禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖�。≧eticuloendotheliosis,RE）是由反轉(zhuǎn)錄病毒科的網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒（REV）引起的一系列病理性綜合征,其主要感染宿主為火雞、雞、鴨、鵝以及其他禽類。REV引起的病理癥狀主要包括急性網(wǎng)狀細(xì)胞瘤、矮小綜合征以及慢性淋巴組織瘤等。由于REV作用的靶細(xì)胞主要為淋巴細(xì)胞和網(wǎng)狀細(xì)胞,能夠損害機(jī)體的免疫功能,降低機(jī)體的免疫應(yīng)答能力,尤其是幼禽感染REV時(shí),會發(fā)生明顯的免疫抑制,繼發(fā)其它感染。目前,對RE尚無有效的防控手段,只能通過對REV抗原或抗體檢測,淘汰病雞,凈化雞群。為了準(zhǔn)確了解REV感染情況,及早淘汰患病雞,阻止REV傳播,減少REV對家禽養(yǎng)殖造成的損失,具有操作簡單快速、敏感性高等優(yōu)點(diǎn)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是最佳檢測手段,但由于REV的高變異性,現(xiàn)有的試劑盒難以準(zhǔn)確地檢測并且價(jià)格昂貴,無法適于大規(guī)模的臨床使用。因此,建立操作簡單快速、敏感性高、特異性強(qiáng)并且成本低適用于大規(guī)模臨床使用的REV抗體ELISA檢測試劑盒具有重要意義。REV-Gp90蛋白位于病毒囊膜的表面,含有線性表位和構(gòu)象表位,能夠激發(fā)宿主產(chǎn)生中和抗體,是病毒的免疫顯性蛋白�？乖砦皇强�... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

REVHis-env蛋白SDS-PAGE分析

基于抗原表位的禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒ELISA抗體檢測試劑盒的研制22圖2純化REVHis-env蛋白SDS-PAGE分析Fig2SDS-PAGEanalysispurificationofthepurifiedREVHis-envproteinM:Proteinladder;1:未純化上清;2:未純化蛋白;3:純化蛋白3.1.3REVHis-env蛋白的WesternBlot檢測分析分別使用抗His標(biāo)簽單克隆抗體、REV抗體陽性血清為一抗，對目的蛋白進(jìn)行WesternBlot分析；結(jié)果顯示，兩種抗體均能與目的蛋白發(fā)生反應(yīng)，REVHis-env蛋白表達(dá)成功且具有良好的反應(yīng)原性（圖3）。圖3WesternBlot分析REVHis-env蛋白Fig3AnalysisofREVHis-envproteinbyWesternblotindifferentantibodiesM:Proteinladder;1:REVHis-env蛋白3.1.4REVHis-env蛋白聯(lián)合佐劑免疫動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果用制備的REV多克隆抗體作為一抗，分別使用REVHis-env蛋白和REV接毒細(xì)胞蛋白作為抗原，進(jìn)行Westernblot分析；結(jié)果顯示，兩種抗原蛋白均能與抗體發(fā)生反應(yīng)，制備的REV多克隆抗體具有良好的反應(yīng)原性(圖4)。

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文25圖5REV串聯(lián)表位蛋白表達(dá)的SDS-PAGE分析圖Fig5SDS-PAGEanalysisoffusiongeneexpressionproductofREVtandemepitopesproteinM:Proteinladder;1:表達(dá)上清;2:表達(dá)包涵體3.2.4REV表位串聯(lián)蛋白的純化與復(fù)性大量誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá)后，進(jìn)行蛋白純化及復(fù)性，SDS-PAGE檢測蛋白是否能夠穩(wěn)定表達(dá)，以及蛋白的純化與復(fù)性效果；結(jié)果顯示，目的蛋白能夠穩(wěn)定表達(dá)，且目的蛋白純化效果較好，蛋白復(fù)性后濃度有所降低（圖6）。圖6REV表位串聯(lián)蛋白純化復(fù)性后的SDS-PAGE分析Fig6SDS-PAGEanalysispurificationofthepurifiedandrenaturedREVtandemepitopesproteinM:Proteinladder;1:總蛋白;2:純化蛋白;3:復(fù)性蛋白3.2.5復(fù)性REV表位串聯(lián)蛋白濃度測定使用BCA蛋白濃度測定法測定復(fù)性蛋白的濃度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出復(fù)性表位串聯(lián)蛋白濃度為400μg/mL。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3101301