角蛋白為細(xì)胞提供了必要的結(jié)構(gòu)支持,能夠調(diào)控細(xì)胞黏著及細(xì)胞生長,并且能夠抵御各種脅迫。角蛋白纖維深度參與了細(xì)胞的各種生命活動,包括:細(xì)胞信號傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞脅迫響應(yīng)等重要細(xì)胞生命過程,不僅如此,角蛋白纖維還與細(xì)胞遷移相關(guān)。角蛋白8（K8）和角蛋白18（K18）是HUVEC細(xì)胞中含量最為豐富的角蛋白,K8及K18的磷酸化是角蛋白翻譯后修飾的重要方式之一。我們發(fā)現(xiàn),K8及K18的磷酸化能夠調(diào)節(jié)角蛋白的可溶性,并且參與角蛋白網(wǎng)絡(luò)的組裝調(diào)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)室研究表明,對映-貝殼杉烷二萜leukamenin E是一種具有顯著抗腫瘤活性的植物次生代謝產(chǎn)物,對多種癌細(xì)胞株顯示了生長抑制、分化及凋亡誘導(dǎo)效應(yīng),但分子機(jī)制還很不明確。因此,進(jìn)一步探究該化合物對細(xì)胞角蛋白的影響對于闡明其作用機(jī)制以及抗癌新藥的發(fā)現(xiàn)具有重要的科學(xué)價(jià)值。本文以對映-貝殼杉烷型二萜化合物leukamenin E為受試藥物,用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC）和人胰腺癌細(xì)胞（Pancreatic cancer cells,Panc-1）為受試細(xì)胞株,通過MTT法、A... 

【文章來源】：西北師范大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

LeukameninE的分子結(jié)構(gòu)圖；Fig.2-1ChemicalstructureofleukameninE.

3結(jié)果與分析203結(jié)果與分析3.1LeukameninE對細(xì)胞活力及凋亡的影響目前已有報(bào)道表明，細(xì)胞凋亡可能伴隨著角蛋白的分解和中等纖維的重組[87]。為了排除leukameninE誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡引發(fā)的角蛋白的分解和中等纖維的重組干擾后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，我們分別通過MTT法和AO/EB染色法檢查了不同濃度的leukameninE對細(xì)胞活力和細(xì)胞凋亡的影響情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對照組相比，leukameninE在2.0-4.0μmol/L時(shí)對HUVEC和Panc-1細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用（圖3-1），但經(jīng)leukameninE處理的細(xì)胞的凋亡率低于3.2%，壞死率低于1.2%（圖3-2）。因此，我們認(rèn)為如此低的凋亡條件并不會引起角蛋白的分解和中等纖維的重組，所以在本文中，我們選擇在實(shí)驗(yàn)中使用2.0-4.0μmol/L的leukameninE用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。圖3-1MTT法檢測leukameninE及DMSO對HUVEC和Panc-1細(xì)胞活力的影響Fig.3-1CellviabilityassayofHUVECandPanc-1treatedwithleukameninE(2μmol/L,2.5μmol/L,3μmol/L,3.5μmol/Land4μmol/L)andDMSOfor24hbasedonMTT.

3結(jié)果與分析21圖3-2通過AO/EB雙染檢測leukameninE對HUVEC和Panc-1細(xì)胞凋亡和壞死的影響(A)通過AO/EB雙染leukameninE處理的HUVEC和Panc-1細(xì)胞來區(qū)分細(xì)胞凋亡狀態(tài)，根據(jù)不同的染色結(jié)果可以觀察到四種類型的細(xì)胞。(B)用leukameninE處理24h的HUVEC和Panc-1細(xì)胞中的凋亡率。(C)用leukameninE處理24h的HUVEC和Panc-1細(xì)胞中的壞死率。圖像來自至少三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的典型細(xì)胞顯示的數(shù)據(jù)代表。三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(S.D.)。Fig.3-2EvaluationofapoptosisofHUVECandPanc-1cellstreatedwithleukameninEbyAO/EBdoublestaining.FourtypesofcellswereobservedbyAO/EBstaining(A)EvaluationofapoptosisofHUVECPanc-1cellstreatedwithleukameninEbyAO/EBdoublestaining.FourtypesofcellswereobservedbyAO/EBstainingasindicatedbythearrowsinthepictures.(B)ApoptoticrateinHUVECandPanc-1cellstreatedwithleukameninEfor24h.(C)NecroticrateinHUVECandPanc-1cellstreatedwithleukameninEfor24h.Imagesrepresenttypicalcellsfromatleastthreeindependentexperiments.Thedatashownrepresentthemeans±standarddeviation(S.D.)ofthreeindependentexperiments.3.2LeukameninE獨(dú)立于微絲、微管抑制角蛋白組裝3.2.1HUVEC具有獨(dú)立于微絲、微管的角蛋白纖維在許多細(xì)胞類型中，某些類型的細(xì)胞骨架解聚通常會伴隨著另一個(gè)細(xì)胞骨架

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3045919