發(fā)布時(shí)間：2021-02-13 01:03

　　海洋具有廣闊的環(huán)境,約占地球面積的70%,高鹽、高壓、低溫、低氧,弱光照甚至無(wú)光照等獨(dú)特的條件塑造了大量不同于陸地生物的種群與群落。海洋來(lái)源的微生物由于身處海洋獨(dú)特環(huán)境中,生理結(jié)構(gòu)具有特異性,因此產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物可具有新穎的結(jié)構(gòu)和獨(dú)特的活性。放線菌的次生代謝產(chǎn)物約占數(shù)萬(wàn)種微生物來(lái)源的生物活性物質(zhì)的70%,目前在醫(yī)藥領(lǐng)域和農(nóng)業(yè)領(lǐng)域應(yīng)用廣泛,主要是抗菌、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)的藥物及產(chǎn)品,具有潛在的研究開(kāi)發(fā)價(jià)值。本文對(duì)中國(guó)渤海灣和北極地區(qū)的海底沉積物中的放線菌進(jìn)行初步研究,主要研究結(jié)果如下:1、利用13種分離培養(yǎng)基對(duì)渤海灣和北極地區(qū)的沉積物進(jìn)行放線菌的分離,從8份濕土樣品中分離得到75株放線菌,從8份干土樣分離得到81株放線菌。通過(guò)菌落特征篩選,成功完成PCR擴(kuò)增的有42株放線菌,這些放線菌歸屬于14個(gè)屬,其中優(yōu)勢(shì)菌屬為鏈霉菌屬（Streptomyces）。菌株B200012、B200099的16S rRNA基因序列與有效菌株Agromyces iriomotensis IY0720^T（AB546308）、Pseudolysinimonas kribbensis MSL1... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
符號(hào)說(shuō)明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 海洋放線菌
        1.1.1 放線菌概述
        1.1.2 放線菌的分類及鑒定
            1.1.2.1 形態(tài)特征觀察
            1.1.2.2 化學(xué)分類
            1.1.2.3 分子分類
        1.1.3 海洋放線菌的來(lái)源、種類及分布
            1.1.3.1 海底沉積物中的放線菌
            1.1.3.2 海洋動(dòng)植物共附生的海洋放線菌
            1.1.3.3 海水中的放線菌
        1.1.4 極地海洋環(huán)境來(lái)源放線菌
    1.2 農(nóng)業(yè)病原菌
        1.2.1 黃瓜枯萎病菌
        1.2.2 黃瓜霜霉病
        1.2.3 黃瓜白粉病
        1.2.4 蘆筍莖枯病菌
    1.3 放線菌研究方法與發(fā)展歷程
        1.3.1 傳統(tǒng)培養(yǎng)方法
        1.3.2 分子生物學(xué)技術(shù)
        1.3.3 其他技術(shù)
    1.4 海洋活性物質(zhì)在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域應(yīng)用現(xiàn)狀
        1.4.1 國(guó)外研究現(xiàn)狀
        1.4.2 國(guó)內(nèi)研究現(xiàn)狀
    1.5 研究意義及研究?jī)?nèi)容
        1.5.1 研究意義
        1.5.2 研究?jī)?nèi)容
    1.6 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 樣品來(lái)源
        2.3.2 培養(yǎng)基的配制
            2.3.2.1 分離培養(yǎng)基
            2.3.2.2 保存培養(yǎng)基
            2.3.2.3 發(fā)酵培養(yǎng)基
            2.3.2.4 檢定菌培養(yǎng)基
            2.3.2.5 優(yōu)化培養(yǎng)基
        2.3.3 土壤樣品處理
        2.3.4 培養(yǎng)基的制備
        2.3.5 菌株的分離與純化
        2.3.6 菌株的保藏
        2.3.7 菌株DNA提取與16S rDNA基因的PCR擴(kuò)增和序列分析
            2.3.7.1 DNA提取
            2.3.7.2 16 S rDNA基因的PCR擴(kuò)增及凝膠電泳
        2.3.8 序列測(cè)定和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建
        2.3.9 發(fā)酵粗提物制備
        2.3.10 HPLC分析
        2.3.11 抗菌活性的測(cè)定
        2.3.12 確定目標(biāo)菌株
        2.3.13 基于OSMAC策略的初步發(fā)酵條件探索與優(yōu)化
        2.3.14 發(fā)酵液的粗提取、HPLC分析、抗菌活性測(cè)定
        2.3.15 添加微量稀土元素和氨基酸進(jìn)一步優(yōu)化發(fā)酵條件
        2.3.16 最佳發(fā)酵條件確定與大田試驗(yàn)驗(yàn)證
        2.3.17 最適條件下的擴(kuò)大發(fā)酵
        2.3.18 化合物的分離純化
        2.3.19化合物的結(jié)構(gòu)確定與活性實(shí)驗(yàn)
        2.3.20 化合物的最小抑菌濃度測(cè)定
3 結(jié)果與分析
    3.1 放線菌在不同培養(yǎng)基及樣品中的分布
    3.2 多樣性分析
    3.3 抗菌活性篩選結(jié)果
    3.4 HPLC液相分析結(jié)果
    3.5 確定目標(biāo)菌株
    3.6 基于OSMAC策略的初步發(fā)酵條件確定
    3.7 添加微量元素,確定最佳發(fā)酵條件
    3.8 大田試驗(yàn)
    3.9 化合物的分離
    3.10 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定與解析
        3.10.1 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定
        3.10.2 波譜數(shù)據(jù)
    3.11 單體化合物的抗菌活性篩選
4 討論
    4.1 分離培養(yǎng)基的選擇對(duì)海洋來(lái)源放線菌多樣性的影響
    4.2 基于OSMAC策略對(duì)放線菌B200036 發(fā)酵條件優(yōu)化的影響
    4.3 主要?jiǎng)?chuàng)新之處
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文及成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[10]低溫冷害對(duì)露地蔬菜生產(chǎn)的影響及補(bǔ)救措施[J]. 宋繼昌.  黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(02)

碩士論文
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[2]分離篩選具有抑菌活性的海洋放線菌[D]. 伍國(guó)梁.青島大學(xué) 2013
[3]北極海水中可培養(yǎng)寡營(yíng)養(yǎng)細(xì)菌多樣性研究[D]. 和振花.華中師范大學(xué) 2011
[4]天然海魚(yú)共附生放線菌農(nóng)用活性菌株的分離、篩選及分類鑒定[D]. 杜丹超.福建農(nóng)林大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3031720