透明質酸降解菌的篩選及其裂解酶的研究
發(fā)布時間：2021-09-03 05:37
透明質酸是一種存在于生物體內的大分子糖胺聚糖,透明質酸寡糖具有一定的生物免疫活性、良好的抗氧化性,有促進組織血液流動、血管生成和創(chuàng)傷愈合等功能。透明質酸酶是一類糖苷酶,能將透明質酸降解成小分子透明質酸寡糖,是制備透明質酸寡聚糖的有效方法,開發(fā)活性高、性質優(yōu)良的新型透明質酸酶以及獲得具有生物活性的透明質酸寡聚糖具有重要的研究意義。本研究從土壤中篩選出透明質酸高降解活性菌株,獲得透明質酸裂解酶,并將該酶進行異源表達、純化、功能及酶學性質研究,主要研究內容和結果如下:1.透明質酸降解菌的篩選和鑒定通過控制碳源富集、濁度法初篩、比色法復篩,從80份土壤、淤泥樣品中分離出13株具有降解透明質酸的活性細菌,進一步通過在相同發(fā)酵條件下產酶、測定并比較各個菌株酶活,最終挑選出活性最高的菌株BN3-1。對BN3-1進行16S rDNA系統進化樹分析以及細菌生理生化反應實驗,最終確定該菌株為弗氏檸檬酸桿菌,將其命名為YNLX,并保存于云南大學云南省微生物研究所菌種保藏中心,保藏編號為YMF3.01173。2.菌株YNLX透明質酸裂解酶的克隆及異源表達通過對菌株YNLX進行基因組測序分析,發(fā)掘到一個透明質酸...
【文章來源】：云南師范大學云南省
【文章頁數】：115 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
6SrDNA系統進化樹
第3章重組透明質酸裂解酶的異源表達45表3.3YNLX基因組結構預測統計Table3.3ThestatisticsofgenomicstructurepredictionofYNLX類型數目長度(bp)%GenometRNA866,7410.1416SrRNA812,2270.2523SrRNA823,2020.475SrRNA91,0350.02CDS4,6324,420,79488.61CRISPR000GenomicIsland388,1251.773.3.1.2基因組圈將基因組測序深度、GC分布、GC-skew以及基因組結構注釋進行整合，繪制核基因組圈圖如圖3.1。圖3.1YNLX的核基因組圈圖Figure3.1NucleargenomecirclediagramofYNLX注：由外到內依次是，編碼基因(正義鏈)、編碼基因(負義鏈)、tRNA(橙色)和rRNA(紫色)、CRISPR(藍色)和基因島(綠色)、GC比、GC-skew、測序深度Note:Fromtheoutsidetotheinside,itisthecodinggene(sensestrand),codinggene(negativesensestrand),tRNA(orange)andrRNA(purple),CRISPR(blue)andgeneisland(green),GCratio,GC-skew,sequencingdepth
第3章重組透明質酸裂解酶的異源表達47CTD45460.1)活性氨基酸位點分別是467、517和526位；無乳鏈球菌(S.agalactiae)透明質酸裂解酶(GenbankID：SQG26488.1)活性氨基酸位點分別是；523、573和582位；乳房鏈球菌(S.uberis)透明質酸裂解酶(GenbankID：SQG46732.1)活性氨基酸位點分別是553、603和612位；緩慢芽孢桿菌(Bacilluslentus)透明質酸裂解酶(GenbankID：SQI53822.1)活性氨基酸位點分別是468、518和527位。上述酶序列的活性位點氨基酸均是天冬酰胺、組氨酸和酪氨酸。因此推測與目的透明質酸裂解酶序列對應的位點，分別是234位的天冬酰胺、284位的組氨酸和293位的酪氨酸便是該酶的活性氨基酸位點。通過在線對目的透明質酸裂解酶氨基酸序列的信號肽進行預測，分析結果如圖3.3，蛋白序列1~20位氨基酸為該酶的信號肽。圖3.2不同透明質酸裂解酶氨基酸序列比對結果Figure3.2Aminoacidsequencealignmentofhyaluronatelyases
【參考文獻】：
期刊論文
[1]秋葵多糖提取及抗氧化性的研究進展[J]. 張亞楠,董旭然. 現代農村科技. 2019(10)
[2]發(fā)酵透明質酸寡糖獸疫鏈球菌工程菌株的構建[J]. 韋朝寶,堵國成,陳堅,康振. 生物工程學報. 2019(05)
