EZH2（Enhancer of zeste homolog 2）作為表觀遺傳因子多巰蛋白抑制復合物（Polycomb Repressive Complex2,PRC2）的催化亞基,催化組蛋白H3的27號賴氨酸位殘基發(fā)生三甲基化修飾（H3K27me3）,進而沉默PRC2靶基因的轉錄,在細胞的增殖分化以及腫瘤發(fā)生中起重要作用。EZH2的21號絲氨酸（Serine 21,S21）可被蛋白激酶AKT磷酸化,其磷酸化產物p-EZH2 S21降低EZH2與PRC2底物組蛋白H3的結合,從而減弱其組蛋白甲基轉移酶活性,導致PRC2靶基因的轉錄去抑制（de-repression）。本研究以晶狀體上皮纖維化疾病中重要過程上皮細胞的間質轉化（Epithelial-Mesenchymal transition,EMT）為研究背景,探究EZH2 S21去磷酸化的機制及在晶狀體上皮細胞中的基因表達調控功能。我們首先建立了TGFβ誘導兔晶狀體上皮細胞NN1003A發(fā)生EMT的細胞模型,在此基礎上,我們發(fā)現AKT2的特異性抑制劑能顯著抑制NN1003A細胞EMT進程中p-EZH2 S21磷酸化水平上調,H3K27... 

【文章來源】：湖南師范大學湖南省 211工程院校

【文章頁數】：50 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

MYPT1的結構示意圖（JustinA.MacDonald.etal.2018）

碩士學位論文的細胞骨架中發(fā)現的含角蛋白的中間絲蛋白。EpCAM和CK都是上皮來源循環(huán)腫瘤細胞的常用生物標志物[59,60]。Vimentin是中間絲家族蛋白的一員，廣泛存在于間質細胞中，在癌細胞中表達Vimentin可促進腫瘤生長和侵襲性[61]。Vimentin的表達與N-cadherin的上調有關，既往研究表明Vimentin在乳腺癌中的過表達與的不良預后有關[62]。Twist是一種螺旋-環(huán)-螺旋蛋白，在細胞分化過程中具有轉錄活性，在前列腺癌、胃癌、乳腺癌等多種腫瘤細胞中都有Twist表達的增加[63]。此外，twist可以抑制E-cadherin并上調N-cadherin，在乳腺癌細胞中表達twist可導致對紫杉醇的耐藥性[64]。除了上述EMT的生物標志物外，越來越廣泛的生物標志物被用來證明EMT的發(fā)生。主要概括為三個方面：（1）EMT的細胞表面標志物；（2）EMT的細胞骨架標志物；（3）細胞外蛋白質。下表概括了EMT的生物標記物與分類情況：圖1-2EMT的生物標記物（MichaelZeisberg.etal.2009）6

蛋白磷酸酶PP1介導的組蛋白甲基轉移酶EZH2去磷酸化的機制和功能探究TGFβ誘導條件下Fibronectin和α-SMA的蛋白質水平上調也受到顯著削弱(圖1-2F,G);細胞免疫熒光實驗則表明α-SMA的免疫熒光信號則在CCT128930共處理條件也不再增強(圖1-2H)。以上結果指出，AKT2特異性抑制劑CCT128930能顯著抑制了TGFβ誘導條件下P-EZH2S21位點磷酸化水平的上調，H3K27me3的下調以及EMT標志基因的激活。這表明AKT-EZH2-H3K27me3信號途徑控制兔晶狀體上皮細胞的EMT進程。圖1-2CCT128930削弱TGFβ誘導條件下p-EZH2磷酸化水平上調及EMT標志基因的激活A，蛋白質免疫印跡檢測CCT128930對TGFβ誘導條件下p-EZH2S21及H3K27me3的蛋白表達的影響。B,C，圖A中p-EZH2S21及H3K27me3蛋白質水平的定量分析。D，qRT-PCR檢測CCT128930對TGFβ誘導條件下EMT標志基因FN1與ACTA2的mRNA表達水平的影響。E，蛋白質免疫印跡檢測CCT128930對TGFβ誘導條件下Fibronectin和α-SMA的蛋白表達水平的影響。F，G,圖E中Fibronectin和α-SMA蛋白質水平的定量分析。H，細胞免疫熒光實驗檢測CCT128930對TGFβ誘導條件下α-SMA蛋白表達水平的影響。23


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