水皰性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus,VSV）與狂犬病毒都屬于彈狀病毒科（Rhabdoviridae）,且該病毒為水皰病毒屬（Vesiculvirus）的原型。部分家畜如豬、牛、馬在感染了水皰性口炎病毒后,其臨床表現(xiàn)癥狀與口蹄疫和豬水皰疹極為相似,均有舌、唇、乳頭等部位出現(xiàn)水皰和潰爛的癥狀,因此該病在獸醫(yī)臨床診斷上也極易出現(xiàn)誤診。并且該病為人獸共患性傳染病,人類對此病毒易感,直接接觸與氣溶膠都是該病的傳播方式,其臨床表現(xiàn)為頭疼、發(fā)熱、惡心、無力等類似流感樣的癥狀。目前對水皰性口炎還沒有有效且可靠的治療方法,因此對該病的研究具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。由水皰性口炎病毒感染引起的水皰性口炎雖然對畜群的致死率不高,但是對畜群個體的生長發(fā)育造成的影響嚴(yán)重,對養(yǎng)殖業(yè)所造成的經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重。該病在各個國家都有發(fā)生,并且被包括美國在內(nèi)的多個國家列為必須上報的重點動物疫病,我國在2012-2020年國家中長期動物疫病防止規(guī)劃中將水皰性口炎列為13種重點防范的動物外來疫病之一。DNA甲基化是目前研究的最為成熟的一種表觀遺傳修飾,在調(diào)控基因表達(dá),維持染色體構(gòu)象等方面起著至關(guān)重要... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

VSV對細(xì)胞內(nèi)D

第二篇實驗內(nèi)容第一章DNMT1影響VSV的感染和復(fù)制16達(dá)量最高，然而實時熒光定量PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在細(xì)胞接種VSV后2、4、8h后，細(xì)胞內(nèi)Dnmt1基因轉(zhuǎn)錄水平明顯呈下降趨勢。如圖1.1。AB圖1.1VSV對細(xì)胞內(nèi)DNMT1基因表達(dá)的影響圖1.1A.以MOI=1對RAW264.7細(xì)胞接種VSV，WesternBlot檢測細(xì)胞內(nèi)6和12h后DNMT1蛋白表達(dá)量；B.RT-qPCR檢測細(xì)胞在接毒后2、4、8h后，細(xì)胞內(nèi)Dnmt1的轉(zhuǎn)錄水平變化。1.3.2RAW264.7細(xì)胞中Dnmt1基因沉默應(yīng)用慢病毒包裝技術(shù)，對RAW264.7細(xì)胞內(nèi)Dnmt1基因進(jìn)行沉默處理，實時熒光定量PCR檢測細(xì)胞內(nèi)Dnmt1的轉(zhuǎn)錄水平對比正常細(xì)胞下降了近80%；同時WesternBlot檢測細(xì)胞內(nèi)DNMT1蛋白的表達(dá)量遠(yuǎn)低于正常細(xì)胞。如圖1.2。AB圖1.2RAW264.7細(xì)胞中Dnmt1基因沉默結(jié)果圖1.2A.RT-qPCR檢測RAW細(xì)胞與構(gòu)建的細(xì)胞系RAW-△DNMT1中Dnmt1基因的轉(zhuǎn)錄水平；B.WesternBlot檢測RAW細(xì)胞與RAW-△DNMT1細(xì)胞系內(nèi)DNMT1蛋白表達(dá)量。*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001。

