精子發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程,這一過(guò)程需要生精細(xì)胞和睪丸體細(xì)胞的協(xié)同作用。睪丸生精小管中具有多種細(xì)胞,支持細(xì)胞作為對(duì)睪丸具有重要功能的一種體細(xì)胞,可形成血-睪屏障,分泌多種分泌因子,還可以為生殖細(xì)胞提供生物學(xué)上的支持,如果支持細(xì)胞的基因表達(dá)調(diào)控發(fā)生異常,可能會(huì)導(dǎo)致精子發(fā)生的障礙,從而導(dǎo)致雄性不育。研究表明,microRNAs（miRNAs）對(duì)支持細(xì)胞的增殖、分泌和凋亡具有一定調(diào)控作用。本實(shí)驗(yàn)室前期轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析,發(fā)現(xiàn)miRNA-34c和miRNA-449b在初生公牛和成年公牛的睪丸組織中差異表達(dá),我們推測(cè)miRNA-34c和miRNA-449b可能在公牛的精子發(fā)生過(guò)程中具有調(diào)控作用,但作用及其機(jī)制尚不清楚。本研究構(gòu)建miRNA-34c和miRNA-449b的干擾和過(guò)表達(dá)載體,采用EdU和qRT-PCR檢測(cè)鑒定了miRNA-34c和miRNA-449b對(duì)支持細(xì)胞增殖和分泌功能的影響,并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)和TUNEL,檢測(cè)了miRNA-34c和miRNA-449b對(duì)牛支持細(xì)胞細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果表明:miRNA-34c和miRNA-449b對(duì)睪丸支持細(xì)胞均有調(diào)控作用,其中:當(dāng)miRNA-34... 

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2 EdU法檢測(cè)牛支持細(xì)胞增殖

圖1.2.1A中結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,當(dāng)轉(zhuǎn)染miRNA-34c mimics時(shí),miRNA-34c的表達(dá)水平極顯著的提高（p<0.0001）,當(dāng)轉(zhuǎn)染miRNA-34c inhibitor后,miRNA-34c的表達(dá)水平顯著的降低（p<0.01）。從圖1.2.1B、C和D中可以看出,與對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染miRNA-34c mimics后,細(xì)胞增殖基因PCNA、BCL2和BCL2L2的表達(dá)水平降低（p<0.01）,而轉(zhuǎn)染miRNA-34c inhibitor后,細(xì)胞增殖基因PCNA、BCL2和BCL2L2的表達(dá)水平升高（p<0.01）。從圖1.2.1E中可以看出,miRNA-34c過(guò)表達(dá)時(shí),支持細(xì)胞分泌因子GDNF、BMP4和CXCL12的表達(dá)水平降低（p<0.05）,而miRNA-34c被抑制時(shí),結(jié)果與miRNA-34c mimics結(jié)果相反,其中,細(xì)胞分泌因子GDNF和CXCL12的表達(dá)水平均顯著升高（p<0.01）。從這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們可以看出,miRNA-34c抑制了初生牛睪丸支持細(xì)胞的增殖基因和分泌因子的標(biāo)的水平.通過(guò)F和G圖,我們可以看出,miRNA-34c過(guò)表達(dá)時(shí),雄激素結(jié)合受體ABP的表達(dá)含量降低,當(dāng)miRNA-34c被抑制時(shí),ABP含量升高。圖1.2.1 Mi RNA-34c對(duì)增殖相關(guān)基因和分泌因子的表達(dá)量的調(diào)控

圖1.2.1 Mi RNA-34c對(duì)增殖相關(guān)基因和分泌因子的表達(dá)量的調(diào)控向六孔板中加入等量的支持細(xì)胞,約1.3×105個(gè)細(xì)胞,并將細(xì)胞鋪布均勻,待細(xì)胞約長(zhǎng)至約70%至80%時(shí),進(jìn)行轉(zhuǎn)染,36h時(shí)用EdU方法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。圖1.2.2通過(guò)EdU檢測(cè)細(xì)胞增殖的的結(jié)果可以看出,miRNA-34c過(guò)表達(dá)后增殖的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少,而miRNA-34c被抑制后增殖的陽(yáng)性細(xì)胞信號(hào)增加。EdU的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和增殖基因的表達(dá)水平說(shuō)明miRNA-34c抑制了初生牛睪丸支持細(xì)胞的增殖。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]microRNA-132對(duì)腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞分泌細(xì)胞外基質(zhì)的調(diào)控作用[J]. 朱慧萍,蘇震,周宏偉,章慧娣,黃朝興.  溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2013(07)

博士論文
[1]MicroRNA-143對(duì)脂肪細(xì)胞分泌功能和膽固醇流出的影響及機(jī)制研究[D]. 邢鈺.中南大學(xué) 2012



本文編號(hào)：2992312