長葉紅砂對不同非生物脅迫的生理響應(yīng)及RtF3’H1基因的克隆與功能分析
發(fā)布時(shí)間：2021-06-21 18:31
長葉紅砂（Reaumuria trigyna）隸屬于檉柳科（Tamaricaceae）琵琶柴屬（Reaumuria Linn）,強(qiáng)旱生泌鹽鹽生植物,分布于亞洲中部亞區(qū)的東阿拉善-西鄂爾多斯地區(qū),是荒漠地區(qū)重要的建群植物。在長期進(jìn)化過程中,該植物對鹽堿和干旱環(huán)境形成了極強(qiáng)的適應(yīng)性,探索長葉紅砂對環(huán)境脅迫的響應(yīng)機(jī)制具有十分重要的意義。本論文以長葉紅砂為研究對象,從生理和分子兩個(gè)層面展開研究。采用中性鹽NaCl、（NaCl:Na2SO4=9:1）、堿性鹽（NaHCO3:Na2CO3=9:1）、10%PEG和UV-B等非生物脅迫處理長葉紅砂幼苗,檢測其生理生化指標(biāo)變化情況,探討長葉紅砂對不同非生物脅迫的生理響應(yīng)機(jī)制;基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)從長葉紅砂中克隆了一個(gè)黃酮類化合物合成途徑中的關(guān)鍵酶基因類黃酮3’-羥化酶RtF3’H1,分析該基因的基因表達(dá)特性和亞細(xì)胞定位,構(gòu)建真核表達(dá)載體并在擬南芥中超表達(dá),驗(yàn)證RtF3’H1基因在非生物脅迫下的功能,探討黃酮類化合物在植物抵抗非生物脅迫中的作用。研究結(jié)...
【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校
【文章頁數(shù)】：93 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
黃酮類化合物的基本結(jié)構(gòu)[61]
內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文第一章5發(fā)[61]。同時(shí)也保護(hù)植物免受不同生物脅迫和非生物脅迫如保護(hù)植物免受紫外線灼傷，防止被動(dòng)物啃食，抵抗微生物病原體并在植物應(yīng)對干旱、冷熱脅迫發(fā)揮作用[61,62]。黃酮類化合物也具有藥理作用：如抗炎鎮(zhèn)痛，預(yù)防和治療癌癥，降血糖，和防止心腦血管疾病和神經(jīng)退行性疾病[63]。1.2.1黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和種類黃酮類化合物具有共同的三環(huán)化學(xué)結(jié)構(gòu)（C6-C3-C6），其基本骨架是兩個(gè)苯環(huán)(A環(huán)與B環(huán))通過中央三碳(C3)相互連接而成，芳香環(huán)稱為A環(huán)，苯環(huán)稱為B環(huán)，苯并吡喃環(huán)稱為C環(huán)。根據(jù)C環(huán)上的氧化程度、取代基的數(shù)量和類型，黃酮類化合物被細(xì)分為八個(gè)不同種類：黃酮、黃烷酮、黃酮醇、黃烷酮衍生物、黃酮-3-醇（兒茶素）、黃酮-3,4-二醇、異黃酮、花青素[64]。在大多數(shù)情況下，黃酮類化合物在花、葉、莖或根的液泡中以游離形式、糖苷以及甲基化衍生物的形式存在[65,66]，幾乎所有天然黃酮類化合物都以其O-糖苷或C-糖苷形式存在[67]。1.2.2植物中黃酮類化合物的生物合成途徑黃酮類化合物的合成已經(jīng)被廣泛研究，尤其是在擬南芥和玉米中。所有黃酮類化合物的圖1.1黃酮類化合物的基本結(jié)構(gòu)[61]Figure1.1Basicstructureofflavonoids圖1.2黃酮類化合物的種類[64]Figure1.2Typesofflavonoids
內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文第二章182.2.3.16長葉紅砂總黃酮含量測定(1)總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作稱取10mg蘆丁，于容量瓶中加入100ml的60%乙醇充分溶解，濃度為0.1mg/ml，然后進(jìn)行梯度稀釋，分別吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，加入不同體積的60%乙醇溶液定容至2ml，加入0.5mlNaNO2（5%），混勻后室溫靜置6min，再加入0.5mlAl(NO3)3·9H2O（10%），混勻后室溫靜置6min，最后加入3ml的60%乙醇溶液和4mlNaOH（4%），使總體積達(dá)到10ml，混勻后室溫靜置15min，取200μl于96孔板中，酶標(biāo)儀測定510nm處吸光值A(chǔ)510，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：(2)總黃酮含量測定稱取不同脅迫處理的長葉紅砂葉片0.05g，液氮速凍研磨成粉末，加入1ml的60%乙醇溶液，常溫超聲30min，1000rpm離心10min，取上清到15ml離心管中，加60%乙醇定容至2ml，加入0.5mlNaNO2（5%），混勻后室溫靜置6min，再加入0.5mlAl(NO3)3·9H2O（10%），混勻后室溫靜置6min，最后加入3ml的60%乙醇溶液和4mlNaOH（4%），使總體積達(dá)到10ml，混勻后室溫靜置15min，取200μl于96孔板中，酶標(biāo)儀測定510nm處吸光值A(chǔ)510。