PEP的酶學(xué)性質(zhì)、結(jié)構(gòu)特征以及功能進(jìn)行了相關(guān)研究。熒光定量PCR分析表明Hdh-PEP在鮑魚各組織中均有分布,且在性腺、肌肉及血液中表達(dá)量較高。以Suc-Gly-Pro-MCA為底物,檢測鮑魚不同組織中Hdh-PEP的酶活,發(fā)現(xiàn)在性腺中酶活力最高。通過培養(yǎng)表達(dá)菌株獲取較高濃度的重組Hdh-PEP,并檢測其比活力為6.52 U/mg。圓二色光譜分析顯示,Hdh-PEP二級結(jié)構(gòu)無規(guī)卷曲（47.3%）占比最多,β-折疊和α-螺旋分別占比31.6%和21.1%。蛋白晶體結(jié)構(gòu)顯示,Hdh-PEP由催化結(jié)構(gòu)域和β-螺旋槳結(jié)構(gòu)域兩部分組成,兩個區(qū)域一側(cè)通過鉸鏈連接,二者因氫鍵、鹽橋以及疏水作用力而靠近,呈閉合式構(gòu)象。Hdh... 

【文章來源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略表
第1章 引言
    1.1 鮑魚
    1.2 脯氨酸內(nèi)肽酶(PEP)的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 PEP的分布情況
        1.2.2 PEP的基本性質(zhì)
        1.2.3 PEP在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的研究
        1.2.4 PEP在食品領(lǐng)域中的研究
    1.3 研究意義及研究內(nèi)容
        1.3.1 研究意義
        1.3.2 研究內(nèi)容
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料與試劑
        2.1.1 實驗原料
        2.1.2 實驗試劑
    2.2 實驗所用溶液及其配制方法
        2.2.1 Hdh-PEP原核表達(dá)所用溶液
        2.2.2 Hdh-PEP純化所用緩沖液
        2.2.3 SDS-PAGE所用溶液
        2.2.4 Western blotting所用溶液
        2.2.5 Hdh-PEP晶體培養(yǎng)所用溶液
        2.2.6 不同pH值緩沖液
    2.3 實驗儀器與設(shè)備
    2.4 實驗方法
        2.4.1 Hdh-PEP的表達(dá)及純化
        2.4.2 Hdh-PEP的酶活力測定
        2.4.3 兔抗Hdh-PEP多克隆抗體的制備
        2.4.4 Hdh-PEP在鮑魚各組織中基因水平的表達(dá)差異
        2.4.5 Hdh-PEP在鮑魚各組織中的酶活性差異
        2.4.6 圓二色光譜分析
        2.4.7 熒光光譜法分析
        2.4.8 Hdh-PEP晶體培養(yǎng)及結(jié)構(gòu)解析
        2.4.9 不同物種PEP的結(jié)構(gòu)差異分析
        2.4.10 Hdh-PEP底物通道分析
        2.4.11 分子動力學(xué)模擬
        2.4.12 胰蛋白酶對Hdh-PEP-抑制劑復(fù)合物的水解作用
        2.4.13 Hdh-PEP對膠原小肽的降解
        2.4.14 數(shù)據(jù)分析
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 Hdh-PEP的重組表達(dá)及純化
    3.2 Hdh-PEP多克隆抗體的制備
    3.3 Hdh-PEP在鮑魚各組織中基因水平的表達(dá)差異
    3.4 Hdh-PEP在鮑魚各組織中的酶活性差異
    3.5 Hdh-PEP的二級結(jié)構(gòu)分析
    3.6 pH對 Hdh-PEP表面疏水性的影響
    3.7 溫度對Hdh-PEP表面疏水性的影響
    3.8 Hdh-PEP晶體培養(yǎng)及結(jié)構(gòu)解析
    3.9 不同物種PEP的結(jié)構(gòu)差異分析
    3.10 Hdh-PEP的底物通道分析
    3.11 分子動力學(xué)模擬
    3.12 胰蛋白酶對Hdh-PEP-抑制劑復(fù)合物的水解作用
    3.13 Hdh-PEP對膠原小肽的降解
第4章 討論
    4.1 Hdh-PEP的晶體結(jié)構(gòu)分析
    4.2 Hdh-PEP對膠原蛋白的降解作用
    4.3 Hdh-PEP的分子動態(tài)學(xué)模擬分析
    4.4 Hdh-PEP與抑制劑相互作用機(jī)理
第5章 主要結(jié)論與展望
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間科研成果情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]擬穴青蟹（Scylla paramamosain）肌漿蛋白過敏原的致敏性研究[D]. 楊陽.集美大學(xué) 2018
[2]蛋白質(zhì)與配體相互作用機(jī)理的分子模擬研究[D]. 劉明.北京工業(yè)大學(xué) 2010

碩士論文
[1]鰱魚肌肉脯氨酰內(nèi)肽酶及抑制肽的研究[D]. 謝雪瓊.集美大學(xué) 2019
[2]皺紋盤鮑脯氨酰內(nèi)肽酶的分子克隆、體外表達(dá)及相關(guān)性質(zhì)分析[D]. 李越.集美大學(xué) 2018
[3]羅非魚和鱸魚骨骼肌脯氨酸內(nèi)肽酶的研究[D]. 肖琳琳.集美大學(xué) 2017
[4]蠶蛹蛋白源ACE抑制多肽的結(jié)構(gòu)鑒定及抑制機(jī)理研究[D]. 王朝陽.廣西大學(xué) 2016
[5]皺紋盤鮑肌肉質(zhì)構(gòu)相關(guān)蛋白酶的研究[D]. 游銀川.集美大學(xué) 2016
[6]煙曲霉脯氨酰內(nèi)肽酶的基因克隆、表達(dá)及其性質(zhì)[D]. 李寧環(huán).江南大學(xué) 2013



本文編號：3472262