[3]蝦青素抗氧化能力研究進展[J]. 江利華,柳慧芳,郝光飛,劉曉星,王紅霞,徐建中,趙山山. 食品工業(yè)科技. 2019(10)
[4]大菱鲆魚皮透明質酸酶的提取及酶學特性研究[J]. 王鵬,郭麗,甘文山. 食品工業(yè). 2018(12)
[5]透明質酸水凝膠的藥理作用及其臨床應用研究進展[J]. 張,郭玫,王志旺. 甘肅科技. 2018(23)
[6]晉中地區(qū)雞致病性大腸桿菌分離株的鑒定及其16S rDNA序列的同源性分析[J]. 尹姣姣,何敏,翟晶晶,韓麗娟,牛露露,牛宏澤,程倩倩,車雨彤,尹夢穎,張鼎,寧官保,田文霞. 中國獸醫(yī)科學. 2019(03)
[7]硫酸軟骨素二糖對疲勞致小鼠腎臟炎癥的改善作用[J]. 劉芳,曹婉秀,李兆杰,薛長湖,唐慶娟. 食品工業(yè)科技. 2018(18)
[8]透明質酸酶在透明質酸軟組織填充并發(fā)癥治療中的應用[J]. 陳筑昕,蔣承安,劉凱. 組織工程與重建外科雜志. 2017(03)
[9]酶法制備硫酸軟骨素寡糖及其抗氧化活性[J]. 張靜,張京良,朱常亮,姜言暉,沈照鵬,江曉路. 食品工業(yè)科技. 2017(13)
[10]VITEK 2 Compact系統的應用及鑒定結果分析[J]. 楊晶,王偉歡. 中國衛(wèi)生檢驗雜志. 2016(18)
博士論文
[1]一種硫酸軟骨素E降解抗性的糖胺聚糖裂解酶的鑒定與應用[D]. 彭春娥.山東大學 2018
[2]海洋細菌來源的新型糖胺聚糖降解酶的篩選、鑒定與應用[D]. 王文爽.山東大學 2017
[3]芽孢桿菌Bacillus sp.A50透明質酸酶的研究[D]. 郭學平.山東大學 2014
碩士論文
[1]硫酸軟骨素的降解及其產物的抗氧化活性研究[D]. 鄒籽華.西北大學 2019
[2]魚鰾類肝素的提取分離、結構表征及活性評價[D]. 周斯儀.廣東海洋大學 2019
[3]透明質酸寡糖促進糖尿病大鼠傷口愈合的研究[D]. 王一.錦州醫(yī)科大學 2017
[4]透明質酸四糖和六糖的制備及生物活性研究[D]. 呂夢嫻.江南大學 2016
[5]透明質酸酶的表達及酶法制備低聚透明質酸[D]. 張海洋.天津科技大學 2016
[6]22株無乳鏈球菌的鑒定以及溫度對其溶血價和透明質酸酶活性的影響[D]. 蒙愛云.海南大學 2016
[7]重組透明質酸酶的表達、純化及其酶學性質研究[D]. 陳怡斐.上海應用技術學院 2016
[8]產透明質酸酶菌株的篩選及發(fā)酵條件的優(yōu)化[D]. 薛蔚.山東大學 2015
[9]基于分子改造和發(fā)酵優(yōu)化提高透明質酸酶的表達[D]. 張娜.江南大學 2015
[10]噬尼古丁節(jié)桿菌產透明質酸酶條件優(yōu)化及酶學性質研究[D]. 蘇康.山東大學 2014
本文編號：3380515
【文章來源】：云南師范大學云南省
【文章頁數】：115 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
6SrDNA系統進化樹
第3章重組透明質酸裂解酶的異源表達45表3.3YNLX基因組結構預測統計Table3.3ThestatisticsofgenomicstructurepredictionofYNLX類型數目長度(bp)%GenometRNA866,7410.1416SrRNA812,2270.2523SrRNA823,2020.475SrRNA91,0350.02CDS4,6324,420,79488.61CRISPR000GenomicIsland388,1251.773.3.1.2基因組圈將基因組測序深度、GC分布、GC-skew以及基因組結構注釋進行整合，繪制核基因組圈圖如圖3.1。圖3.1YNLX的核基因組圈圖Figure3.1NucleargenomecirclediagramofYNLX注：由外到內依次是，編碼基因(正義鏈)、編碼基因(負義鏈)、tRNA(橙色)和rRNA(紫色)、CRISPR(藍色)和基因島(綠色)、GC比、GC-skew、測序深度Note:Fromtheoutsidetotheinside,itisthecodinggene(sensestrand),codinggene(negativesensestrand),tRNA(orange)andrRNA(purple),CRISPR(blue)andgeneisland(green),GCratio,GC-skew,sequencingdepth