2.2.3.17長葉紅砂花青素含量測定(1)花青素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作稱取10mg矢車菊素-3-O-葡萄糖苷，于容量瓶中加入100ml的1%鹽酸甲醇充分溶解，濃度為0.1mg/ml，然后進(jìn)行梯度稀釋，分別吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml加入不同體積的1%鹽酸甲醇定容至10ml，混勻后取200μl于96孔板中，酶標(biāo)儀測定530nm處吸光值A(chǔ)530，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：圖2.1總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure2.1ThestandardcurvelineofTotalconcentration
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CiF3H基因克隆及功能分析[J]. 楊飛蕓,白潔,楊天瑞,王瑞剛. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(11)
[2]中國植物應(yīng)答環(huán)境變化研究的過去與未來[J]. 楊淑華,鞏志忠,郭巖,龔繼明,鄭紹建,林榮呈,楊洪全,毛龍,秦峰,羅利軍,張?zhí)煺?儲(chǔ)成才,賴錦盛,晁代印,關(guān)雪瑩,彭佳師,黃朝峰,蔣才富,王瑜,楊永青,施怡婷,丁楊林,馬亮,種康. 中國科學(xué):生命科學(xué). 2019(11)
[3]土壤鹽堿化的危害及改良方法[J]. 張蓉蓉. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2019(21)
[4]新中國成立70年來植物激素研究進(jìn)展[J]. 黎家,李傳友. 中國科學(xué):生命科學(xué). 2019(10)
[5]煙草NtNHX1-3基因的克隆及表達(dá)特性[J]. 高玉龍,宋中邦,李梅云,李文正,王丙武,李永平. 西北植物學(xué)報(bào). 2018(12)
[6]植物對非生物脅迫的響應(yīng)機(jī)制研究[J]. 劉燕敏,周海燕,王康,閆洪朗,徐建平,吳俊平,魏小云,何林池. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(16)
[7]脫落酸在植物逆境脅迫中的研究進(jìn)展[J]. 葉月. 民營科技. 2018(03)
[8]轉(zhuǎn)CiCHS基因擬南芥的黃酮代謝及抗氧化能力分析[J]. 楊飛蕓,劉坤,崔爽,王瑞剛,李國婧. 西北植物學(xué)報(bào). 2018(03)
[9]高光、水分和鹽脅迫下小麥光合特性和抗氧化酶系統(tǒng)的比較[J]. 董杰,陳新新,楊倩,張懷渝,陳洋爾. 麥類作物學(xué)報(bào). 2018(03)
[10]甜菜堿提高植物抗逆性及促進(jìn)生長發(fā)育研究進(jìn)展[J]. 張?zhí)禊i,楊興洪. 植物生理學(xué)報(bào). 2017(11)
博士論文
[1]甜菜適應(yīng)堿性鹽脅迫的生理機(jī)制及其轉(zhuǎn)錄組分析[D]. 鄒春雷.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]Na+提高泌鹽型旱生植物紅砂干旱、高溫及風(fēng)沙流耐性的生理作用研究[D]. 何芳蘭.蘭州大學(xué) 2019
[3]珍稀泌鹽植物長葉紅砂2個(gè)WRKY轉(zhuǎn)錄因子在植物鹽脅迫響應(yīng)和生殖發(fā)育中的分子調(diào)控機(jī)理研究[D]. 杜超.內(nèi)蒙古大學(xué) 2018
[4]珍稀泌鹽植物長葉紅砂離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相關(guān)基因的功能研究[D]. 李寧寧.內(nèi)蒙古大學(xué) 2018
[5]長葉紅砂黃酮類化合物合成相關(guān)基因功能分析及其對逆境脅迫的響應(yīng)[D]. 張慧榮.內(nèi)蒙古大學(xué) 2016
[6]阿拉善荒漠區(qū)珍稀泌鹽植物長葉紅砂響應(yīng)鹽脅迫的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D]. 黨振華.內(nèi)蒙古大學(xué) 2013
[7]阿拉善特有植物長葉紅砂耐鹽機(jī)理的研究[D]. 薛焱.內(nèi)蒙古大學(xué) 2008
碩士論文
