目的:研究大氣細(xì)顆粒物PM2.5對人支氣管上皮細(xì)胞（HBE）癌基因表達(dá)水平的影響,探討大氣細(xì)顆粒物PM2.5通過MAPK/PKC信號(hào)通路對HBE細(xì)胞癌基因表達(dá)的影響,探討PM2.5染毒HBE細(xì)胞后蛋白質(zhì)表達(dá)變化及其作用機(jī)制。方法:用10μg/mL、50μg/mL的PM2.5處理HBE細(xì)胞,設(shè)立對照組,用10μM/L Cr⁶⁺作為陽性對照,染毒HBE細(xì)胞24 h,應(yīng)用熒光定量PCR和蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測癌基因（c-myc、c-fos、k-ras和p53）的基因和蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化;MAPK/PKC信號(hào)通路實(shí)驗(yàn)設(shè)立空白對照組、PM2.5實(shí)驗(yàn)組、抑制劑組（p38MAPK抑制劑、ERK1/2、PKCα抑制劑）、PM2.5+抑制劑組,用抑制劑預(yù)先處理HBE細(xì)胞30min,接著用無血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24h作為抑制劑實(shí)驗(yàn)組,用PM2.5染毒24h作為PM2.5實(shí)驗(yàn)組;用抑制劑預(yù)先處理HBE細(xì)胞30min,然后用50μg/mL的PM2.5染毒24h作為PM2.5+抑制劑實(shí)驗(yàn)組,應(yīng)用熒光定量PCR和western blot檢測p38MAPK、ERK1... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第1章 PM2.5對HBE細(xì)胞癌基因的影響
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 細(xì)胞
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
        1.1.4 主要試劑及配制
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與PM2.5處理
        1.2.2 PM2.5處理HBE細(xì)胞后目的基因表達(dá)水平的檢測
        1.2.3 PM2.5處理HBE細(xì)胞后目的蛋白表達(dá)水平的檢測
        1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 Q-PCR條件探索及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        1.3.2 PM2.5對目的基因表達(dá)水平的影響
        1.3.3 PM2.5對目的蛋白表達(dá)水平的影響
    1.4 討論
第2章 信號(hào)通路對HBE細(xì)胞癌基因表達(dá)的影響
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 只要試劑及配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與處理
        2.2.2 引物的合成
        2.2.3 引物擴(kuò)增效率及特異性的驗(yàn)證
        2.2.4 Q-PCR檢測信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)水平
        2.2.5 Western blot檢測信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 Q-PCR條件探索及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        2.3.2 PM2.5對細(xì)胞信號(hào)通路基因表達(dá)的影響
        2.3.3 PM2.5對細(xì)胞信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響
        2.3.4 p38MAPK抑制劑對目的基因表達(dá)水平的改變
        2.3.5 ERK1/2抑制劑對目的基因表達(dá)水平的改變
        2.3.6 PKCα抑制劑對目的基因表達(dá)水平的改變
    2.4 討論
第3章 PM2.5對HBE細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)譜研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 主要試劑及配置
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與處理
        3.2.2 樣品預(yù)處理
        3.2.3 酶切
        3.2.4 TMT標(biāo)記和分組
        3.2.5 分組分
        3.2.6 樣品上機(jī)檢測
        3.2.7 差異蛋白的KEGG和 GO分析
        3.2.8 生物信息學(xué)軟件分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 差異表達(dá)蛋白的篩選
        3.3.2 KEGG分析差異蛋白
        3.3.3 GO富集分析差異蛋白
        3.3.4 差異蛋白的venny圖分析
        3.3.5 WGCNA分析
    3.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述 PM2.5 暴露致肺癌的相關(guān)基因和蛋白質(zhì)改變及其分子機(jī)制
    參考文獻(xiàn)
主要英文縮略語索引
作者攻讀學(xué)位期間的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蛋白質(zhì)組學(xué)及其在法醫(yī)病理學(xué)中的應(yīng)用[J]. 韓劉君,徐紅梅,陳龍.  法醫(yī)學(xué)雜志. 2019(01)
[2]虎杖苷通過p38 MAPK/Nrf2/HO-1通路減輕小鼠哮喘模型氣道炎癥[J]. 趙雨喆,姜京植,葉晶,李燕,李俊峰,延光海,李良昌,樸紅梅.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2018(06)
[3]基于數(shù)據(jù)挖掘分析PTGER3在腸型胃癌中的表達(dá)及臨床意義[J]. 張昱,陳穎,徐紅.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2018(11)
[4]2009～2013年江蘇省淮安市肺癌發(fā)病和死亡分析[J]. 孫中明,張芹,潘恩春,繆丹丹,何源.  中國腫瘤. 2018(01)
[5]氧化應(yīng)激在PM2.5誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞增殖中的作用[J]. 凌敏,梁婕,石根勇,俞萍,陸羅定,趙榮,卞倩.  江蘇預(yù)防醫(yī)學(xué). 2017(06)
[6]2010-2014年江西省腫瘤登記地區(qū)肺癌發(fā)病率及時(shí)間趨勢分析[J]. 熊小玲,劉杰,朱麗萍,徐艷,顏瑋,陳軼英,魏清風(fēng).  中華疾病控制雜志. 2017(10)
[7]PM2.5對人肺癌細(xì)胞A549遷移、侵襲能力的增強(qiáng)作用[J]. 楊丹,周偉強(qiáng),楊彪,肖純凌.  生態(tài)毒理學(xué)報(bào). 2017(05)
[8]PM2.5暴露對肺癌細(xì)胞A549自噬和凋亡的影響[J]. 任妮娜,林宜光,林子英,劉剛.  實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2017(16)
[9]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子PERK和ATF6在結(jié)腸癌中的表達(dá)及意義[J]. 高磊,馮丹丹,戴發(fā)亮,董仕楨,吳玉丹,軒青霞,陳攀,金建軍,高強(qiáng).  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(09)
[10]PM2.5引起炎性反應(yīng)與氧化應(yīng)激的研究現(xiàn)狀[J]. 曹璇,陳靜瑤,陳宇,王珍霞.  吉林醫(yī)學(xué). 2016(12)

博士論文
[1]ATF6在小鼠胚胎植入期子宮和卵巢顆粒細(xì)胞凋亡過程中的作用研究[D]. 熊永潔.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[2]OLC1基因在吸煙致癌過程中相關(guān)作用機(jī)制的研究[D]. 陳文挺.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2016
[3]肺瘤平膏調(diào)控NF-κB相關(guān)炎性信號(hào)通路防止肺癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究[D]. 陳賜慧.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3165525