作為有機(jī)體受到高溫等一些逆境脅迫后大量表達(dá)的熱應(yīng)激蛋白,HSP70（Heat Shock protein 70 KDa）蛋白質(zhì)家族廣泛參與生物體內(nèi)變性蛋白質(zhì)的復(fù)性和降解,以及新生肽的運(yùn)輸、折疊、組裝、定位等多種生理過程。編碼HSP70蛋白家族的基因在藻類中也是普遍存在的,無論是原始的單細(xì)胞藻類還是多細(xì)胞的大型藻類,HSP70基因在藻類適應(yīng)環(huán)境的過程中起了極其重要的作用。但有關(guān)HSP70在海藻抗逆環(huán)境脅迫中的作用一直未得到深入研究。以大型經(jīng)濟(jì)海藻條斑紫菜的絲狀體為實(shí)驗(yàn)材料,克隆得到一條636bp的HSP70基因的EST序列,然后采用3’RACE和5’RACE PCR技術(shù),克隆得到完整的HSP70基因。該基因序列全長為2221bp,預(yù)測的HSP70基因的ORF為1992bp,共編碼663個氨基酸,5′UTR長度為119 bp,3′UTR長度為110bp,命名為PyHSP70。保守結(jié)構(gòu)域分析表明該基因含有ATPase活性的NBD（nucleotide binding domain）保守結(jié)構(gòu)域。理化性質(zhì)預(yù)測發(fā)現(xiàn),蛋白質(zhì)分子量為71.7KDa,等電點(diǎn)為4.93,是穩(wěn)定蛋白質(zhì)。將PyHSP70基因... 

【文章來源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 條斑紫菜的生物學(xué)
        1.1.1 條斑紫菜
        1.1.2 條斑紫菜生活史
        1.1.3 條斑紫菜的價(jià)值
    1.2 HSP的研究進(jìn)展
        1.2.1 HSP的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 HSP的分類和HSP70的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.2.3 HSP70與ATP-ADP轉(zhuǎn)換關(guān)系
    1.3 植物中HSP70
        1.3.1 植物中HSP70的分布及亞細(xì)胞定位
        1.3.2 植物中HSP70基因的克隆
        1.3.3 植物中HSP70基因的表達(dá)
        1.3.4 植物中HSP70的功能
    1.4 本實(shí)驗(yàn)研究目的及意義
2 條斑紫菜HSP70基因的克隆及高溫誘導(dǎo)下實(shí)時定量表達(dá)研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料的采集與處理
    2.2 儀器設(shè)備及藥品
        2.2.1 儀器設(shè)備
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)藥品
    2.3 條斑紫菜HSP70基因的克隆
        2.3.1 條斑紫菜絲狀體HSP70基因的電子克隆
        2.3.2 總RNA提取與純化
        2.3.3 反轉(zhuǎn)錄
        2.3.4 PCR
        2.3.5 3′-Full RACE
        2.3.6 5′-Full RACE
        2.3.7 純化PCR產(chǎn)物
        2.3.8 連接、轉(zhuǎn)化、測序
        2.3.9 序列分析
        2.3.10 結(jié)果與分析
    2.4.實(shí)時熒光定量PCR方法檢測高溫誘導(dǎo)條斑紫菜HSP70基因的表達(dá)情況
        2.4.1 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
3.構(gòu)建重組表達(dá)載體并測定高溫脅迫下轉(zhuǎn)pET28a-HSP70菌株的生長情況
    3.1 構(gòu)建重組表達(dá)載體
        3.1.1 目的基因克隆
        3.1.2 構(gòu)建表達(dá)載體
        3.1.3 檢測重組載體
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖
    3.2 測定高溫脅迫下轉(zhuǎn)pET28a-HSP70菌株的生長情況
        3.2.1 配制試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
4.重組蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)及ATPase活性檢測
    4.1 配制試劑
    4.2 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.2 SDS-PAGE電泳
        4.2.3 重組蛋白質(zhì)的大量誘導(dǎo)和純化
        4.2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    4.3 ATPase活性檢測
        4.3.1 BCA法進(jìn)行蛋白質(zhì)濃度測定
        4.3.2 ATPase活性檢測
        4.3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
5 討論
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝



本文編號：3421297