第3章重組透明質酸裂解酶的異源表達47CTD45460.1)活性氨基酸位點分別是467、517和526位；無乳鏈球菌(S.agalactiae)透明質酸裂解酶(GenbankID：SQG26488.1)活性氨基酸位點分別是；523、573和582位；乳房鏈球菌(S.uberis)透明質酸裂解酶(GenbankID：SQG46732.1)活性氨基酸位點分別是553、603和612位；緩慢芽孢桿菌(Bacilluslentus)透明質酸裂解酶(GenbankID：SQI53822.1)活性氨基酸位點分別是468、518和527位。上述酶序列的活性位點氨基酸均是天冬酰胺、組氨酸和酪氨酸。因此推測與目的透明質酸裂解酶序列對應的位點，分別是234位的天冬酰胺、284位的組氨酸和293位的酪氨酸便是該酶的活性氨基酸位點。通過在線對目的透明質酸裂解酶氨基酸序列的信號肽進行預測，分析結果如圖3.3，蛋白序列1~20位氨基酸為該酶的信號肽。圖3.2不同透明質酸裂解酶氨基酸序列比對結果Figure3.2Aminoacidsequencealignmentofhyaluronatelyases
【參考文獻】：
期刊論文
[1]秋葵多糖提取及抗氧化性的研究進展[J]. 張亞楠,董旭然. 現代農村科技. 2019(10)
[2]發(fā)酵透明質酸寡糖獸疫鏈球菌工程菌株的構建[J]. 韋朝寶,堵國成,陳堅,康振. 生物工程學報. 2019(05)
[3]蝦青素抗氧化能力研究進展[J]. 江利華,柳慧芳,郝光飛,劉曉星,王紅霞,徐建中,趙山山. 食品工業(yè)科技. 2019(10)
[4]大菱鲆魚皮透明質酸酶的提取及酶學特性研究[J]. 王鵬,郭麗,甘文山. 食品工業(yè). 2018(12)
[5]透明質酸水凝膠的藥理作用及其臨床應用研究進展[J]. 張,郭玫,王志旺. 甘肅科技. 2018(23)
[6]晉中地區(qū)雞致病性大腸桿菌分離株的鑒定及其16S rDNA序列的同源性分析[J]. 尹姣姣,何敏,翟晶晶,韓麗娟,牛露露,牛宏澤,程倩倩,車雨彤,尹夢穎,張鼎,寧官保,田文霞. 中國獸醫(yī)科學. 2019(03)
[7]硫酸軟骨素二糖對疲勞致小鼠腎臟炎癥的改善作用[J]. 劉芳,曹婉秀,李兆杰,薛長湖,唐慶娟. 食品工業(yè)科技. 2018(18)
[8]透明質酸酶在透明質酸軟組織填充并發(fā)癥治療中的應用[J]. 陳筑昕,蔣承安,劉凱. 組織工程與重建外科雜志. 2017(03)
[9]酶法制備硫酸軟骨素寡糖及其抗氧化活性[J]. 張靜,張京良,朱常亮,姜言暉,沈照鵬,江曉路. 食品工業(yè)科技. 2017(13)
[10]VITEK 2 Compact系統的應用及鑒定結果分析[J]. 楊晶,王偉歡. 中國衛(wèi)生檢驗雜志. 2016(18)
博士論文
[1]一種硫酸軟骨素E降解抗性的糖胺聚糖裂解酶的鑒定與應用[D]. 彭春娥.山東大學 2018
[2]海洋細菌來源的新型糖胺聚糖降解酶的篩選、鑒定與應用[D]. 王文爽.山東大學 2017
[3]芽孢桿菌Bacillus sp.A50透明質酸酶的研究[D]. 郭學平.山東大學 2014
碩士論文
[1]硫酸軟骨素的降解及其產物的抗氧化活性研究[D]. 鄒籽華.西北大學 2019
[2]魚鰾類肝素的提取分離、結構表征及活性評價[D]. 周斯儀.廣東海洋大學 2019
[3]透明質酸寡糖促進糖尿病大鼠傷口愈合的研究[D]. 王一.錦州醫(yī)科大學 2017
[4]透明質酸四糖和六糖的制備及生物活性研究[D]. 呂夢嫻.江南大學 2016
[5]透明質酸酶的表達及酶法制備低聚透明質酸[D]. 張海洋.天津科技大學 2016
[6]22株無乳鏈球菌的鑒定以及溫度對其溶血價和透明質酸酶活性的影響[D]. 蒙愛云.海南大學 2016
[7]重組透明質酸酶的表達、純化及其酶學性質研究[D]. 陳怡斐.上海應用技術學院 2016
[8]產透明質酸酶菌株的篩選及發(fā)酵條件的優(yōu)化[D]. 薛蔚.山東大學 2015
[9]基于分子改造和發(fā)酵優(yōu)化提高透明質酸酶的表達[D]. 張娜.江南大學 2015
[10]噬尼古丁節(jié)桿菌產透明質酸酶條件優(yōu)化及酶學性質研究[D]. 蘇康.山東大學 2014
本文編號：3380515
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