發(fā)布時(shí)間：2021-10-19 03:05

　　肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）是一種條件性致病菌,容易產(chǎn)生耐藥性,可以引起人和多種動(dòng)物患病,導(dǎo)致腦膜炎、肺炎、泌尿系統(tǒng)發(fā)炎、傷口感染甚至敗血癥等,在養(yǎng)羊業(yè)中一直未被人們所重視,但是隨著近年來養(yǎng)羊業(yè)的快速發(fā)展,各種抗生素的廣泛使用甚至濫用,高密度養(yǎng)殖和快速育肥的飼養(yǎng)模式,使該菌對(duì)養(yǎng)羊業(yè)的危害也越來越大。但關(guān)于羊源肺炎克雷伯氏菌的臨床檢測(cè)方法并沒有深入的研究,因此,建立肺炎克雷伯氏菌的臨床檢測(cè)方法是控制該病的前提條件。本研究從發(fā)病羊肺臟中分離鑒定出肺炎克雷伯氏菌,并建立了間接酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)方法、間接免疫熒光（IFA）檢測(cè)方法,為肺炎克雷伯氏菌快速診斷試劑盒的研制奠定了基礎(chǔ)。本研究從羊肺臟中分離到2株細(xì)菌,分離菌均在LB培養(yǎng)基上形成灰白色、圓形凸起、邊緣整齊、濕潤(rùn)且黏稠的菌落,可以挑起易拉成絲;革蘭氏染色為革蘭氏陰性菌。將兩株分離菌株以2×10⁹ CFU/mL的濃度接種昆明小鼠0.2 mL/只后8 h內(nèi)小鼠均死亡,從死亡小鼠肺臟中又分離到接種菌;生化試驗(yàn)結(jié)果符合肺炎克雷伯氏菌的生化特性,藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)對(duì)頭孢類、氨基糖苷類等... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1分離菌株在三種培養(yǎng)基的生長(zhǎng)狀況

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文173結(jié)果與分析3.1羊源肺炎克雷伯氏菌的分離鑒定結(jié)果3.1.1細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察利用細(xì)菌分離的方法，從被檢的12份羊源病料中分離得到2株疑似菌株KpY1、KpY2。將分離菌KpY1、KpY2分別在LB培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、綿羊血培養(yǎng)基上純培養(yǎng)，兩株菌均在LB培養(yǎng)基上形成灰白色、圓形凸起、邊緣整齊、濕潤(rùn)且黏稠的菌落，可以挑起易拉成絲（圖1-1A、D）。在綿羊血培養(yǎng)基上形成白色黏稠的菌落，不溶血（圖1-1B、E）。在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上形成灰白色、圓形凸起、濕潤(rùn)且黏稠的菌落（圖1-1C、F）。將分離菌進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，由油鏡下觀察到分離菌均為革蘭氏陰性菌、短桿菌（圖1-2）。圖1-1分離菌株在三種培養(yǎng)基的生長(zhǎng)狀況A~C分離菌KpY1在LB培養(yǎng)基、綿羊血培養(yǎng)基和伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基生長(zhǎng)狀況；D~F分離菌KpY2在LB培養(yǎng)基、綿羊血培養(yǎng)基和伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基生長(zhǎng)狀況Figure1-1Growthofisolatedstrainsinthreemedia.A~CGrowthstatusofisolateKpY1inLBmedium,goatbloodmediumandeosinbluemedium;D~FGrowthstatusofisolateKpY2inLBmedium,goatbloodmediumandeosinbluemedium圖1-2分離菌株革蘭氏染色結(jié)果1000×Figure1-2Gramstainingresultsofisolatedstrain1000×

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文21圖2-1分離菌株16srRNA基因片段電泳圖Figure2-1Electrophoresisof16srRNAgenefragmentofisolatedstrain圖2-2分離菌株特異性基因片段電泳圖Figure2-2Electrophoresisdiagramofisolatedstrain-specificgenefragments3.1.6同源性分析將KpY1、KpY2株的16SrRNA基因片段測(cè)序并進(jìn)行同源性分析，結(jié)果表明，兩株分離菌株與GenBank中收錄的肺炎克雷伯氏菌多個(gè)參考菌株核苷酸序列的同源性最高為99.3%和99.5%，結(jié)果表明分離到的兩株菌為肺炎克雷伯氏菌，并將兩株菌命名為KpY1、KpY2。將KpY1、KpY2，同實(shí)驗(yàn)室保存的KpJ1、KpM1、KpM3、KpM4、KpM10以及由NCBI下載的參考菌株5株的16srRNA基因序列運(yùn)用DNAStar軟件進(jìn)行同源性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)分離株KpY1同KpY2之間的同源性為99.3%，與雞源菌株的同源性為97.3%，同毛皮動(dòng)物源菌株的同源性在97.3~99.3%之間，與參考菌株的同源性在均99.3%；而分離株KpY2與雞源菌株的同源性在97.5%，與毛皮動(dòng)物源菌株的同源性在97.5~99.4%之間。與參考菌株的同源性在99.3~99.5%之間。通過以上數(shù)據(jù)我們可以發(fā)現(xiàn)，不同動(dòng)物來源肺炎克雷伯氏菌之間存在一定差異。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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