[1]珍稀泌鹽植物長葉紅砂RtGRX與RtSOD基因的克隆及功能分析[D]. 索雅飛.內(nèi)蒙古大學(xué) 2017
[2]長葉紅砂RtHKT1與RtKCO1鉀離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的克隆及功能分析[D]. 董祿祿.內(nèi)蒙古大學(xué) 2016
[3]長葉紅砂抗壞血酸過氧化物酶基因的表達(dá)特性及功能分析[D]. 姚靖波.內(nèi)蒙古大學(xué) 2015
[4]三種楊樹NHX1和SOS1基因及其啟動(dòng)子功能研究[D]. 原改換.西南科技大學(xué) 2015
[5]長葉紅砂RtF3H1和RtF3H2基因的克隆及原核表達(dá)分析[D]. 張慧榮.內(nèi)蒙古大學(xué) 2013
本文編號(hào)：3241184
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【部分圖文】：
黃酮類化合物的基本結(jié)構(gòu)[61]
內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文第一章5發(fā)[61]。同時(shí)也保護(hù)植物免受不同生物脅迫和非生物脅迫如保護(hù)植物免受紫外線灼傷，防止被動(dòng)物啃食，抵抗微生物病原體并在植物應(yīng)對干旱、冷熱脅迫發(fā)揮作用[61,62]。黃酮類化合物也具有藥理作用：如抗炎鎮(zhèn)痛，預(yù)防和治療癌癥，降血糖，和防止心腦血管疾病和神經(jīng)退行性疾病[63]。1.2.1黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和種類黃酮類化合物具有共同的三環(huán)化學(xué)結(jié)構(gòu)（C6-C3-C6），其基本骨架是兩個(gè)苯環(huán)(A環(huán)與B環(huán))通過中央三碳(C3)相互連接而成，芳香環(huán)稱為A環(huán)，苯環(huán)稱為B環(huán)，苯并吡喃環(huán)稱為C環(huán)。根據(jù)C環(huán)上的氧化程度、取代基的數(shù)量和類型，黃酮類化合物被細(xì)分為八個(gè)不同種類：黃酮、黃烷酮、黃酮醇、黃烷酮衍生物、黃酮-3-醇（兒茶素）、黃酮-3,4-二醇、異黃酮、花青素[64]。在大多數(shù)情況下，黃酮類化合物在花、葉、莖或根的液泡中以游離形式、糖苷以及甲基化衍生物的形式存在[65,66]，幾乎所有天然黃酮類化合物都以其O-糖苷或C-糖苷形式存在[67]。1.2.2植物中黃酮類化合物的生物合成途徑黃酮類化合物的合成已經(jīng)被廣泛研究，尤其是在擬南芥和玉米中。所有黃酮類化合物的圖1.1黃酮類化合物的基本結(jié)構(gòu)[61]Figure1.1Basicstructureofflavonoids圖1.2黃酮類化合物的種類[64]Figure1.2Typesofflavonoids
內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文第二章182.2.3.16長葉紅砂總黃酮含量測定(1)總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作稱取10mg蘆丁，于容量瓶中加入100ml的60%乙醇充分溶解，濃度為0.1mg/ml，然后進(jìn)行梯度稀釋，分別吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，加入不同體積的60%乙醇溶液定容至2ml，加入0.5mlNaNO2（5%），混勻后室溫靜置6min，再加入0.5mlAl(NO3)3·9H2O（10%），混勻后室溫靜置6min，最后加入3ml的60%乙醇溶液和4mlNaOH（4%），使總體積達(dá)到10ml，混勻后室溫靜置15min，取200μl于96孔板中，酶標(biāo)儀測定510nm處吸光值A(chǔ)510，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：(2)總黃酮含量測定稱取不同脅迫處理的長葉紅砂葉片0.05g，液氮速凍研磨成粉末，加入1ml的60%乙醇溶液，常溫超聲30min，1000rpm離心10min，取上清到15ml離心管中，加60%乙醇定容至2ml，加入0.5mlNaNO2（5%），混勻后室溫靜置6min，再加入0.5mlAl(NO3)3·9H2O（10%），混勻后室溫靜置6min，最后加入3ml的60%乙醇溶液和4mlNaOH（4%），使總體積達(dá)到10ml，混勻后室溫靜置15min，取200μl于96孔板中，酶標(biāo)儀測定510nm處吸光值A(chǔ)510。2.2.3.17長葉紅砂花青素含量測定(1)花青素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作稱取10mg矢車菊素-3-O-葡萄糖苷，于容量瓶中加入100ml的1%鹽酸甲醇充分溶解，濃度為0.1mg/ml，然后進(jìn)行梯度稀釋，分別吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml加入不同體積的1%鹽酸甲醇定容至10ml，混勻后取200μl于96孔板中，酶標(biāo)儀測定530nm處吸光值A(chǔ)530，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：圖2.1總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure2.1ThestandardcurvelineofTotalconcentration
