植物細(xì)胞具有全能性,在離體培養(yǎng)條件下可通過“脫分化”和“再分化”兩個(gè)過程實(shí)現(xiàn)植株再生。植物細(xì)胞經(jīng)歷“脫分化”后多數(shù)形成愈傷組織,進(jìn)而獲得再生植株的能力,因此愈傷組織形成是植株再生的關(guān)鍵步驟。一些愈傷組織形成調(diào)控因子（如Auxin Response Factor 7（ARF7））得到鑒定。然而,目前愈傷組織形成調(diào)控網(wǎng)絡(luò)還不夠清晰,更多新的調(diào)控因子還有待鑒定。MYB轉(zhuǎn)錄因子作為最大的轉(zhuǎn)錄因子家族之一,廣泛參與植物生長(zhǎng)發(fā)育及逆境脅迫響應(yīng),但是其在愈傷組織形成中的功能卻鮮有報(bào)道。本論文通過對(duì)擬南芥不同階段的離體培養(yǎng)材料表達(dá)譜芯片的分析,篩選得到兩個(gè)特異性在愈傷組織中高表達(dá)的MYB家族轉(zhuǎn)錄因子基因MYB94及其同源基因MYB96,并對(duì)二者在愈傷組織形成中的功能和機(jī)制進(jìn)行了研究。主要研究結(jié)果和結(jié)論如下:1.MYB94和MYB96抑制愈傷組織的起始和發(fā)育愈傷組織的形成包含起始和發(fā)育兩個(gè)步驟,為了探究MYB94與MYB96對(duì)愈傷組織形成不同階段的影響,利用5-Ethyny1-2’-deoxyuridine（EdU）染色觀察、組織透明觀察、基因功能回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)等研究發(fā)現(xiàn),myb94與myb96外植體在CIM... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?ＢＰ和ＬＲ反應(yīng)原理示意圖??Ｆｉｇ．２－１?ＢＰ?ａｎｄ?ＬＲ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??

士學(xué)位論文???Ａ／ｒａＷ與Ｍｙ５９６表達(dá)檢測(cè)。??３．２Ｍｒａ料和ＭＥＢ９６抑制愈傷組織形成且功能冗余??為了探宄和＿９（５在愈傷組織形成過程中的功能，首先分別獲得了??二者的Ｔ－ＤＮＡ插入突變體和并利用植株雜交的方法獲得了雙突??變體?（圖?３－２Ａ）。對(duì)?Ｃｏｌ－Ｏ、—６９（５?及?ｍ＿ｙ￡＞９（５?中?ＭＦ５９４??與Ｍ７Ｓ９６的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，及ｍ＿ｙＺ？９４?中檢測(cè)不到Ｍ７５９４的表??達(dá)，而輝砂（５及卿￡＞９４?ｍ＿ｙ￡＞９（５中檢測(cè)不到ＭＺ８９（５的表達(dá)（圖３－２Ｂ），表明ｍ＿ｙ妙??ｗ＞＾９（５及ｗ＾Ｚ）９４?ｍ＞＞Ｚ）９（５為敲除系突變體。??Ａ?ｒｒｙｂ９４?ｍｙｂ９４?ｒｒｙｂ９６?Ｂ??Ｍ＾＾０ｊ￣２＾３?ＭＣｏ｜｜〇ｉ２？＾??ＭＹＢ９４－ＬＰ＋ＭＹＢ９４－ＲＰ＾？??？?ＭＹＢ９４Ｍ??ＬＢｂ１．３＋ＭＹＢ９４＿ＲＰｐＪ??ｎｙｂ９６?ｒｔｙｂ９４?ｒｒ＼ｂ９６?ｍｖｒｑ／？＾５??，ｗｒＤｙｏＭ??ＭＹＢ９６－ＬＰ＋ＭＹＢ９６－ＲＰ＾Ｊｊ??Ｏ８７６０＋Ｍ?ＹＢ９６－ＲＰ?＾ｌＥＺＺＳ?■??圖３－２?Ｔ－ＤＮＡ插入突變體—６９４、—６９６及—６９６鑒定及其中Ｍ７５９４、Ａ／Ｙ５９６??表達(dá)檢測(cè)??Ｆｉｇ．?３－２?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｔ－ＤＮＡ?ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ?ｍｕｔａｎｔｓ?ｏｆ?ｍｙｂ９４ｓ?ｍｙｂ９６?ａｎｄ?ｍｙｂ９４?ｍｙｂ９６，?ａｎｄ??ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＭＹＢ９４?ＭＹＢ９６?ｉｎ?ｔｈｅｓｅ?ｍｕｔａｎｔｓ??Ａ．未分化與己分化愈傷組織料與＿９（５表達(dá)檢測(cè)；Ｂ．以擬南芥根為外植體的兩步法再生體系中??

