甲螨是一類重要的土壤動(dòng)物,體型微小,一般具有較厚的體壁。本研究分別對(duì)無(wú)損DNA提取技術(shù)以及分子鑒定在甲螨中的應(yīng)用進(jìn)行了探究。在無(wú)損DNA提取部分,本研究針對(duì)甲螨這一特定類群,探討了一種無(wú)形態(tài)特征損傷的DNA提取技術(shù)。通過(guò)結(jié)合試劑盒DNA提取法,并適當(dāng)改進(jìn)實(shí)驗(yàn)條件,設(shè)計(jì)出一套行之有效的DNA提取流程。然后將該方法應(yīng)用于大翼甲螨、角翼甲螨、尖棱甲螨的DNA提取實(shí)驗(yàn)中,PCR擴(kuò)增并測(cè)序之后將所得序列與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行Blast比對(duì)驗(yàn)證了甲螨DNA序列的正確性。隨后對(duì)提取DNA之后的甲螨標(biāo)本進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,發(fā)現(xiàn)其外部形態(tài)結(jié)構(gòu)保存完好,主要的分類學(xué)特征清晰可見(jiàn),此標(biāo)本可以作為憑證標(biāo)本長(zhǎng)期保存。因此本研究提供的DNA提取技術(shù)既可以提取出足夠的DNA又能夠保留憑證標(biāo)本,這將會(huì)有效促進(jìn)甲螨分子分類學(xué)的相關(guān)研究。在分子鑒定技術(shù)在甲螨中的應(yīng)用研究方面,本研究選取了目前常用的28S基因序列和COI基因序列作為分子標(biāo)記。利用28S基因序列分析了大翼甲螨、角翼甲螨、尖棱甲螨、禮服甲螨不同科之間的序列差異情況,以Ischyropsalis strandi（GenBank登錄號(hào)為:KP224374.1）為外... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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提取DNA的甲螨標(biāo)本與未提取DNA的甲螨標(biāo)本的形態(tài)對(duì)比圖

第二章無(wú)損DNA提取技術(shù)在甲螨中的應(yīng)用25圖2-2經(jīng)過(guò)DNA提取之后的甲螨標(biāo)本形態(tài)結(jié)構(gòu)圖Figure2-2:ThephotographsofmorphologicalcharactersafterbeingDNAextractedinoribatidmites注：A：孔區(qū)；B：感器；C：左足Ⅰ。比例尺=50μm。Note:A:Porosearea;B:Bothridialsetae;C:LegⅠ,left.Scalebar=50μm.2.4.3討論與展望經(jīng)過(guò)形態(tài)學(xué)鑒定，A組樣本里的甲螨標(biāo)本是大翼甲螨科的顯大翼甲螨中華亞種Galumnaobviussinensis，這種甲螨的個(gè)體相對(duì)較大（體長(zhǎng)725-775μm，寬525-550μm），使用此無(wú)損DNA提取方法，可以只用一頭標(biāo)本就能提取出足夠的DNA。B組樣本里的甲螨標(biāo)本是角翼甲螨，這種甲螨的個(gè)體相對(duì)較小，使用此無(wú)損DNA提取方法，需要使用兩頭標(biāo)本才能提取出足夠的DNA。C組樣本里的甲螨標(biāo)本是尖棱甲螨，這種甲螨的個(gè)體最小，使用此無(wú)損DNA提取方法，需要使用三頭標(biāo)本才能提取出足夠的DNA。由此可以看出，雖然大翼甲螨可以只用一頭標(biāo)本就能夠提取出可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的足夠的DNA，但是角翼甲螨和尖棱甲螨需要使用兩頭或三頭標(biāo)本。經(jīng)過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，幾丁質(zhì)酶的濃度與水浴消化的時(shí)間，會(huì)對(duì)甲螨的DNA提取效率產(chǎn)生影響，當(dāng)適當(dāng)提高幾丁質(zhì)酶的濃度或延長(zhǎng)甲螨的水浴消化時(shí)間，會(huì)提高甲螨DNA的提取效率。但是，為了在DNA提取之后還能保持甲螨標(biāo)本的完整性，在用幾丁質(zhì)酶進(jìn)行標(biāo)本的初步消化時(shí)，還是應(yīng)當(dāng)控制好幾丁質(zhì)酶的使用濃度與標(biāo)本的水浴消化時(shí)間，如果幾丁質(zhì)酶的濃度


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