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CiF3H基因克隆及功能分析[J]. 楊飛蕓,白潔,楊天瑞,王瑞剛. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(11)
[2]中國植物應(yīng)答環(huán)境變化研究的過去與未來[J]. 楊淑華,鞏志忠,郭巖,龔繼明,鄭紹建,林榮呈,楊洪全,毛龍,秦峰,羅利軍,張?zhí)煺?儲(chǔ)成才,賴錦盛,晁代印,關(guān)雪瑩,彭佳師,黃朝峰,蔣才富,王瑜,楊永青,施怡婷,丁楊林,馬亮,種康. 中國科學(xué):生命科學(xué). 2019(11)
[3]土壤鹽堿化的危害及改良方法[J]. 張蓉蓉. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2019(21)
[4]新中國成立70年來植物激素研究進(jìn)展[J]. 黎家,李傳友. 中國科學(xué):生命科學(xué). 2019(10)
[5]煙草NtNHX1-3基因的克隆及表達(dá)特性[J]. 高玉龍,宋中邦,李梅云,李文正,王丙武,李永平. 西北植物學(xué)報(bào). 2018(12)
[6]植物對非生物脅迫的響應(yīng)機(jī)制研究[J]. 劉燕敏,周海燕,王康,閆洪朗,徐建平,吳俊平,魏小云,何林池. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(16)
[7]脫落酸在植物逆境脅迫中的研究進(jìn)展[J]. 葉月. 民營科技. 2018(03)
[8]轉(zhuǎn)CiCHS基因擬南芥的黃酮代謝及抗氧化能力分析[J]. 楊飛蕓,劉坤,崔爽,王瑞剛,李國婧. 西北植物學(xué)報(bào). 2018(03)
[9]高光、水分和鹽脅迫下小麥光合特性和抗氧化酶系統(tǒng)的比較[J]. 董杰,陳新新,楊倩,張懷渝,陳洋爾. 麥類作物學(xué)報(bào). 2018(03)
[10]甜菜堿提高植物抗逆性及促進(jìn)生長發(fā)育研究進(jìn)展[J]. 張?zhí)禊i,楊興洪. 植物生理學(xué)報(bào). 2017(11)
博士論文
[1]甜菜適應(yīng)堿性鹽脅迫的生理機(jī)制及其轉(zhuǎn)錄組分析[D]. 鄒春雷.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]Na+提高泌鹽型旱生植物紅砂干旱、高溫及風(fēng)沙流耐性的生理作用研究[D]. 何芳蘭.蘭州大學(xué) 2019
[3]珍稀泌鹽植物長葉紅砂2個(gè)WRKY轉(zhuǎn)錄因子在植物鹽脅迫響應(yīng)和生殖發(fā)育中的分子調(diào)控機(jī)理研究[D]. 杜超.內(nèi)蒙古大學(xué) 2018
[4]珍稀泌鹽植物長葉紅砂離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相關(guān)基因的功能研究[D]. 李寧寧.內(nèi)蒙古大學(xué) 2018
[5]長葉紅砂黃酮類化合物合成相關(guān)基因功能分析及其對逆境脅迫的響應(yīng)[D]. 張慧榮.內(nèi)蒙古大學(xué) 2016
[6]阿拉善荒漠區(qū)珍稀泌鹽植物長葉紅砂響應(yīng)鹽脅迫的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D]. 黨振華.內(nèi)蒙古大學(xué) 2013
[7]阿拉善特有植物長葉紅砂耐鹽機(jī)理的研究[D]. 薛焱.內(nèi)蒙古大學(xué) 2008
碩士論文
[1]珍稀泌鹽植物長葉紅砂RtGRX與RtSOD基因的克隆及功能分析[D]. 索雅飛.內(nèi)蒙古大學(xué) 2017
[2]長葉紅砂RtHKT1與RtKCO1鉀離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的克隆及功能分析[D]. 董祿祿.內(nèi)蒙古大學(xué) 2016
[3]長葉紅砂抗壞血酸過氧化物酶基因的表達(dá)特性及功能分析[D]. 姚靖波.內(nèi)蒙古大學(xué) 2015
[4]三種楊樹NHX1和SOS1基因及其啟動(dòng)子功能研究[D]. 原改換.西南科技大學(xué) 2015
[5]長葉紅砂RtF3H1和RtF3H2基因的克隆及原核表達(dá)分析[D]. 張慧榮.內(nèi)蒙古大學(xué) 2013
本文編號(hào)：3241184
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