犬細(xì)小病毒病是由犬細(xì)小病毒（Canine parvovirus,CPV）感染引起,嚴(yán)重危害犬類健康的傳染病,具有發(fā)病率高、傳染性強(qiáng)、死亡率高等特點(diǎn)。目前犬細(xì)小病毒病沒有特效藥物,目前采用的單克隆抗體在CPV感染早期有良好的治療效果,但單克隆抗體為鼠源,具有較高的免疫原性,不能連續(xù)注射。本研究通過對(duì)已有單克隆抗體進(jìn)行犬源化改造,制備適合犬用的免疫原性低的抗CPV抗體藥物。首先對(duì)已有抗CPV的雜交瘤細(xì)胞株4H8進(jìn)行鑒定,4H8抗體亞型為IgG_2b,親和力常數(shù)6個(gè)Ka平均值為1.02×10¹11 L/mol,只與CPV VLPs反應(yīng)。經(jīng)RACE-PCR提取4H8抗體可變區(qū)序列,用NCBI IgBLAST分析。將4H8抗體可變區(qū)序列與在ENA網(wǎng)站上查到的鼠源抗體恒定區(qū)序列組裝,分別構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3.1（+）-L和pcDNA3.1（+）-H,共轉(zhuǎn)染HEK-293、HEK-293F細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)。采用間接ELISA檢測(cè)鼠源CPV基因工程抗體（CA）的表達(dá)量,CA在HEK-293F細(xì)胞中的表達(dá)量為5.97 mg/L;血凝抑制、中和試驗(yàn)檢測(cè)其生物活... 

【文章來源】：長春工業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CPV單克隆抗體親和力測(cè)定

第3章結(jié)果21表3-1單克隆抗體特異性測(cè)定項(xiàng)目CPVVLPsCAVCCVCDV4H81.07N/AN/AN/A陽性對(duì)照1.137N/AN/AN/A陰性對(duì)照N/AN/AN/AN/AN/A：不適用，無結(jié)合反應(yīng)。3.2鼠源CPV基因工程抗體的制備3.2.1鼠源CPV基因工程抗體可變區(qū)序列的獲得提取4H8總RNA，反轉(zhuǎn)錄得到cDNA后，經(jīng)RACE-PCR擴(kuò)增獲得抗體重鏈可變區(qū)（VH）和輕鏈可變區(qū)（VL）的DNA片段，結(jié)果見圖3.2。由圖3.2可知，VH產(chǎn)物大小約800bp，VL產(chǎn)物大小約750bp，將兩條特異條帶切膠回收與載體連接送去測(cè)序。M，DL5000DNAmaker；1，VH；2，VL圖3.2抗體可變區(qū)RACE-PCR3.2.2鼠源抗體可變區(qū)序列分區(qū)在NCBI網(wǎng)站上，用IgBLAST分析測(cè)序結(jié)果，與鼠源IgG比對(duì)，結(jié)果如圖3.3所示。提取的兩條序列中均有4個(gè)FR區(qū)和3個(gè)CDR區(qū)，證明成功提取出4H8抗體可變區(qū)序列。

抗體可變區(qū)序列分區(qū)

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3350280