重金屬作為生產(chǎn)生活中的重要原材料,來源廣泛、難以降解,可以隨著食物鏈、食物網(wǎng)累積,對(duì)生命體具有重要毒害作用。其中,銅是一種常見的重金屬元素,痕量Cu2+可以促進(jìn)生物體的生長(zhǎng)發(fā)育,但是重金屬Cu2+在體內(nèi)的濃度超過一定的限度就會(huì)威脅生物體正常的生命活動(dòng)。草履蟲在水體環(huán)境中十分常見,具有成型的細(xì)胞核、細(xì)胞比表面積大、世代時(shí)間短、細(xì)胞器結(jié)構(gòu)較為完整,常被作為模式生物研究細(xì)胞對(duì)環(huán)境脅迫物質(zhì)的響應(yīng),在生態(tài)毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)中有著重要作用。研究重金屬脅迫下草履蟲相關(guān)差異基因,可以為揭示重金屬銅的體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)、吸附和代謝通路奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),為進(jìn)一步深入研究原生動(dòng)物對(duì)重金屬離子的耐受和抗逆機(jī)制提供數(shù)據(jù)支持。本研究以一種草履蟲作為受試生物,研究了在不同作用時(shí)間（24 h、96 h）,不同作用濃度（0.01 mg/L、0.02 mg/L）下重金屬Cu2+脅迫對(duì)其轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響,通過對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、功能注釋、差異基因分析和蛋白質(zhì)互作分析等,對(duì)重金屬Cu2+脅迫下草履蟲的毒性效應(yīng)和分子機(jī)制做了初步分析和探討。主要結(jié)論如下:（1）在0.01 mg/L的Cu2+處理24 h下,草履蟲轉(zhuǎn)錄組中約有283個(gè)基因上調(diào)... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)手段??８??

?山東大學(xué)碩士學(xué)位論文???第二章材料與方法??２．１實(shí)驗(yàn)動(dòng)物??本實(shí)驗(yàn)用草履蟲（Ｐａｒａｗｅｃ／ｗｗｓｐ．）由山東大學(xué)（威海）海洋學(xué)院６１３實(shí)驗(yàn)??室保種，經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)獲得，如圖２－１。??￡??Ｉ?ｍ??圖２－１草履蟲活體照片??２．１．１萆屜蟲的采集與分離??纖毛蟲的適應(yīng)能力強(qiáng)，在水體環(huán)境中十分常見，幾乎遍布所有水域。但是，??具體到某一種纖毛蟲的生活環(huán)境因其生活習(xí)性差異略有不同，草履蟲為異養(yǎng)浮游??生物，喜歡有機(jī)質(zhì)多的水體環(huán)境，可在有機(jī)質(zhì)豐富的水塘、湖泊等地進(jìn)行直接采??集，本實(shí)驗(yàn)室保種的草履蟲取自威海市污水處理廠。??草履蟲的分離：取少量采集到的淡水水樣倒于培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿置于體視??鏡下觀察，用微吸管吸取草履蟲蟲體，微吸管口徑不宜過大，以略大于草履蟲蟲??９??

?山東大學(xué)碩士學(xué)位論文???體為宜。將吸取的草履蟲放置于另一千凈培養(yǎng)皿中，觀察。若吸取的水樣中含有??其他物種，則需要重新吸取，直至吸取的水樣中不含其他雜質(zhì)生物［５６］。??２．１．２萆履蟲的擴(kuò)大培養(yǎng)??將分離出的草履蟲加入到干凈的培養(yǎng)皿中，并將草履蟲大米培養(yǎng)液加入到培??養(yǎng)皿，擴(kuò)大培養(yǎng)。當(dāng)草履蟲種群達(dá)到一定數(shù)量后，過濾米粒，以滅活后的大腸桿??菌為食物，繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)草履蟲。??２．２培養(yǎng)液的制備??２．２．１大米培養(yǎng)液的制備??草履蟲一般培養(yǎng)液的制備：將自來水煮沸后靜置２４小時(shí)備用，將煮沸后的??自然水加入米粒（５粒／１００ｍｌ）滋養(yǎng)細(xì)菌供草履蟲食用。??２．２．２大腸桿菌培養(yǎng)液的制備??培養(yǎng)基的制備：每１Ｌ純水中添加蛋白胨１０ｇ、氯化鈉（ＮａＣｌ）?１０ｇ、酵母??粉５?ｇ，固體培養(yǎng)基中還需添加瓊脂，瓊脂的添加量為每升１８?ｇ，調(diào)ｐＨ至７．２。??本實(shí)驗(yàn)所用大腸桿菌為保種于微生物實(shí)驗(yàn)室。液體培養(yǎng)基配置好后放于高壓??蒸汽滅菌鍋內(nèi)滅菌后接種，將接種后的菌液置于恒溫３７?°Ｃ條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)??２４？４８?ｈ后于超凈工作臺(tái)下取菌，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，計(jì)算大腸桿菌的濃度［５＇??［［Ｉｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｉｌｌ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ??！?ＩＩ＂???ｎｉｆｌ?＿?ＸＢ－－Ｋ－２５Ｊ?－?■??１１?！?ｌａ??觀響兩；?ｉ?｜?－?［?Ｉ?１??圖２－２血球計(jì)數(shù)板及計(jì)數(shù)室式樣??１０??

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