二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）是一種極為重要的n-3多不飽和脂肪酸,具有抗癌、抗炎、預(yù)防心血管疾病的作用,并能促進(jìn)嬰幼兒神經(jīng)系統(tǒng)和視覺(jué)系統(tǒng)的發(fā)育和成熟。而裂殖壺菌（Schizochytrium limacinum）是屬于破囊壺菌科的一類海洋真菌,體內(nèi)積累了大量的DHA,是目前已知的DHA含量最高的海洋真菌,因其具有的重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值而備受人們關(guān)注。因此通過(guò)對(duì)裂殖壺菌DHA合成途徑的研究,利用生物工程方法來(lái)最大限度提高裂殖壺菌DHA產(chǎn)量,具有極為重要的生物學(xué)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。CRISPR/Cas9是一種高效準(zhǔn)確的新興基因編輯技術(shù),目前已應(yīng)用該技術(shù)成功在多個(gè)物種實(shí)現(xiàn)基因編輯。本文旨在以裂殖壺菌為研究對(duì)象,通過(guò)構(gòu)建相應(yīng)的CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng),對(duì)裂殖壺菌中與脂肪酸合成相關(guān)的基因進(jìn)行敲除,并替換為Zeocin抗性基因片段,初步探索CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)在海洋真菌裂殖壺菌中的應(yīng)用,以及相關(guān)基因敲除后對(duì)脂肪酸產(chǎn)量的影響。據(jù)此,本實(shí)驗(yàn)的主要內(nèi)容及研究結(jié)果如下:（1）為了確定本實(shí)驗(yàn)的選擇標(biāo)記基因,從而能夠成功篩選出轉(zhuǎn)化菌株,本實(shí)驗(yàn)選取了基因工程中常... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

DHA結(jié)構(gòu)圖

圖 1.2 EPA 結(jié)構(gòu)圖Fig 1.2 Schematic representation of EPA和脂肪酸的生理功能肪主要是植物油脂和動(dòng)物油脂。其中動(dòng)形式存在，而植物油脂中雖含有不飽和n-3 多不飽和脂肪酸的含量卻微乎其微不飽和脂肪酸對(duì)于人體的健康、營(yíng)養(yǎng)和]。丹麥的研究人員發(fā)現(xiàn)，格陵蘭島上居住于其他周邊國(guó)家居民，主要原因是愛(ài)斯飽和脂肪酸[6]。這一發(fā)現(xiàn)引起人們對(duì) n其中的 DHA 和 EPA 做了大量研究，發(fā)統(tǒng)和視覺(jué)系統(tǒng)的發(fā)育,防止心血管疾病等

9圖 1.4 產(chǎn)膿鏈球菌 CRISPR/Cas9 干擾噬菌體或外源質(zhì)粒入侵示意圖[64]Fig1.4 Schematic of CRISPR/Cas9 mediated DNAdouble-strand breakCRISPR/Cas 系統(tǒng)大體上可以分為 3 大類型：Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型[65]。其中，Ⅰ型和Ⅲ型在介導(dǎo)外源 DNA 降解過(guò)程中需要多種 Cas 蛋白的參與，形成的切割復(fù)合體結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，Ⅱ型系統(tǒng)組分則相對(duì)簡(jiǎn)單，只需要一個(gè) Cas9 蛋白來(lái)切割DNA 雙鏈即可。一個(gè)簡(jiǎn)易的Ⅱ型 CRISPR/Cas 系統(tǒng)必定要含有 gRNA 和 Cas9，Cas9蛋白具有改造crRNA和破壞雙鏈DNA的雙重功能，位于gRNA 5’端的20 bp

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CRISPR/Cas:新一代基因編輯技術(shù)[J]. 黃妤,王世春.  生命的化學(xué). 2015(01)
[2]基于同源重組的裂殖壺菌遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建及驗(yàn)證[J]. 莊小燕,陳勝蘭,紀(jì)曉俊,徐嫻,任路靜.  微生物學(xué)報(bào). 2015(04)
[3]CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因組定點(diǎn)編輯技術(shù)[J]. 方銳,暢飛,孫照霖,李寧,孟慶勇.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2013(08)
[4]電轉(zhuǎn)化法構(gòu)建變形鏈球菌UA159 comD缺陷菌株[J]. 陳嬌,周智,尹一兵,張雪梅,李銳,李月恒,王勤花,黃雅靜.  中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志. 2011(04)
[5]用醋酸鋰法轉(zhuǎn)化巴氏畢赤酵母表達(dá)人核心蛋白聚糖[J]. 郝小夏.  山西醫(yī)藥雜志. 2010(05)
[6]真菌遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)研究進(jìn)展[J]. 鄭苗苗,張旭,侯琨,王占斌.  農(nóng)業(yè)科技與裝備. 2008(02)
[7]EPA、DHA對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的大鼠系膜細(xì)胞增殖及凋亡的影響[J]. 耿文靜,柳方娥,焦波,程艷娜.  山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2008(01)
[8]裂殖壺菌Schizochytrium sp.FJU-512細(xì)胞油脂的研究[J]. 張娟梅,江賢章,黃建忠.  福建師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2007(02)
[9]ECM830電穿孔儀在畢赤酵母電轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用[J]. 王永興,尉明皎,徐敬龍,金擴(kuò)世,胡仲明,金寧一.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2006(S1)
[10]1株裂殖壺菌(Schizochytrium sp.的分離鑒定[J]. 周茂洪,周林,趙肖為,余林靜,林娜.  微生物學(xué)通報(bào). 2006(04)



本文編號(hào)：3010603