?山東大學(xué)碩士學(xué)位論文???圔??圖３－３?Ｃｏｌ－Ｏ、；７＾９４、及７７＾６９６愈傷組織形成能力鑒定??Ｆｉｇ．?３－３?Ｃａｌｌｕｓ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ａｂｉｌｉｔｉｅｓ?ｏｆ?ｍｙｂ９４＞?ｍｙｂ９６?ａｎｄ?ｍｙｂ９４?ｍｙｂ９６??Ａ－Ｄ．?Ｃ〇１－０、／？？少／？９４、ｗ＞＾９６?及?根外杭體愈傷纟］Ｌ織形成能力鑒Ｅ－Ｉ．Ｃ〇１－０、ｗ＃９６??及ｗ；＾９６?Ｋ胚軸外植體愈傷組織形成能力鑒定。??為ｒ進(jìn)一步驗(yàn)證ｗ＿ｙＷ＾、ｍ＾６９（５及ｍ＿ｙ６９６愈傷組織形成能力增強(qiáng)的表??型是由于Ｍｒａ料和Ｍｙ５９６功能缺失導(dǎo)致，利用無縫克隆的方法構(gòu)建了??／ＶｏＭｙ５９ｔ．＿Ｍｒ５Ｗ－ＧｆＰ?載體及載體（圖?３－４），分別轉(zhuǎn)??化雙突變體?ｗ．ｖ砂４?ｗ＿＞＾９６，獲得陽性植株。對(duì)?Ｃｏｌ－０、ｗ＿ｙ／？９４、ｗ＿ｙ６９（５、ｍ＿ｙ６９６、??ＰｒｏＭＹＢ９４：：ＭＹＢ９４－ＧＦＰ?ｉｎ?ｍｙｂ９４?ｍｙｂ９６，?ＰｒｏＭＹＢ９６：：ＭＹＢ９６－ＧＦＰ?ｉｎ?ｍｙｈ９４??的根外植體愈傷組織形成能力進(jìn)行鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)／ｎ＞９６愈傷組??織形成能力較Ｃｏｌ－０增強(qiáng)（圖３－５Ａ－Ｃ?），而／ＶｏＭｙ５９４．ｖＭｙ５９？ＦＰ及??／ＶｏＡ／ｒａ９６．＿．?Ａ／ｙ５９６－ＧＦＰ轉(zhuǎn)基因?qū)ⅲ鳎撸叮梗迹涤鷤M織形成能力的表型恢復(fù)到??單突變體的狀態(tài)（圖３－５Ｅ－Ｆ）。以上結(jié)果表明，／？外料、ｗ＿ｙＷ＞６及叫ＷＷ?ｗ＿ｙ矽＜５??愈傷組織形成能力增強(qiáng)的表型是由于Ｍ７５抑或功能缺失導(dǎo)致。??Ａ?ＰｒｏＭＹＢ９４?ＰｒｏＭＹＢ９６?Ｂ?ＭＹＢ９４－ＣＤＳ?ＭＹＢ９６－ＣＤＳ??Ｍｂ?１?＞＜ｂ??ｃ?Ｓｓｆ?ＸＩ??

【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]擬南芥器官發(fā)生及體細(xì)胞胚發(fā)生相關(guān)基因的表達(dá)模式分析[D]. 辛偉.山東大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3253199