第二篇實驗內(nèi)容第一章DNMT1影響VSV的感染和復(fù)制18E圖1.3基因和蛋白水平阻斷DNMT1對VSV在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖的影響圖1.3A.RT-qPCR檢測檢測Thioguanine處理RAW264.7細(xì)胞后，以MOI=1接種VSV，細(xì)胞內(nèi)病毒P基因表達(dá)水平；B.TCID50實驗檢測Thioguanine處理RAW264.7細(xì)胞，以MOI=1接種VSV后，細(xì)胞上清液中VSV的滴度；C.以MOI=1向RAW和RAW-△DNMT1細(xì)胞中接種VSV后，RT-qPCR檢測細(xì)胞內(nèi)病毒P基因的表達(dá)水平；D.TCID50檢測RAW與RAW-△DNMT1細(xì)胞上清液中VSV的滴度；E.WseternBlot檢測RAW和RAW-△DNMT1細(xì)胞中病毒G蛋白的含量。*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001。1.4討論病毒在感染細(xì)胞的過程中可先后調(diào)控多種表觀遺傳因子的表達(dá)，從而達(dá)到可對細(xì)胞持續(xù)感染的目的[100-101]。而本實驗中，在RAW264.7細(xì)胞感染VSV后，細(xì)胞內(nèi)的DNMT1的含量在前12h內(nèi)呈現(xiàn)出明顯的升高現(xiàn)象，而感染24h時細(xì)胞內(nèi)DNMT1的含量相比12h時顯著降低，這可能是因為細(xì)胞的活力受到了病毒的破壞所導(dǎo)致，有待進(jìn)一步研究。同樣實時熒光定量PCR檢測結(jié)果中，細(xì)胞在接毒8h內(nèi)，Dnmt1基因的表達(dá)量則成下降趨勢。也就是說VSV感染細(xì)胞后Dnmt1基因的表達(dá)確實受到了病毒的調(diào)控，這個結(jié)果與之前相關(guān)文獻(xiàn)報導(dǎo)的結(jié)果一致。作為重要的表觀遺傳因子，Dnmt1基因的表達(dá)受到VSV的影響，同樣在藥物學(xué)失活DNMT1蛋白實驗中，硫鳥嘌呤作為DNMT1的抑制劑，不僅可以阻斷DNMT1的功能，同時還可以降解DNMT1。在硫鳥嘌呤處理細(xì)胞后，VSV在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制增殖水平受到了顯著的抑制而明顯低于正常細(xì)胞組，這說明DNMT1蛋白的失活顯著影響了VSV的復(fù)制增殖。而應(yīng)用慢病毒包裝技術(shù)對細(xì)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]DNA甲基化基因DNMT1的研究進(jìn)展[J]. 黃滔,周興路,毛曦軻,蘇天宇,陳晨晨,吳志浩.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2019(14)
[2]Ⅲ型干擾素抵抗寨卡病毒感染導(dǎo)致不良妊娠的機(jī)制[J]. 王晶晶,曹陽青,陳金鈴.  中國人獸共患病學(xué)報. 2019(02)
[3]豬水皰性口炎的分析診斷和防治措施[J]. 張曉鳳.  飼料博覽. 2018(08)
[4]豬水皰口炎病毒感染臨床癥狀與防治建議[J]. 馬守菊.  中國畜禽種業(yè). 2018(07)
[5]DNMT3b基因在骨髓瘤RPMI 8226細(xì)胞株中的表達(dá)及其生物學(xué)意義[J]. 王曉寧,姚建娜,王曉娟,孫春紅,郭彩利,陳穎,賀鵬程,張梅.  中國實驗血液學(xué)雜志. 2017(05)
[6]豬水皰性口炎的診斷與治療效果評價[J]. 袁江華.  中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2017(03)
[7]豬水皰性口炎的診斷與治療[J]. 周宏斌.  江西農(nóng)業(yè). 2017(05)
[8]豬常見疾病病理診斷與防控[J]. 高豐.  獸醫(yī)導(dǎo)刊. 2016(07)
[9]水皰性口炎研究進(jìn)展[J]. 孫洪正,徐自忠,周曉黎,董俊,花群義,高洪,范晴,江海天.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2007(10)
[10]水皰性口炎研究進(jìn)展[J]. 鄭增忍,王海霞,龔振華,張彥明.  中國獸醫(yī)雜志. 2005(07)

碩士論文
[1]輕度認(rèn)知障礙候選基因的DNA甲基化研究[D]. 劉桂利.寧波大學(xué) 2017



本文編號：2992370