發(fā)布時(shí)間：2021-07-07 15:29

　　EZH2（Enhancer of zeste homolog 2）作為表觀遺傳因子多巰蛋白抑制復(fù)合物（Polycomb Repressive Complex2,PRC2）的催化亞基,催化組蛋白H3的27號(hào)賴氨酸位殘基發(fā)生三甲基化修飾（H3K27me3）,進(jìn)而沉默PRC2靶基因的轉(zhuǎn)錄,在細(xì)胞的增殖分化以及腫瘤發(fā)生中起重要作用。EZH2的21號(hào)絲氨酸（Serine 21,S21）可被蛋白激酶AKT磷酸化,其磷酸化產(chǎn)物p-EZH2 S21降低EZH2與PRC2底物組蛋白H3的結(jié)合,從而減弱其組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶活性,導(dǎo)致PRC2靶基因的轉(zhuǎn)錄去抑制（de-repression）。本研究以晶狀體上皮纖維化疾病中重要過(guò)程上皮細(xì)胞的間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-Mesenchymal transition,EMT）為研究背景,探究EZH2 S21去磷酸化的機(jī)制及在晶狀體上皮細(xì)胞中的基因表達(dá)調(diào)控功能。我們首先建立了TGFβ誘導(dǎo)兔晶狀體上皮細(xì)胞NN1003A發(fā)生EMT的細(xì)胞模型,在此基礎(chǔ)上,我們發(fā)現(xiàn)AKT2的特異性抑制劑能顯著抑制NN1003A細(xì)胞EMT進(jìn)程中p-EZH2 S21磷酸化水平上調(diào),H3K27... 

【文章來(lái)源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

MYPT1的結(jié)構(gòu)示意圖（JustinA.MacDonald.etal.2018）

碩士學(xué)位論文的細(xì)胞骨架中發(fā)現(xiàn)的含角蛋白的中間絲蛋白。EpCAM和CK都是上皮來(lái)源循環(huán)腫瘤細(xì)胞的常用生物標(biāo)志物[59,60]。Vimentin是中間絲家族蛋白的一員，廣泛存在于間質(zhì)細(xì)胞中，在癌細(xì)胞中表達(dá)Vimentin可促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和侵襲性[61]。Vimentin的表達(dá)與N-cadherin的上調(diào)有關(guān)，既往研究表明Vimentin在乳腺癌中的過(guò)表達(dá)與的不良預(yù)后有關(guān)[62]。Twist是一種螺旋-環(huán)-螺旋蛋白，在細(xì)胞分化過(guò)程中具有轉(zhuǎn)錄活性，在前列腺癌、胃癌、乳腺癌等多種腫瘤細(xì)胞中都有Twist表達(dá)的增加[63]。此外，twist可以抑制E-cadherin并上調(diào)N-cadherin，在乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)twist可導(dǎo)致對(duì)紫杉醇的耐藥性[64]。除了上述EMT的生物標(biāo)志物外，越來(lái)越廣泛的生物標(biāo)志物被用來(lái)證明EMT的發(fā)生。主要概括為三個(gè)方面：（1）EMT的細(xì)胞表面標(biāo)志物；（2）EMT的細(xì)胞骨架標(biāo)志物；（3）細(xì)胞外蛋白質(zhì)。下表概括了EMT的生物標(biāo)記物與分類情況：圖1-2EMT的生物標(biāo)記物（MichaelZeisberg.etal.2009）6

蛋白磷酸酶PP1介導(dǎo)的組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶EZH2去磷酸化的機(jī)制和功能探究TGFβ誘導(dǎo)條件下Fibronectin和α-SMA的蛋白質(zhì)水平上調(diào)也受到顯著削弱(圖1-2F,G);細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)則表明α-SMA的免疫熒光信號(hào)則在CCT128930共處理?xiàng)l件也不再增強(qiáng)(圖1-2H)。以上結(jié)果指出，AKT2特異性抑制劑CCT128930能顯著抑制了TGFβ誘導(dǎo)條件下P-EZH2S21位點(diǎn)磷酸化水平的上調(diào)，H3K27me3的下調(diào)以及EMT標(biāo)志基因的激活。這表明AKT-EZH2-H3K27me3信號(hào)途徑控制兔晶狀體上皮細(xì)胞的EMT進(jìn)程。圖1-2CCT128930削弱TGFβ誘導(dǎo)條件下p-EZH2磷酸化水平上調(diào)及EMT標(biāo)志基因的激活A(yù)，蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)CCT128930對(duì)TGFβ誘導(dǎo)條件下p-EZH2S21及H3K27me3的蛋白表達(dá)的影響。B,C，圖A中p-EZH2S21及H3K27me3蛋白質(zhì)水平的定量分析。D，qRT-PCR檢測(cè)CCT128930對(duì)TGFβ誘導(dǎo)條件下EMT標(biāo)志基因FN1與ACTA2的mRNA表達(dá)水平的影響。E，蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)CCT128930對(duì)TGFβ誘導(dǎo)條件下Fibronectin和α-SMA的蛋白表達(dá)水平的影響。F，G,圖E中Fibronectin和α-SMA蛋白質(zhì)水平的定量分析。H，細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CCT128930對(duì)TGFβ誘導(dǎo)條件下α-SMA蛋白表達(dá)水平的影響。23


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