目的:研究大氣細(xì)顆粒物PM2.5對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞（HBE）癌基因表達(dá)水平的影響,探討大氣細(xì)顆粒物PM2.5通過(guò)MAPK/PKC信號(hào)通路對(duì)HBE細(xì)胞癌基因表達(dá)的影響,探討PM2.5染毒HBE細(xì)胞后蛋白質(zhì)表達(dá)變化及其作用機(jī)制。方法:用10μg/mL、50μg/mL的PM2.5處理HBE細(xì)胞,設(shè)立對(duì)照組,用10μM/L Cr⁶⁺作為陽(yáng)性對(duì)照,染毒HBE細(xì)胞24 h,應(yīng)用熒光定量PCR和蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)癌基因（c-myc、c-fos、k-ras和p53）的基因和蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化;MAPK/PKC信號(hào)通路實(shí)驗(yàn)設(shè)立空白對(duì)照組、PM2.5實(shí)驗(yàn)組、抑制劑組（p38MAPK抑制劑、ERK1/2、PKCα抑制劑）、PM2.5+抑制劑組,用抑制劑預(yù)先處理HBE細(xì)胞30min,接著用無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24h作為抑制劑實(shí)驗(yàn)組,用PM2.5染毒24h作為PM2.5實(shí)驗(yàn)組;用抑制劑預(yù)先處理HBE細(xì)胞30min,然后用50μg/mL的PM2.5染毒24h作為PM2.5+抑制劑實(shí)驗(yàn)組,應(yīng)用熒光定量PCR和western blot檢測(cè)p38MAPK、ERK1... 

【文章來(lái)源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第1章 PM2.5對(duì)HBE細(xì)胞癌基因的影響
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 細(xì)胞
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
        1.1.4 主要試劑及配制
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與PM2.5處理
        1.2.2 PM2.5處理HBE細(xì)胞后目的基因表達(dá)水平的檢測(cè)
        1.2.3 PM2.5處理HBE細(xì)胞后目的蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)
        1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 Q-PCR條件探索及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        1.3.2 PM2.5對(duì)目的基因表達(dá)水平的影響
        1.3.3 PM2.5對(duì)目的蛋白表達(dá)水平的影響
    1.4 討論
第2章 信號(hào)通路對(duì)HBE細(xì)胞癌基因表達(dá)的影響
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 只要試劑及配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與處理
        2.2.2 引物的合成
        2.2.3 引物擴(kuò)增效率及特異性的驗(yàn)證
        2.2.4 Q-PCR檢測(cè)信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)水平
        2.2.5 Western blot檢測(cè)信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 Q-PCR條件探索及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        2.3.2 PM2.5對(duì)細(xì)胞信號(hào)通路基因表達(dá)的影響
        2.3.3 PM2.5對(duì)細(xì)胞信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響
        2.3.4 p38MAPK抑制劑對(duì)目的基因表達(dá)水平的改變
        2.3.5 ERK1/2抑制劑對(duì)目的基因表達(dá)水平的改變
        2.3.6 PKCα抑制劑對(duì)目的基因表達(dá)水平的改變
    2.4 討論
第3章 PM2.5對(duì)HBE細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)譜研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 主要試劑及配置
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與處理
        3.2.2 樣品預(yù)處理
        3.2.3 酶切
        3.2.4 TMT標(biāo)記和分組
        3.2.5 分組分
        3.2.6 樣品上機(jī)檢測(cè)
        3.2.7 差異蛋白的KEGG和 GO分析
        3.2.8 生物信息學(xué)軟件分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 差異表達(dá)蛋白的篩選
        3.3.2 KEGG分析差異蛋白
        3.3.3 GO富集分析差異蛋白
        3.3.4 差異蛋白的venny圖分析
        3.3.5 WGCNA分析
    3.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述 PM2.5 暴露致肺癌的相關(guān)基因和蛋白質(zhì)改變及其分子機(jī)制
    參考文獻(xiàn)
主要英文縮略語(yǔ)索引
作者攻讀學(xué)位期間的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3165525